文献类型： 会议论文
第一作者： 徐永江
作者： 徐永江 1 ; 臧坤 1 ; 柳学周 2 ; 史宝 1 ; 陈圣毅 1 ;
作者机构： 1.中国水产科学研究院黄海水产研究所,农业部海洋渔业可持续发展重点实验室,山东青岛266071
2.上海海洋大学水产与生命学院,上海201306
关键词： 星突江鲽;胰岛素样生长因子Ⅰ;原核表达;生物活性
会议名称： 2014年全国海水养殖学术研讨会
主办单位： 中国水产学会
页码： 00000086-00000096
摘要： 根据星突江鲽(Platichthys stellatus)胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)的cDNA序列设计特异性引物扩增成熟肽片段,利用原核表达载体pET-28a成功构建了重组星突江鲽IGF-Ⅰ/pET28a质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)后经IPTG诱导可产生N端含6个组氨酸的重组蛋白.IGF-Ⅰ重组蛋白大小为12.1KD,37℃下用0.5mmol/L的IPTG诱导3h时目的蛋白表达量最高,占菌体总蛋白的39.8％,主要以包涵体形式存在.Western blotting免疫印迹表明IGF-Ⅰ重组蛋白均可被6×His抗体特异性识别.包涵体经6 mol/L盐酸胍变性、Ni2+离子亲和柱纯化和尿素梯度复性后,可获得高纯度的IGF-Ⅰ重组蛋白.细胞增殖实验结果显示0.6 μg/mL的IGF-Ⅰ重组蛋白能显著促进人胚胎肾细胞HEK293T的增殖而大于1.8μg/mL则表现出抑制作用.本研究成功构建了星突江鲽IGF-Ⅰ体外高效表达系统,并获得具有细胞水平生物活性的星突江鲽IGF-Ⅰ重组蛋白,结果可为深入探究IGF-Ⅰ在星突江鲽生长发育中的作用机制及研制高效绿色的促生长制剂提供基础资料.
分类号： S965.3
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