两株CRISPR工程大肠埃希菌在小鼠体内的定植实验研究

任晨吟; 高思琦; 李浩; 唐标; 杨华; 刘月环; 《实验动物与比较医学 》 2022

摘要：目的 利用小鼠对2株大肠埃希菌工程菌Nissle1917和BW25113在肠道的定植能力与定植效率进行评价，以筛选出肠道定植效率高的菌株，为后续利用成簇的规律性间隔的短回文重复序列（clustered regularly interspersed short palindromic repeats,CRISPR）及其相关蛋白（CRISPR associated protein,Cas）系统的工程菌消减体内耐药菌的研究奠定基础。方法 每株工程菌的实验共取70只18～20 g的ICR小鼠，雌雄各半，操作时小鼠区分性别并随机分为7个处理组，每组10只（6只实验，4只对照）。实验组灌胃2×10¹⁰个工程菌共200μL，对照组灌胃等体积的PBS。灌胃后1、3、6、12、24、48、72 h分别取小鼠的肠系膜淋巴结、胃、回盲部、结肠组织及内容物，分别采用平板划线、荧光镜检和PCR法检测工程菌，比较Nissle1917和BW25113这2菌株在小鼠体内的定植能力与效率。结果 灌胃后前6个时段（1、3、6、12、24、48 h）中，3种方法检测到2株菌在胃、回盲部、结肠组织有定植，淋巴结未检到目标菌株；而72 h有且仅有Nissle1917菌定植于回盲部和结肠组织，Nissle1917和BW25113两株菌的定植效率分别为100%和0。结论 Nissle1917菌定植效率高于BW25113菌，且能较长时间定植于回盲部和结肠组织，提示其可作为防控耐药基因传播用CRISPR系统的备选载体菌。

关键词： CRISPR工程大肠埃希菌 肠道定植能力 定植效率 ICR小鼠

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基于重测序的长豇豆基因组InDel标记开发及应用

杨易; 黎庭耀; 李国景; 陈汉才; 沈卓; 周轩; 吴增祥; 吴新义; 张艳; 《园艺学报 》 2022 北大核心 CSCD

摘要：选取3份长豇豆种质资源进行全基因组重测序,利用重测序数据挖掘InDel位点,根据这些位点开发分子标记,并验证这些标记的有效性和应用价值.经过严格筛选,获得981个易于凝胶电泳检测的长度大于30 bp且多态性高的InDel位点,挑选其中在基因组上均匀分布的165个设计引物并进行验证.用6份长豇豆材料对165对引物进行初筛,其中162对可获得PCR扩增产物,共扩增出673条条带;85对引物表现出多态性,多态性带333条(占总带数的49.48%).利用85个多态性高的标记对173份长豇豆资源进行基因分型和遗传多样性分析,共检测到333个等位位点;多态性信息含量(PIC)为0.01~0.37,平均值为0.29;基因多样性指数变异范围为0.01~0.50,平均值为0.36,表明现有长豇豆资源遗传背景相对狭窄.通过聚类分析,173份长豇豆被分为2个类群,成功将不同类型长豇豆划分到不同亚群.另外,选用亲本间多态性标记用于6个杂交组合的F1代真实性鉴定,鉴定出5个真实杂交种.本研究所开发的多态性InDel标记在长豇豆遗传多样性分析、杂交种纯度鉴定、遗传连锁图谱构建、基因定位和分子标记辅助选择育种等方面具有很好的应用前景.

关键词： 长豇豆 InDel标记 遗传多样性 F1代真实性鉴定

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几种杀菌剂对温州蜜柑黑点病的田间防治效果

蒲占湑; 黄振东; 杜丹超; 胡秀荣; 李永杰; 金国强; 《浙江柑橘 》 2022

摘要：柑橘黑点病(citrus melanose)因发病部位和时期不同又叫树脂病、流胶病、沙皮病和蒂腐病,柑橘黑点病一直是柑橘生产中的主要病害之一。其病原为Diaprthe citri (Fawcett)Wolf,可以感染导致果实、叶片、幼苗黑点病,果实褐色蒂腐病和成年枝干流胶病~([1])。浙江种植的柑橘以鲜食为主,果实感染黑点病严重影响精品果的外观品质,降低柑橘生产效益。

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浙江省典型土壤类型整段标本的采集和制作

庄俐; 邹平; 麻万诸; 沈阿林; 《土壤 》 2022 北大核心 CSCD

摘要：土壤整段剖面标本能真实反映出完整的土体结构和土壤性态，既可为土壤演变历史的科学研究提供实体样本，也可为土壤知识的科普和专业交流提供基础平台。浙江省农业科学院于2019年启动建设“农业管理与土壤演变研究展示平台”，采集和制作了浙江省典型土壤整段标本97个。本文介绍了不同类型土壤整段剖面标本采集与制作过程中遇到的问题以及解决方案，旨在为今后土壤整段标本的采集和制作提供借鉴。

关键词： 土壤整段标本 采集 制作 浙江省

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文成县高山区优质杂交籼稻新品种比较试验

许俊勇; 张颖; 黄旭炳; 张炳炎; 俞法明; 《农业科技通讯 》 2022

摘要：为筛选出适宜文成县高山区种植的优质杂交籼稻品种,特收集悦两优美香新占、华浙优261等10个优质杂交籼稻新品种在文成县高山区进行综合性状比较试验,以中浙优8号为对照,考查各试验品种的生育期、产量、主要农艺性状、抗逆性、稻米外观与米饭食味等.结果表明,华浙优261表现生育期适中、适应性好、产量一般,稻米外观与米饭食味较为突出,综合性状表现优秀,适宜在文成县高山区推广种植.

