文献类型： 中文期刊

作者： 李治平 ¹ ; 陈明杰 ² ; 王耀冉 ¹ ; 宋盼盼 ¹ ; 常婷婷 ¹ ; 黄波 ² ; 赵妍 ² ;

作者机构： 1.上海海洋大学食品学院

2.上海市农业科学院食用菌研究所农业农村部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心上海市农业遗传育种重点实验室

关键词： 草菇;蛋白酶;分离;纯化

期刊名称： 食用菌学报

ISSN： 1005-9873

年卷期： 2021 年 006 期

页码： 24-30

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 将草菇（Volvariella volvacea）子实体在15℃放置36 h,按照液料比10∶1加蒸馏水提取粗蛋白酶液,经硫酸铵沉淀、DEAE FF离子层析柱和Superdex 75 Increase 10/300凝胶柱分离纯化,采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定该蛋白酶纯度和相对分子质量,并确定最适反应pH、最适温度和反应动力学常数,并探讨了不同金属离子和化学试剂对该蛋白酶活性的影响。结果表明:纯化后电泳纯蛋白酶D2-S4相对分子质量约为20000,最适pH为7.0,最适反应温度为40℃,米氏常数Km为1.68 g·L^-1,Vm为3.11μg·（mL·min）^-1;与对照组相比,除Ca²⁺处理外,其他处理均对该蛋白酶的活性影响存在显著性差异,其中Fe²⁺对该蛋白酶活性有增强作用,该蛋白酶对苯甲基黄酰氟（phenylmethylsulfonyl fluoride, PMSF）敏感,是一种丝氨酸蛋白酶,且β-巯基乙醇对其抑制效果明显;阳离子洗涤剂十六烷基三甲基溴化铵（hexadecyl trimethyl ammonium bromide, CTAB）和曲拉通X-100对该蛋白酶活性均有抑制,而离散型洗涤剂吐温-80对该蛋白酶有增强作用。