科研产出
用Cre/LoxP和CRISPR基因工程技术构建猪肌肉生长抑制素双等位基因敲除细胞系
《中国生物化学与分子生物学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：肌肉生长抑制素(myostatin,Mstn)基因失活可引起哺乳动物的肌肉增生,但其调控机制尚不清楚,且缺乏可靠的试验材料验证Mstn相关分子通路的变化。本研究所用PK3108细胞系是在野生型PK15细胞系的基础上成功靶向敲除一条等位基因,在其靶位点敲入标记基因,敲除了204bp的外显子3序列,LoxP锚定在其标记基因两侧。利用Cre/LoxP重组酶删除系统删除插入PK3108Mstn靶位点的标记,借助流式细胞仪和荧光蛋白甄别得到无标记的过渡型细胞系PK3108-2。将Cas9/sgRNA表达载体和供体DNA共转染PK3108-2,借助G418抗性筛选和倒置荧光显微镜挑选出仅带阳性标记的克隆L18,对其基因组进行PCR产物凝胶电泳与PCR产物测序,证明克隆L18在预设位点发生同源重组;对其蛋白质进行Western印迹实验表明,Mstn被成功地敲除失活。综上结果证明,本研究实现了双等位基因的精准敲除,构建了Mstn双敲除梯度回复表达细胞系。本研究为揭示Mstn的作用机制提供理想的实验材料,也为双等位基因的敲除提供了可借鉴的技术路线。
蛋鸭极低密度脂蛋白受体基因多态性与蛋品质相关性分析
《中国家禽 》 2017 北大核心
摘要：极低密度脂蛋白受体基因(VLDLR)在卵生动物蛋黄物质形成过程起关键作用。研究以国绍Ⅰ号母鸭为研究对象,采用一代测序法对VLDLR基因外显子12至外显子13区域进行SNPs筛选,并分析各多态位点间的连锁不平衡状态及不同基因型与蛋品质的相关性。结果显示:共发现4个多态位点,其中S1(A7120G)位于12号外显子,未引起氨基酸序列改变;S2(A7261G)位于12号内含子;S3(C7325T)和S4(A7337G)位于13号外显子中,分别导致Thr突变为Met,Asn突变为Asp。位点S1、S2和S4为强连锁不平衡位点,存在3种单倍型和3种双倍型,单一位点基因型和双倍型与蛋黄比例、蛋重、蛋黄重、蛋壳重和蛋黄颜色的相关性分析结果均为不显著相关,在国绍Ⅰ号VLDLR基因外显子12-外显子13区域内未发现与蛋黄比例等蛋品质相关的分子标记SNPs位点。
关键词： 极低密度脂蛋白受体基因(VLDLR) 蛋鸭 核苷酸多态性(SNP) 蛋品质
全文链接
请求原文
复合青贮剂对苎麻青贮品质的影响
《河南农业科学 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：为了高效利用苎麻资源,生产优质苎麻饲料,以苎麻为材料,配制复合青贮剂进行青贮试验,评价其发酵品质,研究复合青贮剂的青贮效果。设计添加复合青贮剂(处理)和不添加复合青贮剂(对照)2个处理,分别检测28 d、42 d和56 d的青贮品质。结果表明,对照组56 d时有很强的霉味,且茎叶腐烂发霉,评分为0,青贮失败;复合青贮剂组青贮品质较好,评分为16,青贮等级优良。与对照组相比,复合青贮剂组粗蛋白含量显著提高7.67%(P<0.05),中性洗涤纤维含量下降1.82%(P>0.05),酸性洗涤纤维含量下降1.53%(P>0.05)。综上,在苎麻中添加复合青贮剂可以提高青贮品质,改善其营养品质。
全文链接
请求原文
水果萝卜肉质根和叶片硫代葡萄糖苷鉴定及含量分析
《中国蔬菜 》 2017 北大核心
摘要：采用高效液相色谱法,对心里美、超级郑研、沙窝萝卜3个水果萝卜品种肉质根和叶片的硫代葡萄糖苷组分与含量进行了鉴定和分析。结果表明,3个水果萝卜品种肉质根和叶片中均检测到9种硫苷组分,其中包括6种脂肪族硫苷(4-甲基亚磺酰-3-丁烯基硫苷、2-丙烯基硫苷、4-甲基亚磺酰丁基硫苷、5-甲基亚磺酰戊基硫苷、4-甲硫基丁基硫苷、4-甲硫基-3-丁烯基硫苷)和3种吲哚族硫苷(4-甲氧基吲哚甲基硫苷、吲哚-3-甲基硫苷、1-甲氧基吲哚甲基硫苷),但不同品种及器官之间的硫苷含量存在明显差异。3个水果萝卜品种肉质根总硫苷含量分别为22 472.84、13 585.86、28 200.70μg·g~(-1)(DM),其中95%以上是脂肪族硫苷;肉质根总硫苷含量分别是叶片的4.56、2.71、4.55倍;肉质根和叶片中主要脂肪族硫苷组分均为4-甲基亚磺酰-3-丁烯基硫苷,分别占总硫苷含量的90.11%~93.92%和63.03~73.72%。
全文链接
请求原文
猕猴桃NIP5-1基因的克隆及缺硼胁迫表达分析
《分子植物育种 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：通道蛋白家族NIPs(NOD26-like intrinsic proteins)是植物中重要的硼吸收与转运蛋白。利用同源克隆技术获得"金魁"猕猴桃(Actinidia deliciosa‘jinkui’)硼转运通道基因:AdNIP5-1,该基因序列包括897 bp的开放阅读框,编码298个氨基酸。AdNIP5-1蛋白包含通道蛋白家族2个典型的保守结构域:NPS、NPV和Ar/R,构建基因家族进化树分析AdNIP5-1属于NIPⅡ亚家族,与葡萄和拟南芥中的NIP 5-1蛋白序列比对一致性分别为:89%和82%。利用实时荧光定量分析表明AdNIP5-1主要在猕猴桃根部表达,在茎和叶中的表达量相对较低;在缺硼胁迫条件下,AdNIP5-1表达量显著升高,在12 h时达到最高值,为对照的2.1倍。结果表明AdNIP5-1基因参与缺硼胁迫响应过程,该基因可能会影响猕猴桃对硼的吸收效率。
全文链接
请求原文
施用牛粪和绿肥对土地整治区玉米产量和土壤理化性质的影响
《应用生态学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：采用定位试验,研究了施用新鲜牛粪(15000和75000 kg·hm~(-2))和绿肥(36000kg·hm~(-2))对玉米产量、土壤呼吸和土壤化学、物理性状的影响.结果表明:与单施化肥相比,土地整治区施用牛粪的玉米籽粒增产7.2%~29.9%,千粒重增加2.5%~18.2%,活性有机碳和有机质含量分别增加5.3%~34.6%和8.0%~17.6%.施用绿肥的玉米籽粒增产10.8%~15.6%,千粒重增加4.5%~8.4%,活性有机碳含量增加14.1%~48.6%,在第二年土壤有机质含量增加了7.2%.施用牛粪和绿肥的土壤呼吸速率增加了20.0%~69.3%.施用牛粪和绿肥增加了土壤容重,减少了总孔隙度和毛管孔隙度,分别增加了<0.01 mm和0.05~1 mm粒径团聚体的比例.连续2年在土地整治区施用牛粪和绿肥不仅能够增加玉米籽粒产量,而且已经对土壤物理化学性质的改善表现出积极的作用.
全文链接
请求原文
