科研产出
芽胞杆菌工程菌株B9BD产表面活性素发酵培养基优化
《中国生物防治学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：生物农药“纹曲宁”的主要活性成分—枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis Bs916可产生多种脂肽类抗生素。前期研究发现，degU和bmyA基因的突变株B9?degU?bmyA（B9BD）可以高效合成表面活性素（Surfactin）。本研究通过对培养基主要成分的单因素筛选并利用Design expert软件优化了工程菌株B9BD高效发酵产生Surfactin的培养基组分。通过Plackett-Burman试验、中心组合试验（CCD）和响应曲面法（RSM）优化了发酵Surfactin的最优培养基配方：葡萄糖24.27 g/L，黄豆粉29.05 g/L，牛肉浸膏3 g/L,NH4NO3 4 g/L,L-亮氨酸2.36 g/L,KH2PO4 3 g/L,Na Cl 3 g/L,Fe SO4 0.02 g/L。在优化培养基中，B9BD产生Surfactin的量高达到（934.25±32.67）mg/L，是其在LB培养基产量的5.6倍。以上研究结果将为Surfactin的高效发酵和应用提供理论基础和技术支撑。
关键词： 枯草芽胞杆菌 表面活性素 Plackett-Burman试验 中心组合试验 响应曲面法
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非洲猪瘟病毒P30蛋白单克隆抗体制备、鉴定及阻断ELISA方法的建立
《中国农业科学 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：[背景]非洲猪瘟(ASF)于2018年8月在中国首次出现,对养猪业造成了巨大危害,损失惨重.目前尚无安全有效的疫苗用来预防ASF,于是建立快速特异的检测方法对于防控ASF提供了有效的手段.[目的]制备非洲猪瘟病毒(ASFV)特异性单克隆抗体,建立ASF快速特异性的检测方法.为ASF的检测和防控提供借鉴技术手段.[方法]构建表达载体pET-28a-P30,通过原核表达系统获得ASFV P30重组蛋白,以纯化的P30蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,经过细胞融合和细胞亚克隆制备出ASFV P30蛋白特异性杂交瘤细胞株;对P30蛋白进行截短表达,利用Western Blot和间接酶联免疫吸附试验(iELISA)鉴定单克隆抗体所对应的抗原表位;并利用制备的单克隆抗体建立非洲猪瘟阻断ELISA抗体检测方法.[结果]通过双酶切和PCR验证,结果显示构建出重组载体pET-28a-P30,经测序其序列未发生突变;IPTG诱导后,P30重组蛋白主要表达在包涵体中,分子量约为33 kD.纯化的P30蛋白与弗氏佐剂1:1混合免疫小鼠,3次免疫后,小鼠血清效价达到1:102 400,说明表达的蛋白具有良好的免疫原性.经细胞融合和亚克隆,获得8株P30蛋白特异性杂交瘤细胞,Western Blot和间接免疫荧光试验(IFA)检测获得的8株单抗均具有良好的反应性.叠加试验显示8株单克隆抗体均针对相同的抗原位点;截短表达P30蛋白不同片段,选取制备的2-12B单克隆抗体与不同的截短P30蛋白反应,显示单克隆抗体的抗原表位区为187-194aa.利用2-12B单克隆抗体并经过条件优化,成功建立了 ASF阻断ELISA抗体检测方法,检测了 190份临床样品,并与商品化非洲猪瘟ELISA抗体检测试剂盒进行对比,两方法阳性符合率为90.91%,总符合率为96.32%.[结论]本研究成功获得ASFV P30蛋白,经过iELISA、Western Blot和IFA筛选出反应性良好的特异性单克隆抗体8株,抗原识别表位区为187-194aa.并利用制备的单克隆抗体建立了特异性高,敏感性好的ASFV阻断ELISA抗体检测方法,为ASF的检测及其防控提供了手段和支撑.
