科研产出
鉴别犬瘟热病毒强弱毒株中和单克隆抗体的制备
《江苏农业科学 》 2020 北大核心
摘要：为了制备鉴别犬瘟热病毒(CDV)流行强毒株和疫苗弱毒株的单克隆抗体,将CDV 851弱毒株浓缩后经蔗糖密度梯度离心纯化,免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0瘤细胞进行细胞融合,经3~5次克隆,间接ELISA筛选,获得稳定分泌抗CDV的杂交瘤细胞2D12株.该细胞株分泌的单克隆抗体亚类为IgG1κ,与常见犬病毒不发生交叉反应.间接免疫荧光显示,单克隆抗体与CDV 851毒株发生特异性反应,与杆状病毒表达的CDV 851毒株H蛋白发生特异性反应.Western blot检测发现,单克隆抗体与2株CDV强毒株H蛋白不发生反应,而与2株CDV弱毒株H蛋白有特异性反应.双抗体夹心ELISA显示,单克隆抗体能检测CDV疫苗弱毒株而不能检测CDV强毒株.病毒中和试验证实,单克隆抗体对CDV 851弱毒株具有中和能力.制备了区分CDV强毒株和疫苗弱毒的单克隆抗体,为CDV的鉴别诊断技术研究奠定了基础.
关键词： 犬瘟热病毒 单克隆抗体 流行毒株 疫苗毒株 鉴别检测
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转Gbve1基因棉对棉田动物群落结构及稳定性影响
《新疆农业科学 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：[目的]以亲本棉为对照,研究5组转Gbve1基因棉花株系对棉田生物群落分布以及环境的影响.[方法]以棉花3叶期为起始日期,采用随机调查法,查看整株棉花所有器官,记录棉株上所见节肢动物的种类及数量.[结果]转Gbve1基因棉田主要害虫的相对多度除朱砂叶螨、烟粉虱和棉叶蝉与对照棉田间有显著差异外,其余主要害虫均无显著差异(P>0.05).不同品系棉田中刺吸式害虫和咀嚼式害虫之间均无显著差异(P>0.05);而转Gbve1基因棉田中物种多样性指数、均匀度指数和优势集中性指数与对照相比均差异不显著(P>0.05);且转基因棉田与对照棉田节肢动物群落存在较高的相似性(0.6814~0.8209).[结论]不同品系棉田中主要昆虫群落消长动态显示,除个别品系在个别生育时期、个别昆虫之间存在显著差异,其余与对照相比消长动态均无显著差异,表明转抗黄萎病基因棉花并不影响棉田动物群落的结构和稳定性.
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辣椒CaWRKY14转录因子的生物学特性研究
《西北植物学报 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：WRKY转录因子是植物响应病原菌胁迫最重要的转录因子之一,且参与抗病反应及信号传导通路的调控.为研究辣椒WRKY基因的生物学特征,以辣椒高抗疫病材料CM334为试材,克隆获得响应疫霉菌诱导的转录因子CaWRKY14.生物信息学分析表明,该基因DNA全长2530 bp,cDNA全长1662 bp,含有5个内含子,编码553个氨基酸,含有1个WRKY保守结构域,属于GroupⅡ(b).实时荧光定量表达分析表明,CaWRKY14不仅受ABA和疫霉菌胁迫诱导表达,且表达量分别在12 h和24 h时达到峰值,分别是对照的8.54和8.04倍,同时也受高盐、热激和干旱胁迫诱导.利用VIGS技术对CaWRKY14转录因子进行沉默后发现,抗病材料CM334接种疫霉菌后趋于发病.研究表明,CaWRKY14基因在辣椒响应疫霉菌胁迫进程中可能发挥着重要作用.
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湖羊转录因子CTCF基因序列分析及其对NR5A1基因转录活性的调控
《江苏农业学报 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：转录因子CTCF在动物生长发育过程中发挥重要的调控作用,但其在绵羊中的序列特征、组织器官表达及功能目前尚不清楚.本研究以湖羊CTCF基因为研究对象,采用PCR方法克隆获得其编码区全序列,发现其序列全长2187 bp,编码727个氨基酸残基,含有11个连续的锌指结构域.组织器官表达谱分析发现CTCF基因在湖羊各个组织器官中广泛表达,在子宫中表达量相对较低,在胃中表达量相对较高.JASPAR在线软件预测发现核受体NR5A1基因内含子(翻译起始位点ATG前393 bp片段)含有3个CTCF结合位点,双荧光素酶试验结果显示,CTCF结合位点突变后NR5A1基因转录活性显著或极显著下降,表明CTCF可能通过调控NR5A1基因转录参与调控湖羊繁殖性能.
