科研产出
绵羊乳腺上皮细胞的分离鉴定及炎性模型的建立
《中国兽医学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：探索高效易行的绵羊乳腺上皮细胞原代培养方法并建立细胞炎性模型。分别采用组织块法、酶消化法和酶消化组织块法分离培养绵羊的乳腺上皮细胞,通过形态学观察、免疫荧光染色和RT-PCR等方法对细胞进行鉴定;用不同浓度的脂多糖（LPS）作用细胞后,通过CCK-8法检测细胞相对存活率;利用ELISA方法检测IL-8和TNF-α表达量;通过Western blot检测TLR-4蛋白表达量。结果显示,酶消化组织块法是最符合预期的方法,可在较短时间内获得活力旺盛的乳腺上皮细胞;细胞生长曲线呈"S"型,CK-18免疫荧光染色呈阳性,β-酪蛋白基因表达呈阳性。10 mg/L LPS处理12 h的细胞相对存活率明显升高（P<0.01）,细胞上清液中IL-8和TNF-α表达量极显著上升（P<0.01）,TLR-4蛋白表达量升高,表明细胞炎性模型建立成功。
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苏淮仔猪腹泻细菌性病原的分离鉴定与耐药性分析
《江苏农业科学 》 2021 北大核心
摘要：为了解淮安地区苏淮猪仔猪出现细菌性腹泻的病因并提供治疗方案,采集腹泻仔猪的肛拭子样品共95份,对采集的样品进行细菌分离与鉴定、动物致病性鉴定及耐药性分析.结果显示,本次试验共分离鉴定到78株大肠杆菌,92株沙门氏菌;动物致病性试验显示,大肠杆菌致小鼠死亡率为65.38%,沙门氏菌致小鼠死亡率为95.84%;药敏试验结果显示,大肠杆菌耐药率高于沙门氏菌,且均对青霉素类和林可霉素类高度耐药,对氟喹诺酮类耐药率最低.多重耐药结果显示,所有分离菌株均为多重耐药菌株,大肠杆菌主要表现8~10耐,沙门氏菌主要表现在6~8耐.
关键词： 仔猪;腹泻;大肠杆菌;沙门氏菌;耐药性
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Cry1B抗独特型单链抗体的定点突变及生物活性分析
《生物技术通报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：Bt毒素的长期应用使其在害虫抗药性等方面存在生态风险,这一现状促使高特异活性和新功能Bt抗虫资源的积极开发。前期研究发现抗独特型单链抗体制备技术是开发新型杀虫蛋白的一个新途径。然而获得的Bt Cry1B抗独特型单链抗体C7与昆虫BBMV结合能力不高,需进一步改造提高。通过分子模拟技术对C7与稻纵卷叶螟BBMV上的受体氨肽酶N进行同源建模、分子对接,并预测C7与氨肽酶N结合区域的热点残基。利用C7的热点残基构建饱和突变抗体库,并采用固相筛选方法,得到突变体Y124G。BIAcore分析表明Y124G与BBMV的结合能力增加,生物测定发现对稻纵卷叶螟的杀虫活性提高。这为抗体分子改造技术的应用奠定了基础,也为新型生物农药创制提供了新的思路。
关键词： Cry1B 分子改造 定点突变 杀虫活性 表面等离子共振
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甘蓝蔗糖磷酸合酶家族的鉴定和表达分析
《江苏农业科学 》 2021 北大核心
摘要：蔗糖磷酸合酶（SPS）是调节植物蔗糖生物合成的关键酶。SPS由不同的基因编码组成,具有不同的表达模式和功能差异。利用拟南芥SPS蛋白保守结构域在甘蓝全基因组共鉴定到6个甘蓝SPS家族成员。进化分析结果表明甘蓝SPS基因分为3个亚族。6个BoSPSs家族成员被定位在甘蓝的5条染色体上。启动子顺式作用元件分析结果表明,BoSPSs含有许多与激素、逆境和光响应相关的顺式作用元件。RNA-Seq结果表明,BoSPSA1a在各个组织中均具有较高的表达量,BoSPSB除了在芽中表达量较高,在其他各个器官/组织中表达量均较低;冷敏甘蓝（CS-D9）和耐冷甘蓝（CT-923）中BoSPSA1b低温处理后均上调表达,且不同时间点耐冷甘蓝中的表达量均明显高于冷敏甘蓝。本研究结果有助于了解甘蓝SPS家族的信息,增加了对这些基因在甘蓝生长发育过程中及低温胁迫中所起的作用的理解。
关键词： 蔗糖磷酸合酶 甘蓝 低温胁迫 BoSPSs基因 基因表达分析
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大豆种质资源主要农艺性状的评价与分析
《江苏农业科学 》 2021 北大核心
摘要：以来自全国的827份大豆种质资源为试验材料,对大豆生育期、株高、主茎节数、分枝数、百粒质量等主要农艺性状进行综合评价.结果表明,827份大豆种质资源遗传多样性丰富,材料间农艺性状表现出明显的差异性,株高变异系数最大,为40.12%,成熟期最小,为9.51%.相关性分析显示,生育期与株高、主茎节数、分枝数和百粒质量均呈极显著正相关;主茎节数与分枝数呈极显著正相关,与百粒质量呈显著正相关;分枝数与百粒质量呈极显著正相关.研究表明,该大豆种质资源库农艺性状间存在着较大差异,遗传多样性丰富,具有丰富的基因资源,同时该研究结果可为大豆品种改良和新品种培育提供参考依据.