关键词： 非洲猪瘟病毒 P30蛋白 单克隆抗体 抗原表位 阻断ELISA
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2种鹅星状病毒一步法双重RT-PCR检测方法的建立与应用
《江苏农业学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：为建立能同时快速鉴别新型鹅星状病毒和鹅星状病毒变异株的检测方法，根据新型鹅星状病毒的ORF2基因和鹅星状病毒变异株的ORF1a基因的保守区域序列，设计并合成2对特异性引物。通过优化反应体系及反应条件，建立了能同时检测2种鹅星状病毒的一步法双重RT-PCR检测方法。该方法可同时扩增出新型鹅星状病毒658 bp和鹅星状病毒变异株381 bp的特异性条带，对坦布苏病毒、鹅细小病毒、鹅副黏病毒、H9N2亚型禽流感病毒、大肠杆菌和沙门菌的扩增结果均为阴性，具有良好的特异性。对新型鹅星状病毒和鹅星状病毒变异株重组质粒的最低检测量分别是1μl 1.71×10~3拷贝和1μl 1.70×10~3拷贝，敏感性良好，并且具有良好的重复性。应用该方法对临床采集的雏鹅泄殖腔拭子进行检测，结果显示，124份样品中新型鹅星状病毒阳性率为45.16%,鹅星状病毒变异株阳性率为28.23%,2种鹅星状病毒均为阳性的占11.29%,与单一RT-PCR方法检测结果符合率为100.00%。本研究建立的一步法双重RT-PCR检测方法快速简便，特异性强、灵敏度高，可用于临床样品的鉴别诊断，该方法的建立对2种鹅星状病毒病的流行病学调查和有效防控以及混合感染的致病性研究具有重要意义。
关键词： 新型鹅星状病毒 鹅星状病毒变异株 一步法双重RT-PCR
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甘薯叶片中多酚成分及其抗菌活性研究
《食品安全质量检测学报 》 2022 北大核心
摘要：目的 提取分离纯化甘薯叶片中多酚的成分,并研究其抗菌活性。方法 采用Sephadex LH-20羟丙基葡聚糖凝胶柱色谱、液相色谱等方法,分离纯化甘薯叶片乙酸乙酯和正丁醇部位的多酚成分,根据波谱数据和文献对其结构进行鉴定;采用平板稀释法测定不同化合物对3种病原菌最小抗菌浓度;采用肉汤二倍稀释法测量不同化合物对3种病原菌的抑制率,并计算半数抗菌浓度。结果 从甘薯叶提取物中分离并鉴定出3个酚酸类单体化合物、2个黄酮类单体化合物,分别为咖啡酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸甲酯、3,4-二咖啡酰奎宁酸甲酯、槲皮素3-O-β-D-葡萄糖苷和山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖苷。5种化合物均具有不同程度的抗菌活性,其中咖啡酸对肺炎克雷伯菌抑制作用明显;山奈酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对金黄色葡萄球菌抑制作用明显; 3,4-二咖啡酰奎宁酸甲酯和槲皮素-3-O-β-吡喃葡萄糖苷对鲍曼不动杆菌抑制作用明显。结论 多酚成分是甘薯叶片抗菌作用的有效成分之一,具有作为天然抗菌剂应用于食品和医药领域的潜力。
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载叶黄素的鹰嘴豆分离蛋白-甜菊苷复合体系的稳定性
《江苏农业科学 》 2022 北大核心
摘要：为了提高叶黄素在功能食品及饮料应用中的稳定性,利用鹰嘴豆分离蛋白和甜菊苷为材料制备载叶黄素的复合体系,研究pH值、盐离子浓度、冻融处理、人工模拟胃肠液对鹰嘴豆分离蛋白-甜菊苷-叶黄素复合体系和鹰嘴豆分离蛋白-叶黄素复合体系稳定性的影响,以及复合体系在不同贮藏条件中的稳定性.结果表明,载叶黄素的鹰嘴豆分离蛋白-甜菊苷三元复合体系的耐盐性及耐酸性均高于载叶黄素的鹰嘴豆分离蛋白二元复合体系,且该三元复合体系在中碱性及低盐条件下的稳定性较好.冻融处理会破坏复合纳米颗粒结构,进而使体系失稳.贮藏温度对复合体系色泽的影响大于光照,复合体系适宜在4℃避光条件下贮藏.载叶黄素的鹰嘴豆分离蛋白-甜菊苷三元复合体系在胃肠液中的稳定性高于载叶黄素的鹰嘴豆分离蛋白二元复合体系,三元复合体系能更有效负载叶黄素而不被胃肠液中的消化酶降解.
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光照和湿度对西兰花硫苷代谢及生物活性物质的影响
《食品与发酵工业 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：为探索可有效提升鲜切西兰花生物活性成分的光照及湿度条件,首先在超市货架低温[(13±1)℃]条件下,研究了不同光照[光密度5~8、25~35、75~85μmol/(m2.s)]联合不同湿度(50% ~60%、70% ~80%、90% ~100%)条件对鲜切西兰花的保鲜效果.通过分析表型、感官评分、色泽、总硫代葡萄糖苷(硫苷)和总异硫氰酸酯(isothiocyanate,ITC)的含量,筛选出光密度25~35μmol/(m2.s)协同湿度70% ~80%条件可有效提升西兰花品质.然后,以此条件处理鲜切西兰花,以超市实际销售环境[光密度:5~8μmol/(m2.s);湿度:50% ~60%]为对照组,研究光照和湿度对西兰花硫苷代谢及生物活性物质的影响.结果表明,光密度25~35μmol/(m2.s)协同湿度70% ~80%条件可有效保持鲜切西兰花中主要的硫苷物质含量,同时保持较高的黑芥子酶活性和ITC含量;此外,该条件下的西兰花花球中总酚、花色苷、叶绿素及类胡萝卜素含量较高.因此,光密度25~35μmol/(m2.s)协同湿度70% ~80%条件可有效保持鲜切西兰花品质,并维持其组织硫苷等生物活性物质含量,为其贮藏和销售提供理论及技术支持.