关键词： 转录因子CTCF 表达特征 NR5A1基因 转录活性
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栽培模式与施氮量对棉田节肢动物群落结构及稳定性的影响
《新疆农业科学 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：[目的]分别在长江下游沿海棉区(大丰)和沿江棉区(南京),以早熟常规棉中棉所50号为材料,研究不同栽培模式和施氮量双因素对棉田节肢动物群落结构及稳定性的影响.[方法]直播棉田以棉花3叶期为起始日期,移栽棉田以移栽后第3d为起始日期,采用随机调查法,调查整株棉花所有器官,记录棉株上节肢动物的种类及数量.[结果]栽培措施对棉田天敌亚群落个体数及益害比作用显著,且趋势一致,移栽棉田更有利于天敌发生,益害比更高,不同施氮量对棉田昆虫无明显影响.棉田中主要是棉蚜、烟粉虱、绿盲蝽和花蓟马等刺吸式害虫,主要天敌草蛉、蜘蛛和瓢虫.棉蚜、朱砂叶螨、花蓟马、烟粉虱和绿盲蝽在8月中下旬和9月上中旬发生数量较集中,其中直播棉田棉蚜、朱砂叶螨发生数量相对较多,移栽棉田花蓟马和绿盲蝽发生量相对较多,不增施氮肥棉田花蓟马发生数量相对较多,烟粉虱在棉田间均有发生,且数量较多.草蛉在8月下旬和9月上中旬发生数量大.6月下旬和7月上中旬蜘蛛和瓢虫发生数量大.其中移栽棉田蜘蛛和瓢虫发生量相对较多,增施氮肥棉田草蛉和瓢虫发生数量相对较多.害虫亚群落在南京移N0棉田中多样性指数和均匀度指数显著高于直N0棉田,优势集中性指数则相反;天敌亚群落在大丰移N10棉田多样性指数和均匀度指数显著高于直N0棉田,优势集中性指数则相反.[结论]棉田昆虫消长动态及发生量因栽培措施和施氮量不同而略有差异.害虫亚群落在移栽方式且不施氮肥的棉田中群落稳定性最高,而天敌亚群落在移栽且增施氮肥的棉田中稳定性最高.节肢动物群落稳定性在各处理间无显著差异.
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添加苜蓿草粉对育肥中后期苏山猪胴体性状和肉品质的影响
《动物营养学报 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：本试验旨在探讨饲粮添加苜蓿草粉对育肥中后期苏山猪屠宰性能、胴体性状、肌肉脂肪酸和氨基酸含量的影响.选取健康、体重为(30.0±1.0)kg的苏山猪60头(公母各占1/2),随机分为4组,每组3个重复.对照组饲喂基础饲粮,育肥中期试验组在基础饲粮中分别添加5%(试验Ⅰ组)、10%(试验Ⅱ组)和15%(试验Ⅲ组)的苜蓿草粉;育肥后期试验组在基础饲粮中分别添加10%(试验Ⅰ组)、15%(试验Ⅱ组)和20%(试验Ⅲ组)的苜蓿草粉.预试期7 d,正试期128 d.结果 表明:1)与对照组相比,饲粮中添加苜蓿草粉可极显著提高苏山猪板油重和背膘厚(P<0.01),对平均日增重、屠宰率和瘦肉率影响不显著(P>0.05).2)试验组背最长肌水分和粗蛋白质含量均低于对照组,肌肉亮度(L)值高于对照组,红度(a)和黄度(b)值低于对照组,其中试验Ⅲ组与对照组差异达到极显著水平(P<0.01).3)试验组背最长肌总饱和脂肪酸和总单不饱和脂肪酸含量高于对照组,总多不饱和脂肪酸含量低于对照组,差异均达到极显著水平(P<0.01).试验组背最长肌葵酸、棕榈酸和十七烷酸等饱和脂肪酸含量均显著高于对照组(P<0.05);但亚油酸、二十碳二烯酸、二十碳三烯酸等多不饱和脂肪酸含量均极显著低于对照组(P<0.01).4)试验组背最长肌氨基酸总量、必需氨基酸和鲜味氨基酸总量均高于对照组,其中试验Ⅲ组鲜味氨基酸含量与对照组差异达到极显著水平(P<0.01).综上所述,苏山猪育肥中期添加10%苜蓿草粉,育肥后期添加15%苜蓿草粉可以显著改善苏山猪屠宰性能、胴体性状和肉品质.
