科研产出
玉米大斑病菌实时荧光定量PCR内参基因的筛选与应用
《农业生物技术学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：由异宗配合的子囊菌大斑凸脐蠕孢（Exserohilum turcicum）引起的大斑病（northern leaf blight）是我国玉米（Zea mays）和高粱（Sorghum bicolor）生产的重要真菌病害。为筛选适用于玉米大斑病菌实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR; qRT-PCR）的内参基因，本研究以转录延伸因子1α（elongation factor-1α, EF-1α）、新生多肽相关复合物α多肽（nascent-polypeptide-associated complex alpha polypeptide, NACA）、60S核糖体蛋白L2（60S ribosomal protein L2, RPL2）、60S核糖体蛋白L37a（60S ribosomal protein L37a,RPL37A）、泛素结合酶（ubiquitin-conjugating enzyme, UBC）、α微管蛋白（α-tubulin, TUBA）、肌动蛋白（actin,ACT）和β微管蛋白（β-tubulin, TUBB）为候选内参基因，以玉米大斑病菌4个不同菌株、3个不同发育阶段、体内侵染4个不同时期以及苯醚甲环唑胁迫4个不同时间的样品为实验材料，通过qRT-PCR技术测定玉米大斑病菌各候选内参基因在上述不同条件下的表达量，利用geNorm（v3.5）、NormFinder（v0.953）、BestKeeper（v1.0）、Delta-CT以及RefFinder（http://blooge.cn/RefFinder/）等分析方法综合评价候选内参基因的表达稳定性。同时，分别以筛选的稳定性较好和较差的内参基因，分析玉米大斑病菌羊毛甾醇14α去甲基化酶（lanosterol 14α-demethylase, CYP51）基因在苯醚甲环唑胁迫下的表达规律。结果表明，8个候选内参基因的扩增效率范围为90.3%～97.8%（r＞0.99），熔解曲线峰图均为单一峰，符合qRT-PCR的扩增效率要求。TUBA和TUBB适于做玉米大斑病菌不同菌株间基因表达分析的内参基因；RPL2和TUBA是不同发育阶段表达较稳定的内参基因；NACA和TUBA是体内侵染不同时期较理想的内参基因；ACT适于做苯醚甲环唑胁迫不同时间基因表达分析的内参基因。qRT-PCR分析表明，在苯醚甲环唑胁迫下，玉米大斑病菌CYP51基因的表达量随时间的推移显著增加，胁迫24 h时，表达量达到最大，胁迫36 h表达量显著下调（P＜0.05）。以稳定性较好的ACT作为内参基因时，与未胁迫组相比，苯醚甲环唑胁迫可显著诱导玉米大斑病菌CYP51基因上调表达（P＜0.05）。但是，以稳定性较差的TUBB作为内参基因时，得出了2个菌株的CYP51基因表达量相反的结果。本研究为玉米大斑病菌基因表达定量分析提供了有效的校正工具，确保基因定量分析的准确性，为进一步研究玉米大斑病菌抗药基因过表达提供了参考依据。
关键词： 大斑凸脐蠕孢 实时荧光定量PCR 内参基因 扩增效率 表达稳定性
全文链接
请求原文
连作年限对辣椒根际土壤真菌群落结构的影响
《福建农林大学学报(自然科学版) 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：为了解不同连作年限下辣椒根际土壤真菌群落的结构特征，选取不同连作年限（1、3、5、10 a）下的辣椒根际土壤，采用Illumina Miseq高通量测序技术分析土壤真菌群落的结构和多样性，并探究其与土壤理化因子的相关性.结果表明：相较于连作1 a处理，延长连作年限导致真菌香农指数和辛普森指数显著下降（P＜0.05）;同时，连作年限变化对真菌群落结构有显著影响.在物种组成中，属于真菌优势菌门的有子囊菌门、担子菌门、被孢霉门和梳霉门，其中，子囊菌门是4个连作处理土壤的绝对优势菌群.在不同连作年限处理的土壤中，镰刀菌属、毛壳菌属和Ovatospora是共有的优势真菌属，其中，镰刀菌属的相对丰度在连作5 a时达到最高，10 a后显著下降（P＜0.05）;同时，枝顶孢霉属、青霉菌属和曲霉菌属等生防菌的相对丰度在长期连作后显著增大，而毛壳菌属、木霉菌属和被孢霉属等有益微生物的相对丰度随着连作年限的延长逐渐下降.冗余分析显示，土壤pH及有效磷、速效钾、有机质含量是影响真菌群落结构变化的主要驱动因子.本研究中，土壤真菌群落多样性下降、有益微生物减少和病原菌积累可能是造成辣椒连作障碍的原因.