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福建地区鸡滑液囊支原体的分离、药物敏感性及耐药株全基因组序列分析
《江苏农业科学 》 2021 北大核心
摘要：2018年自福建省疑似鸡滑液囊支原体感染病鸡中分离得到9株鸡滑液囊支原体,采用微量肉汤稀释法测定了其对9种抗菌药物的敏感性,对筛选出的多重耐药株（MS HB）进行了全基因组序列分析。结果显示,福建地区鸡滑液囊支原体临床株对泰万菌素和泰妙菌素较为敏感,对泰乐菌素、多西环素、土霉素和替米考星敏感性次之,而对氟苯尼考和恩诺沙星最不敏感。多重耐药株（MS HB）基因组大小为766 081 bp;GC含量为28.02%;共注释到1 464个基因,其中,包括多个毒力基因和1个耐药基因（ermQ）,与敏感标准株WVU1853全基因组序列比对得出大环内酯类和氟喹诺酮类药物耐药基因的多个突变位点。研究结果丰富了对鸡滑液囊支原体流行病学的认识,并可为该地区临床治疗鸡滑液囊支原体感染的合理用药选择提供理论依据和实践指导。
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水稻叶宽调控基因ZY1的图位克隆与功能分析
《植物遗传资源学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：叶宽是水稻株型的重要组成部分,适宜的叶宽有助于提高光利用效率进而提高水稻产量。利用水稻叶宽突变体,阐明新的水稻叶宽调控相关基因的功能,有助于进一步阐明水稻叶宽发育调控机制。本研究利用育种中间材料中发现的窄叶突变体zhaiye1（zy1）,与野生型（WT,wild type）相比,zy1出现明显的窄叶表型,株高也出现显著降低,穗型减小,种子呈现开颖畸形。组织观察结果说明,zy1中是由于叶脉数量减少导致窄叶表型的出现。通过计算F2群体的表型分离比,发现窄叶表型显示由2个隐性遗传位点控制。图位克隆最终将突变基因分别定位到第11染色体短臂顶端76 kb和第12染色体短臂顶端150 kb的区域内,利用测序和PCR扩增验证最终证明突变基因为Os11g01130和Os12g01120,二者为重复基因,编码一个OsWOX3A转录因子。进化树分析表明,ZY1蛋白与疣粒野生稻中的同源蛋白进化关系最近。ZY1蛋白亚细胞定位于细胞核中。转录组分析结果说明ZY1突变后差异表达基因分布在多个信号途径中,同时ZY1可能通过生长素信号途径调控水稻叶宽发育。综上所述,ZY1不仅调控水稻叶宽发育,而且参与水稻株高、穗型、颖壳等多个性状的发育调控。
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需冷量和需热量差异对桃花叶物候进程的影响
《植物遗传资源学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：为了明确桃开花展叶先后的花叶物候进程,花芽与叶芽需冷量和需热量差异对花叶物候进程的影响规律,本研究首先连续2年分别评价了99份和257份桃种质花芽叶芽的需冷量和需热量,并调查了盛花期和展叶期,将所试桃材料按花芽需冷量高低分为极低、低、中和高4种类型,系统讨论不同年度不同类型桃花叶物候进程,以及各进程的花芽与叶芽需冷量和需热量差异表现模式.结果 发现,极低和低需冷量桃呈现出先花后叶、花叶同放和先叶后花3种花叶物候进程,同一种质的花叶物候进程会因年度不同而改变,其需冷量和需热量差异表现模式种类复杂且年度间有变动;中和高需冷量桃仅呈现出先花后叶1种花叶物候进程,其需冷量和需热量差异表现模式种类简单且年度间保持不变.桃花叶物候进程与需冷量和需热量差异模式相关,并主要取决于需热量的差异.表现为无论花芽需冷量是等于、小于还是大于叶芽,只要花芽需热量小于叶芽,则为先花后叶;二者需热量相等,则为花叶同放;花芽需热量大于叶芽,则为先叶后花.结果 表明,花芽与叶芽的需热量差异是形成桃多样易变的花叶物候进程的重要因素.
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中强度脉冲电场对娃娃菜活性物质含量及抗氧化能力的影响
《食品科学 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：为探明中强度脉冲电场（moderate intensity pulsed electric fields,MIPEF）诱导果蔬代谢的应激机制,同时确定最佳处理条件以获得高活性物质含量的娃娃菜,本实验研究不同电场强度（0.4～2.0 kV/cm）和占空比（0%～49.2%）的MIPEF处理对娃娃菜活性物质含量、抗氧化酶系（过氧化氢酶、过氧化物酶、抗坏血酸过氧化物酶、谷胱甘肽还原酶）活性以及抗氧化能力的影响。结果表明,MIPEF可刺激娃娃菜酚类物质、抗坏血酸、谷胱甘肽、总硫代葡萄糖苷和异硫氰酸酯的合成（2.76%～818.03%）,同时显著提升抗氧化酶系的活性（2.22%～42.00%）,从而提高1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-dipenyl-2-pierylhydrazyl,DPPH）自由基、羟自由基（·OH）和超氧阴离子自由基（O2-·）清除率和总还原力（1.81%～202.11%）,以延缓娃娃菜衰老进程。通过拟合预测和验证实验,得出最优处理条件为电场强度1.1 kV/cm、占空比46.4%,此时活性物质含量为理论预测值的88.91%～103.40%。结论:MIPEF处理可显著提升娃娃菜活性物质含量和抗氧化能力,是一种极具潜力的果蔬非热预处理方式。
关键词： 中强度脉冲电场 娃娃菜 活性物质 抗氧化酶 抗氧化能力
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