科研产出
锦鲤疱疹病毒单交叉引物等温扩增检测方法的建立
《水产学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：为建立一种操作简单、结果准确可靠、结果判定直观、成本低廉的现场快速检测方法,为锦鲤疱疹病毒(Koi herpes virus,KHV)疾病的防控提供技术支撑,根据KHV保守的DNA聚合酶(DNA polymerase,Sph)基因,设计一组单交叉扩增引物,以构建的Sph基因重组质粒作为标准DNA模板,采用单交叉引物等温扩增技术(single cross priming amplification,SCPA)进行扩增,优化反应体系的引物浓度组合、Mg2+浓度、d NTPs浓度、反应温度和时间,并结合核酸试纸条技术(nucleic acid test strip detection method),建立了快速可视化检测锦鲤疱疹病毒的单交叉引物等温扩增检测方法(KHV-SCPA)。结果表明,最佳引物浓度组合为引物2a1s1.0μmol/L,2a(2a-Bio)和3a(3a-FIT)各0.5μmol/L,4s和5a各0.6μmol/L,M g2+浓度为8.0 mmol/L,d NTPs浓度为1.2 mmol/L,反应温度63℃,时间60 min。本实验扩增产物经凝胶电泳呈现梯形条带,可特异性地检测出KHV,灵敏度较常规PCR方法提高约1 000倍。带有探针的反应产物采用核酸试纸条检测,在3~5 min内即可通过条带出现与否对反应产物进行可视化检测。KHV-SCPA检测方法不依赖昂贵的仪器设备与专业技术人员,可应用于锦鲤疱疹病毒的现场快速检测中,为锦鲤疱疹病毒病的准确快速诊断和有效防控提供了技术支撑。
关键词： 锦鲤疱疹病毒 交叉引物 等温扩增 核酸试纸条 检测
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酶联免疫吸附法测定水产品中甲基睾酮残留
《现代食品科技 》 2015 北大核心
摘要：建立了测定水产品中甲基睾酮(MT)残留的间接竞争酶联免疫吸附法(ic ELISA)。采用琥珀酸酐法衍生化制备半抗原MT17,进一步偶联钥孔血蓝蛋白(KLH)制备免疫原MT17-KLH,经动物免疫成功获取特异性识别MT的多克隆抗体(与其它结构类似物交叉反应小于1%)。优化确立了ic ELISA最佳检测条件:包被原浓度100μg/L,MT多克隆抗体稀释度1/1.2×105,抗体反应时间40 min,药物稀释液为PBS,水产样品经乙腈提取,N-丙基乙二胺吸附剂(PSA)分散固相萃取(DSPE)净化后用于ic ELISA测定。本方法的抑制中浓度IC50为3.48μg/L,检测线性范围为0.77~13.06μg/L。水产样品加标回收率为81.02~103.19%,相对标准偏差为4.46%~13.14%,测定结果与液相色谱-质谱联用法具有良好的相关性(R=0.9971)。本方法可用于水产品中甲基睾酮残留的快速测定。
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长江上游江津断面铜鱼鱼卵时空分布特征及影响因子分析
《水产学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：为了解金沙江一期工程蓄水前后的长江上游铜鱼繁殖情况,2011—2014年每年5月5日—7月10日,在江津江段通过使用圆锥网捕捞鱼卵,定点进行早期资源调查。结果显示,在采集到的8 014粒鱼卵中铜鱼鱼卵数量最多,占总鱼卵数的14.76%。调查期间江津江段铜鱼卵苗年均年总径流量为22.45×107尾。2011年—2014年江津江段铜鱼鱼卵日均密度各年平均值分别为8.41、10.57、1.32和3.18个/1 000 m3,2013年和2014年铜鱼鱼卵日均密度显著低于2011年和2012年。对铜鱼鱼卵日均密度与水文环境因子进行相关性分析,发现鱼卵日均密度与透明度呈显著负相关,而2013年和2014年透明度显著高于2011年和2012年。根据鱼卵发育时期和流速推测江津白沙至羊石及榕山至兆雅两个江段为铜鱼的主要产卵区域,该区域铜鱼产卵量约占铜鱼产卵总量的56.96%。研究表明,金沙江一期工程蓄水对铜鱼产卵行为产生了影响,建议工程运行期间应根据长江上游铜鱼的产卵条件进行科学调度,并禁止在产卵江段进行捕捞。
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响应面-满意度函数优化产羰基还原酶工程菌发酵条件
