科研产出
从噬菌体抗体库中筛选抗Cry1Ac蛋白单链抗体
《细胞与分子免疫学杂志 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：目的:从Tomlinson J噬菌体抗体库中筛选人源化抗Cry1Ac蛋白单链抗体(scFv)并进行鉴定。方法:以Cry1Ac蛋白为抗原包被固相,经4轮"吸附-洗脱-扩增"过程后,挑取单克隆,用ELISA法测定特异性结合活性,并对其进行基因序列测定。结果:经过4轮筛选,获得了2株能与Cry1Ac蛋白特异性结合的阳性克隆。结论:利用噬菌体抗体库技术可以不经过免疫制备出高特异性的人源化抗Cry1Ac蛋白scFv,为Cry1Ac毒素蛋白检测提供了条件。
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Cre-loxp系统在构建大库容噬菌体抗体库中的应用
《江苏农业学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：以杂交瘤细胞技术为基础的单克隆抗体技术已经得到了广泛的应用,但此技术所得抗体要经过动物免疫、细胞融合以及克隆,选择周期长、过程复杂。近年来,噬菌体抗体(Phage antibody libraries)技术发展迅速,用该技术可以不经免疫即可得到大量的抗体,实现抗体的快速、大量制备。一个有效的抗体库至少要达到109的库容量,抗体库的库容量越高,抗体的亲和性越高。Cre-loxp体内重组系统可以有效增大抗体库的库容性,保证库多样性,因此为高容量抗体库的发展提供了有利的工具。本文介绍了抗体库、Cre-loxp系统以及其在构建大容量抗体库中的应用。
关键词： 免疫 噬菌体抗体库 Cre-loxp系统
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东方山羊豆液泡膜Na~+/H~+逆向转运蛋白基因的克隆与分析
《植物生理学通讯 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：采用RT-PCR及RACE的方法从东方山羊豆中克隆了一种新的Na+/H+逆向转运蛋白基因。该基因全长2280bp,开放阅读框为1626bp,编码542个氨基酸残基。预测该蛋白分子量为60.0kDa,可能有10个跨膜区域。RT-PCR检测结果表明,在NaCl胁迫条件下东方山羊豆GoNHX1基因可在根、茎、叶中诱导表达,在叶中的表达量随着处理时间的延长而逐渐增加,到24h表达量下降。
关键词： 东方山羊豆 Na+/H+逆向转运蛋白 GoNHX1 RACE
温度对多花黑麦草细胞壁成分变化的影响
《中国草地学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：研究了大田和温室两个温度条件对多花黑麦草早、晚熟品系细胞壁结构物质变化的影响。研究结果表明:不同刈割时期,温室条件早、晚熟品系的细胞壁结构物质含量分别高于大田条件早、晚熟品系;温室条件早、晚熟品系的干物质体外消化率分别低于大田条件;大田条件早、晚熟品系可溶性碳水化合物含量分别显著(P<0.05)高于温室条件早、晚熟品系;随着刈割时期的推移,两个温度条件的两个品系可溶性碳水化合物含量变化呈低—高—低趋势。生育后期(生殖生长期)温室高温加速了木质化,温室条件早、晚熟品系饲用品质分别低于大田条件早、晚熟品系。相对早熟品系,晚熟品系保持了较高的饲用品质。
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光照度、施肥量及品种互作对不结球白菜硝酸盐含量和产量的影响
《江苏农业学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：采用方差分析和多元相关分析法,选用3个不结球白菜品种研究了光照度、施肥量和品种3因素互作对叶片和叶柄硝酸盐含量和产量的影响。结果表明:光照度、施肥量及品种对不结球白菜硝酸盐含量和产量都存在显著影响。随着光照度的增加,叶片和叶柄的硝酸盐含量显著下降,而产量明显增加,相关系数分别达-0.574、-0.314和0.508;同时,还发现若适当增加施肥量,能明显提高产量,但叶片和叶柄中硝酸盐积累也增多。施肥量与产量的相关系数达0.433。硝酸盐积累和产量增加的多少因品种不同而异。
关键词： 不结球白菜 光照度 施肥量 品种 硝酸盐含量 产量
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猪CACNA1S基因的PCR-SSCP检测及其对肉质性状的遗传效应分析
《江苏农业学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：应用PCR-SSCP技术检测126头金华和皮特兰猪杂交产生的金皮F2代试验猪群CACNA1 S基因的单核苷酸多态性,结合屠宰测定的肉质及屠体性状指标作遗传效应分析。结果表明:位点1S-46的BC、BD基因型对系水力存在极显著影响(P<0.01),BC基因型对肉色(L)存在显著影响(P<0.05),BB基因型对眼肌面积存在显著影响(P<0.05);位点1S-61的BC基因型、1S-70的AA基因型和1S-72的AA基因型对后腿重均存在极显著或显著影响(分别为P<0.01,P<0.05和P<0.01);位点1S-64的BB基因型对后腿温度存在极显著影响(P<0.01),对眼肌温度存在显著影响(P<0.05);位点1S-74的AB、AC、AE基因型分别对后腿重、背膘厚(中)以及系水力存在极显著影响(均为P<0.01)。
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动物源性人兽共患细菌病防控生物新制剂的研究Ⅰ.分泌抗大肠杆菌O157∶H7单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立
《江苏农业学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：将E.coliO157∶H7(EHEC-O157∶H7)用甲醛灭活、超声破碎,免疫BALB/c小鼠,制备免疫脾细胞;与SP2/0骨髓瘤细胞融合后,获得7株分泌抗E.coliO157∶H7单克隆抗体(mAbs)的杂交瘤细胞株,分别命名为F5、B8、E7、G9、G11、F1和C3,Ig亚类分别是IgG2aκ、IgG2aκ、IgG1κ、IgMκ、IgMλ、IgMκ和IgG2aκ。用间接ELISA检测,E7和F1细胞培养上清液的效价为1.6×103,腹水效价均为1×1011;C3、F5、B8、G9和G11细胞培养上清液的效价为1×10~2×102,腹水效价均为1×103。相加ELISA结果显示,F1、G9和G11 3株mAbs对应相同的抗原表位,而其它4株对应不同的抗原表位。用间接ELISA分析特异性,7株mAbs与某些其他血清型的大肠杆菌有交叉反应。Western blotting表明,C3、E7和F1 3株mAbs在蛋白分子量28×103处有特异性条带,而其它4株mAbs则未显示蛋白带。
关键词： 肠出血性大肠杆菌O157∶H7 单克隆抗体(mAb) 生物制剂 人兽共患病
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甘蓝型油菜Na~+/H~+逆向转运蛋白基因BnNHX2的电子克隆与序列分析
《江苏农业科学 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：盐胁迫是造成油菜产量下降的重要环境因子之一。Na+/H+逆向转运蛋白(Na+/H+antiporter,NHX)基因是目前世界植物耐盐性研究领域中最热门的基因,油菜NHX基因的克隆对提高油菜耐盐性的转基因育种意义重大。本研究利用电子克隆的方法,获得1个新的甘蓝型油菜NHX基因BnNHX2的全长cDNA,含有一个长为1 629 bp的开放阅读框架,编码542个氨基酸,分子质量约59.9 ku。生物信息学分析表明,BnNHX2蛋白属于跨膜蛋白,有12个跨膜区,是植物NHX超家族中的一员。通过同源比对和进化分析发现,BnNHX2基因与盐生植物盐芥ThNHX1基因高度同源,表明BnNHX2可能是油菜抵御盐胁迫的关键基因。
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