关键词： 杂交籼稻 比较试验 高山区 文成县

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绵羊皮肤成纤维细胞的分离培养和鉴定

胡馨予; 姚逸安; 俞可心; 胡情情; 姜俊芳; 蒋永清; 石国庆; 万鹏程; 代蓉; 管峰; 《中国细胞生物学学报 》 2022 北大核心 CSCD

摘要：绵羊成纤维细胞的分离培养是羊毛发育相关基因功能研究及分子育种研究的重要基础技术和手段,但是现有贴壁法和胰蛋白酶消化法分离培养所需时间长、效率低,双酶消化法与差速贴壁筛选法对绵羊皮肤成纤维细胞的分离培养效果尚不清楚.该实验目的在于通过优化绵羊皮肤成纤维细胞分离培养过程,提高培养效率和细胞纯度.采集新生羔羊的耳皮肤组织,采用胰蛋白酶和I型胶原酶联合消化法进行绵羊皮肤成纤维细胞的原代分离培养,培养2~3天后进行传代分离,直至获得高纯度的成纤维细胞,该过程用时约7天.免疫荧光鉴定结果表明,获得的绵羊皮肤成纤维细胞纯度达100%.该实验采用优化的双酶消化法与差速贴壁筛选分离成纤维细胞,提高了绵羊皮肤成纤维细胞分离培养效率,大大缩短了培养周期,提高了细胞纯度.

关键词： 绵羊 成纤维细胞 皮肤组织 分离培养 双酶消化法

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掌叶覆盆子染色体计数及基因组大小测定

金亮; 李春楠; 詹书侠; 李小白; 华金渭; 《分子植物育种 》 2022 北大核心 CSCD

摘要：掌叶覆盆子(Rubus chingii Hu)是重要的药用植物,由于基因组数据缺乏,导致其分子生物学研究进展相对缓慢.本研究采用根尖染色体制片技术来确定其倍性;利用流式细胞术和K-mer分析方法对其基因组大小进行了测定.结果如下,掌叶覆盆子根尖染色体数目为2n=2x=14;采用流式细胞术,以萝卜'Saxa'为内标测定的掌叶覆盆子基因组大小为(255.39±7.58)Mb;K-mer分析估测的掌叶覆盆子基因组大小为262.2 Mb,杂合率为0.91%,重复序列比例为42.54%;根据各分析指标,推测该掌叶覆盆子基因组为一般复杂基因组.本研究结果将为掌叶覆盆子的全基因组测序研究提供重要参考.

关键词： 掌叶覆盆子 染色体数目 基因组大小 流式细胞术 K-mer分析

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金艳猕猴桃疏花疏果技术研究

邵志刚; 谢鸣; 《现代农业科技 》 2022

摘要：本文以金艳猕猴桃为试验对象,研究了不同疏花方式和不同疏果程度对单果重的影响,以探索合理的疏花方式及留果量.结果表明:合理疏花疏果有利于果实优产,经过疏花疏果处理的金艳猕猴桃单果重均高于未疏花疏果的对照处理,其中以疏侧花、留果量120~150个的单果重最大.

关键词： 猕猴桃 金艳 疏花疏果 单果重

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共同富裕背景下淳安县山区特色农业产业联农带农模式

柯福艳; 喻佳节; 盛梦寒; 王忠进; 张飞燕; 《浙江农业科学 》 2022

摘要：淳安县属浙江山区26县之一,是建设共同富裕示范区的薄弱地之一.近年在全域生态保护大背景下,淳安县农林业走上了特色化的高质量发展之路,涌现出利益相关方差异化分工严推企业标准、 村企协统共促涉农三次产业融合发展、 全乡各村联合成立公司统一经营等多种联农带农模式,回答了小农生产占主导的条件下,山区在农业现代化进程中如何构建农业经济共同体进而带动农民农村共同富裕这一时代发展命题,对类似山区甚至淳安本身深入开展共同富裕建设具有重要启示.

关键词： 山区 共同富裕 联农带农模式 农业经济共同体

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桑黄有效物的提取应用及抑菌性能研究

谢晓韦; 孙雨晴; 陆龙喜; 霍进喜; 潘新平; 胡桂燕; 《蚕桑通报 》 2022

摘要：通过对桑黄有效物多酚的提取、应用试验,探讨桑黄有效物的抑菌性能;通过其应用产品"菊丝明皮肤抑菌霜"的抑菌试验,该产品对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌均有较强抑菌作用;通过"桑黄丝胶蛋白祛痘护肤膜"的人体皮肤涂抹使用疗效观察,对粉刺、痤疮、色素沉着、手足皮肤皲裂等问题肌肤有一定的疗效;从而表明桑黄有效物在抑菌抗菌产品和化妆品中应用存在较大的可行性,为桑黄有效物的应用提供更广宽的途径.

关键词： 桑黄 提取 抑菌 疗效 应用

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