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外源物质强化植物修复多环芳烃污染土壤研究
《环境科学与技术 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：为探讨3-吲哚乙酸（IAA）和鼠李糖脂（RH）对土壤多环芳烃（PAHs）植物修复技术的强化作用,文章选取紫花苜蓿作为供试植物,通过盆栽试验研究不同处理土壤PAHs的去除效果与修复机制。结果表明:随着培养的进行,所有处理土壤PAHs含量呈降低趋势,同时添加IAA和RH的处理（P+IAA+RH）在各采样期的土壤PAHs含量均显著低于对照（CK）和仅种植植物的处理（P）;培养90 d后,P+IAA+RH处理的紫花苜蓿土壤PAHs去除率达到50.9%,显著高于其他处理（P<0.05）。施用IAA或RH均能够提高植物修复多环芳烃的富集系数（BCF）和转运系数（TF）,其中,P+IAA+RH处理生物富集系数和转运系数最大,且仅添加RH的处理（P+RH）生物富集系数高于仅添加IAA的处理（P+IAA）,而转运系数则相反。综合各项指标发现,外源物质IAA和RH可协同强化土壤PAHs的植物修复效果。
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番茄褪绿病毒的进化动态与适应性进化特征
《中国农业科学 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：[目的]番茄褪绿病毒(tomato chlorosis virus,ToCV)是长线形病毒科(Closteroviridae)毛形病毒属(Crinivirus)成员,现已成为我国番茄和其他蔬菜作物上最为常见的病毒之一.研究旨在查明ToCV的进化历史,尤其是该病毒何时何地传入我国,并阐明其适应性进化机制.[方法]根据ToCV外壳蛋白(coat protein,CP)基因两侧保守区设计1对特异性引物,对随机抽取的13个ToCV分离物进行扩增克隆,将测序获得的新序列与GenBank下载的含有采样时间和地理信息的序列合并得到103条ToCV CP基因序列,采用日期随机化检验(date-randomization test,DRT)检测数据集中的时间信号,并应用贝叶斯谱系动力学框架重建该病毒的进化动态.同时,应用系统发育与性状关联分析(phylogeny-trait association analysis)评估地理因素对ToCV适应性进化的影响.[结果]13个ToCV分离物均成功扩增出预期大小(约800 bp)的特异性片段,核苷酸序列与已报道的ToCV不同分离物CP基因序列一致性均在98%以上;基于聚类排列的日期随机化检验结果显示,通过实际采样时间和日期随机化的数据集分别推断获得的替代速率在95%置信区间之间没有存在重叠,表明本研究的数据集具有足够的时间信号,可以用于后续的贝叶斯分子定年(Bayesian molecular dating)分析.贝叶斯系统发育分析显示ToCV的最近共祖时间(the most recent common ancestor)为1920年(95%置信区间:1849-1976),该病毒约于2005年左右从美国引入中国.该病毒的CP基因替代速率约为1.12*10-3替代/位点/年(95%置信区间:6.08*10-4-1.73*10-3),与动物RNA病毒的相当,表明ToCV正处于快速进化之中.此外,系统发育分析与性状关联分析结果显示ToCV分离物与其来源地区的关联系数(association index)、简约分值(parsimony score)和最大单系分支(maximum monophyletic clade)统计检验均呈极显著水平(P<0.01),表明地理因素与ToCV适应性进化之间存在很强的关联性.[结论]ToCV正处于快速进化动态,该病毒的适应性进化主要受地理因素所驱动.研究结果将有助于增加对ToCV流行病学的认识,可为制定有效的防控策略提供依据.
关键词： 番茄褪绿病毒 贝叶斯谱系动力学 替代速率 时间信号 适应性进化
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鉴别检测裂谷热病毒NSs缺失型疫苗株与野生株模拟物的双重荧光定量RT-PCR方法的建立
《中国预防兽医学报 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：为了建立一种能够鉴别检测裂谷热病毒野毒株与NSs缺失型疫苗株的荧光定量RT-PCR方法,本研究通过对裂谷热病毒基因组序列进行比较分析,选择其S节段NSs基因及L节段L基因的无二级结构且保守的区段,分别设计多对引物和探针,通过试验验证并优化反应条件,筛选出最佳引物和探针的组合,建立了可以快速检测裂谷热病毒并区分NSs基因缺失疫苗株和野毒株的双重荧光定量RT-PCR方法.利用该方法检测羊临床常见病原,结果显示该方法仅对裂谷热质粒标准品样品检测为阳性,不与羊常见的其他病原出现阳性反应,特异性强;将裂谷热质粒标准品10倍倍比稀释后利用本研究建立的方法进行检测,结果显示,该方法对NSs和L基因重组质粒标准品的检测下限分别为10拷贝/μL和100拷贝/μL,敏感度高;重复性实验结果显示,该方法组内和组间变异系数均小于2%,重复性好.将NSs缺失型和非缺失型质粒分别转染细胞,提取核酸,利用本方法进行检测,结果显示该方法可有效区分NSs基因缺失型和非缺失型核酸样品.本研究建立的双重荧光定量RT-PCR方法为鉴别野生病毒株和NSs缺失型疫苗株奠定了技术基础.
关键词： 裂谷热病毒 双重荧光定量RT-PCR 鉴别 NSs基因 L基因 模拟物
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