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光合参数用于甘薯抗旱性评价的适用性研究
《江苏农业科学 》 2022 北大核心
摘要：通过使用20%聚乙二醇(PEG)-6000模拟干旱环境验证光合参数对于甘薯抗旱评价的适用性,并优化甘薯抗旱评价方法.结果表明,通过丙二醛(MDA)含量和相对含水量(RWC)变化值鉴定了3个甘薯栽培种的耐旱性,24、72 h干旱胁迫下甘薯抗旱性表现一致,均为潮薯1号抗旱性最强,徐薯18居中,福薯7-6最弱.分别测量3、24 h干旱胁迫处理下净光合速率(Pn)、气孔导度(Gs)、蒸腾速率(Tr)和胞间CO2浓度(Ci)4个光合参数的变化值,24 h干旱胁迫下光合参数的变化与MDA含量和RWC变化一致.相关性分析结果表明,4个光合参数与MDA含量、RWC均有极显著相关性,其中Ci与MDA含量、RWC的相关系数均最大,证明了4个光合参数均可作为抗旱评价指标.对24 h干旱胁迫下4个光合参数的变化值进行主成分分析,第1主成分的特征值为3.90,累计贡献率达到97.39%,基于主成分分析方法利用光合参数建立了甘薯抗旱性综合评价指数模型.
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灰飞虱脂肪酶LsLPS的原核表达及Ni-NTA纯化
《江苏农业学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：灰飞虱是危害中国水稻的3种主要稻飞虱之一.脂肪酶是脂肪代谢的关键酶,在昆虫发育、繁殖等生理活动中具有重要作用.为了深入研究脂肪酶(LsLPS)在灰飞虱生长发育中的功能,本研究克隆了LsLPS基因ORF序列,并进行了原核表达和His标签融合蛋白的纯化.结果显示,灰飞虱LsLPS开放阅读框长1293 bp,可翻译成430个氨基酸,含有信号肽序列和PF00151结构域.LsLPS连接到原核表达载体pET28a(+)-SUMO、pCold I后在表达菌株BL21(DE3)中主要以包涵体形式表达,连接到pET43.1a(+)后可在表达菌株BL21(DE3)中可溶性表达.采用pH 8.0、含20 mmol/L咪唑的磷酸缓冲液作为平衡液,Ni-NTA纯化LsLPS-pET43.1a(+)融合蛋白的纯度和产量相对较高.
关键词： 灰飞虱 脂肪酶 LsLPS基因 原核表达 Ni-NTA纯化
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江苏省秸秆综合利用途径现状及发展策略
《江苏农业科学 》 2022 北大核心
摘要：为保障江苏省秸秆综合利用工作再上新台阶,促进江苏省秸秆综合利用新发展,通过现场调研、走访座谈、文献查阅等调研方式,调研苏南苏州市太仓市、苏中扬州市高邮市、苏北连云港市赣榆区、南京市高淳区秋亚家庭农场等秸秆综合利用主体,南京骏圣生态农业有限公司、江苏省东海县农业农村局农机科、江苏常州汉森机械股份有限公司等秸秆收储运服务组织、秸秆农机具管理部门和生产企业等.结果表明,江苏省秸秆综合利用率已不低,但总体收益和产业化水平有待提高;秸秆还田离田机械保有量各地区间不平衡,秸秆还田深度不一;秸秆还田后对土壤、作物和环境等多元效应的基础研究薄弱;蔬菜秸秆综合利用也是秸秆综合利用的一部分,须引起重视;秸秆综合利用相关政策及管理体制机制滞后于现行发展,须改善.建议制定新政策,鼓励和刺激秸秆终端高值化产品创新与研发,提高秸秆离田利用率和产业化水平;政府扶持,推进秸秆收储运体系和社会服务体系建设,提高单位面积内秸秆还田离田机械配备量;加强基础研发,统筹提高秸秆还田多元效应,减少秸秆还田可能带来的农田面源污染等问题;完善政策,制定蔬菜秸秆综合利用管理机制,促进秸秆综合利用全面发展等.
关键词： 秸秆;综合利用;发展策略;秸秆还田;收储运农机设备
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