《食品与发酵工业 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：以实验室构建的产羰基还原酶的重组大肠杆菌为出发菌株,以菌体生长(A600nm)和羰基还原酶比活为响应值,对重组大肠杆菌产羰基还原酶的发酵条件进行优化。首先采用Plackett-Burman设计筛选出了4个关键影响因子:蛋白胨、酵母粉、磷酸盐和甘油;随后以Box-Behnken中心组合设计分别建立上述4个影响因子对A600nm和羰基还原酶比活的数学模型;最后通过满意度函数获得最佳发酵条件为:蛋白胨15.99 g/L,酵母粉31.06 g/L,磷酸盐105.37 mmol/L,甘油4.66 m L/L,Na Cl 0.4g/L,Mg SO40.2 g/L,接种量1%以及诱导时间8 h。在此优化条件下,重组大肠杆菌产羰基还原酶和菌体生长能力得到了较大的提升,羰基还原酶比活由优化前的1.031 U/mg提高到了1.706 U/mg,提高了65%。
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罗非鱼精养池塘水质变化规律和沉积物产污系数研究
《环境科学与技术 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：试验从水质及沉积物2个方面对罗非鱼精养池塘污染情况进行了研究和分析。结果表明,水质指标的时间尺度聚类分析和主成分分析都显示为3个子系统类型,因此可把罗非鱼精养过程归分为3个时期,即养殖前、中、后期。水质各指标含量值在养殖前中期较为平稳,后期波动较大。判别分析显示,养殖前期与NO3--N指标正相关性较为显著,与Chl.a、NO2--N成负相关;养殖中期主要与TP成正相关,与TN、NH4+-N成负相关;养殖后期与TN正相关性较为明显。沉积物检测结果表明,罗非鱼精养池塘沉积物中有机质、总氮、总磷、有效磷和氮磷比理化指标含量值的变化范围分别为:35.25%~73.09%、0.269%~0.773%、0.078%~0.219%、3.242~14.540μg/g和2.665~4.175,由面积法计算的罗非鱼精养池塘沉积物中干泥、有机质、总氮、总磷和有效磷产污系数值的变化范围分别为9.904~47.686 kg/m2、11.068~17.680 kg/m2、0.084~0.151 kg/m2、0.025~0.053 kg/m2和0.070~0.422 g/m2。同其他研究的比较发现,养殖池塘沉积物产污含量与养殖的水产动物种类、养殖模式及所处的环境条件有很大关系。该研究为罗非鱼精养池塘养殖环境的研究提供了基础的数据支撑。
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云纹石斑鱼心脏细胞系的建立与鉴定
《农业生物技术学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：鱼类细胞系在鱼类病毒学及功能基因组学方面发挥着重要作用。云纹石斑鱼(Epinephelus moara)是一种具有重要养殖价值的海水鱼类,尚未见细胞系建立的报道。本研究以云纹石斑鱼的心脏组织为材料,建立了云纹石斑鱼心脏细胞系(epinephelus moara heart cell line,EMH)。细胞系所用的培养基是在L15基本培养基中添加了HEPES(4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid),抗生素,胎牛血清(fetal bovine serum,FBS),β-巯基乙醇(2-Mercaptoethanol,2-ME)和碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,b FGF)的完全培养液。EMH细胞已传至20多代,由成纤维样细胞和上皮样细胞组成。本研究检测了温度及FBS浓度对EMH细胞生长的影响。EMH细胞在18~30℃能正常生长,其最适生长温度为30℃,在36℃时不能正常生长。FBS浓度在10%~20%细胞均能快速生长,最适FBS浓度为15%。染色体分析表明,具有正常二倍体染色体数目(2n=48)的细胞所占的比例为62%。用脂质体法将含增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因的质粒载体p EGFP-N3转入EMH细胞后,EGFP成功表达。EMH细胞系的建立将为病毒的分离、鉴定和功能基因的研究奠定基础。
关键词： 云纹石斑鱼 细胞系 核型 增强绿色荧光蛋白(EGFP)
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固定化反硝化技术对模拟养殖水的处理效果
《水处理技术 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：采集池塘底泥,以硝酸盐作为惟一的碳源,反复培养、驯化一定时间,从而筛选出反硝化菌。在泵的作用下,将含有反硝化菌的培养液通过活性炭柱,持续12小时,使得培养液中的反硝化菌完全固定在活性炭颗粒上,从而形成反硝化菌活性炭柱(即固定化反硝化菌)。人工配制质量浓度1、10和20 mg/L的硝酸盐模拟养殖水,在泵的作用下分别通过反硝化菌活性炭柱,并且每天监测出水水质的硝酸盐含量,实验运行3周。结果表明,1 mg/L硝酸盐的模拟养殖水在第五天出水水质得到了明显改善,硝酸盐去除率达到了80%以上;20 mg/L硝酸盐的模拟养殖水在第六天出水水质得到了明显改善,硝酸盐去除率达到了80%以上;在20 mg/L的浓度组中在第7天硝酸盐去除率达到了80%以上。由此可见,模拟养殖水中硝酸盐的浓度越低,固定化反硝化菌对其去除效果越好,达到去除效果稳定状态所需的时间越短。另外,本文还研究了酸碱环境和温度对固定化反硝化菌去除硝酸盐的影响。结果表明,固定化反硝化菌去除硝酸盐的适宜酸碱环境是pH为6~7,适宜的温度在20~35℃,而且对质量浓度为1 mg/L的硝酸盐模拟养殖水去除效果最佳。
