文献类型： 中文期刊

作者： 陈圣毅 ¹ ; 刘新富 ² ; 徐永江 ² ; 刘芝亮 ² ; 柳学周 ² ; 史宝 ² ; 王妍妍 ² ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院黄海水产研究所

2.中国水产科学研究院黄海水产研究所,农业部海洋渔业可持续发展重点实验室;上海海洋大学水产与生命学院;中国水产科学研究院黄海水产研究所,青岛市海水鱼类种子工程与生物技术重点实验室

关键词： 七带石斑鱼;类胰岛素生长因子-Ⅰ;成熟肽克隆;原核表达;生物活性分析

期刊名称： 水产学报

ISSN： 1000-0615

年卷期： 2013 年 37 卷 09 期

页码： 1290-1296

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 应用RT-PCR方法扩增七带石斑鱼类胰岛素生长因子-Ⅰ(esIGF-Ⅰ)成熟肽序列。该成熟肽序列由210个碱基组成,编码70个氨基酸,包括B-C-A-D 4个结构域。将此成熟肽片段导入原核表达载体pET-28a上,在IPTG诱导下成功在E.coli BL21(DE3)中融合表达。SDS-PAGE分析表明,融合蛋白大小为11 ku,在IPTG诱导后3 h表达量最高,占菌体总蛋白的51.8%,重组蛋白主要以包涵体形式存在。对重组蛋白进行变性、纯化和复性,获得了纯化的重组蛋白。Western-blotting免疫印迹分析表明,融合蛋白可特异性地被6×His抗体识别。细胞增殖实验表明,纯化的IGF-Ⅰ融合蛋白能促使人乳腺癌细胞MDA231细胞增殖,表明具有生物活性。