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南海新建钢质罩网渔船渔获组成及渔场分析
《南方水产科学 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：根据2012年8月~2014年6月"粤电渔42212"渔船的生产数据,分析了南海区大型钢质灯光罩网渔船的渔获组成和渔场渔期。结果显示,主要渔获种类为鸢乌贼(Sthenoteuthis oualaniensis)、鲹科(Carangidae)、鲭科(Scombrida)、枪乌贼(Loliginidae)和带鱼(Trichiurus japonicus),分别占总渔获产量的69.8%、12.6%、7.3%、3.9%和3.5%。作业渔场可分为近海陆架区和外海深水区,其中陆架区渔获种类相对较多,包括科、枪乌贼、带鱼、鲭科等;而深水区渔获以鸢乌贼为主,其他种类相对较少。近海陆架区作业月份为8月至翌年2月,每月作业1~20 d,平均作业10 d,渔获率为370.5~3 670.0 kg·d-1,平均渔获率1 152.0 kg·d-1。深水区作业集中在2月~6月,每月作业1~30 d,平均作业13 d,渔获率为1 000~10 190 kg·d-1,平均渔获率4 071.3 kg·d-1。相对于近海陆架区,灯光罩网渔业在外海深水区渔获效率更高、产量更大,在现有资源条件下应大力发展大型钢质灯光罩网渔船,积极开发南海外海渔业资源。
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有机碳驱动的人工基质表面菌群结构组成及其动态变化
《海洋环境科学 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：本实验采用平板计数和末端限制性片段长度多态性技术(T-RFLP),分析了有机碳源添加对凡纳滨对虾养殖系统中人工基质(筛绢网)表面生物膜菌群结构组成及其动态变化的影响。研究表明,当人工基质表面菌膜成熟时,实验组人工基质表面异养菌数量高于对照组,但没有显著性差异;弧菌数及弧菌占总异养菌的比例分别极显著低于对照组91.85%和96.98%(p<0.01)。T-RFLP图谱分析表明,两处理组中126、432、434、436、485、487和488 bp等T-RF相对丰度变化显著;其中,29 d时实验组菌群种类丰富度指数和Shannon-Weiner指数分别高于对照组100%和33.9%。移动窗口分析表明,对照组菌群结构变化率△t为23.2%±26.38%,高于实验组的12.4%±0.3%。综上可得,有机碳驱动不仅能够促进异养菌的生长,竞争性抑制弧菌的增殖,而且可以提高养殖池塘中人工基质表面菌群结构的稳定性。
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三氯异氰脲酸和苯扎溴铵对海水养殖源弧菌的抑菌和杀菌效果
《南方水产科学 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：采用微量二倍稀释法进行三氯异氰脲酸和苯扎溴铵对198株海水养殖源弧菌的体外抑菌试验,在此基础上采用悬液定量杀菌法观察2种消毒剂对2株对虾致病性副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)的杀菌效果。结果表明,三氯异氰脲酸对198株弧菌的最小抑菌质量浓度(MIC)为31.13~498.00 mg·L-1,苯扎溴铵对198株弧菌的MIC为20.00~160.00 mg·L-1。在菌悬液杀菌试验中,随着三氯异氰脲酸和苯扎溴铵质量浓度降低,100%杀灭弧菌的作用时间延长。当三氯异氰脲酸质量浓度分别为7.78 mg·L-1和15.56 mg·L-1时,100%杀灭FJ244和FJ246菌株的作用时间均为4 min;当苯扎溴铵质量浓度分别为20.00 mg·L-1和10.00 mg·L-1时,100%杀灭FJ244和FJ246菌株的作用时间分别为3 min和40 min。当消毒剂质量浓度分别递减为上述质量浓度一半时,即使延长消毒剂作用时间也未能完全杀灭弧菌。
关键词： 三氯异氰脲酸 苯扎溴铵 弧菌 最小抑菌浓度 杀菌率
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