全文链接
请求原文
茶鲜叶萎凋过程中摊青工艺对白茶品质的影响
《农业工程学报 》 2023 EI 北大核心 CSCD
摘要：为探明茶鲜叶萎凋过程中摊青工艺对白茶风味品质和生化成分的影响，在控温除湿环境中以基于静态摊晾于水筛加工而成的白茶为对照，在不同茶鲜叶减重率（65%、70%和75%）时对在制品进行并筛或堆青处理。结果表明，各处理制成的白茶呈现出较为相似的感官品质特征，但堆青处理相较并筛处理及对照茶样的香气鲜度下降而滋味甜度提高。在并筛处理中以在减重率为70%时并筛略优于在减重率为65%时并筛的白茶品质，且二者均以薄并筛处理较优于对照茶样。在减重率达75%时对在制品进行相同时长不同厚度的堆青处理（堆青方式：2～6筛并1筐）以厚堆处理的白茶品质较优，而不同时长相同厚度的堆青处理（堆青时长：2～6 d）则以短时堆青的白茶品质为佳。不同摊青处理白茶的儿茶素类、生物碱和主要氨基酸组分无明显规律性差异。相较静态/并筛工艺组，堆青工艺组茶样中呈甜味的脯氨酸和苯乙醇、橙花醇、香叶醇等花果香成分显著降低（P＜0.05）。基于茶样生化组成的模式识别可将全部供试茶样划分成静态/并筛工艺组与堆青工艺组2种类群。堆青处理可通过促进脂肪酸代谢，增加烷烃类、降异戊二烯类和醛类化合物含量来有效调节白茶样品的生化组成；橙花醇、橙花醛和香草醛等23种化合物可视为其与静态/并筛工艺组茶样相互区分的主要特征标识物（群）。研究结果可为基于摊青方式的白茶风味品质工艺技术调控提供参考依据。
全文链接
请求原文
福建太子参紫纹羽病病原鉴定及其生物学特性
《中国中药杂志 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：紫翁羽病为太子参的主要根部病害之一.为明确引起福建省太子参紫纹羽病的病原菌种类,2017—2021年持续从福建省太子参主产区采集具有太子参紫纹羽症状的块根及菌核,采用组织分离法分离病原菌,结合形态学特征和多基因分子鉴定对病原菌进行鉴定,并进一步开展病原菌生物学特性和室内药剂筛选研究.结果表明,从采集的块根样本中共分离获得78株紫纹羽菌株,形态学初步鉴定属于1种类型;从病原菌中选取2株代表菌株进行多基因系统发育分析,均与桑卷担子菌Helicobasidium mompa聚在一起.该菌菌丝适宜培养基为OA、生长温度为25℃、pH 6、草酸铵作为氮源,菌丝的致死温度为50℃处理10 min;99.1%丙环唑和98.7%嘧菌脂抑菌效果最佳,抑菌率50%的质量浓度分别为16.85、12.24μg·mL-1.可见,福建太子参紫纹羽病的病原菌为桑卷担子菌H.mompa.培养基种类、生长温度、pH、氮源等对菌丝生长均有显著影响.
关键词： 太子参 紫纹羽病 病原鉴定 桑卷担子菌 生物学特性
全文链接
请求原文
山羊地方性鼻内肿瘤病毒MAb的制备及间接ELISA方法的建立
《中国预防兽医学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：为建立检测山羊地方性鼻内肿瘤病毒（ENTV-2）的间接ELISA方法，本研究以纯化的ENTV-2免疫BALB/c小鼠，采用间接ELISA方法筛选阳性细胞克隆，经3次克隆纯化后获得1株能够稳定分泌ENTV-2特异性单克隆抗体（MAb）的细胞株，命名为6E4，并采用鼠MAb亚类鉴定试剂盒鉴定6E4 MAb的亚类，结果显示，MAb 6E4的亚类为κ链、Ig G1亚型。进一步以6E4为检测抗体，经各反应条件的优化建立了检测鼻液样品中ENTV-2的间接ELISA方法，该方法的临界值为0.323。利用该方法 检测羊口疮病毒（ORFV）、绵羊肺炎支原体（Movi）、丝状支原体山羊亚种（Mmc）以及纯化的ENTV-2和ENTV-2患病羊鼻液样品，结果显示，除纯化的ENTV-2及ENTV-2患病羊鼻液样品的检测结果呈阳性外，ORFV、Movi、Mmc的检测结果均为阴性，该方法特异性较强。将纯化的ENTV-2 （以蛋白浓度换算） 2倍倍比稀释（20μg/mL～0.08μg/mL）后，利用建立的间接ELISA方法检测，结果显示，纯化的ENTV-2稀释至0.3125μg/mL时检测结果仍可判定为阳性，该方法敏感性较高。批内、批间重复性试验结果显示，二者变异系数均小于10%，该方法重复性较好。采用荧光定量RT-PCR方法和本实验建立的间接ELISA方法检测109份临床鼻液样品，比较二者之间的符合率，结果显示，该间接ELISA方法与本研究室前期建立的荧光定量RT-PCR的检测结果符合率达94.5%，表明本研究建立的间接ELISA方法可用于ENTV-2感染的临床快速检测。本研究建立的ENTV-2间接ELISA方法为ENT的净化提供了技术手段。
关键词： 山羊地方性鼻内肿瘤病毒 单克隆抗体 间接ELISA
全文链接
请求原文
基于UPLC-Q-Exactive/MS的不同烘焙处理岩茶化学成分差异分析
《食品科学 》 2023 EI 北大核心 CSCD
摘要：为探明不同烘焙处理条件对岩茶品质与化学成分的影响，以肉桂品种（Camellia sinensis （L.） O. Kuntze cv.Rougui）岩茶毛茶为研究对象，设置不同烘焙温度（低火：100℃、中火：120℃、高火：140℃）与烘焙时间（2、4、6、8、10 h），采用基于超高效液相色谱-四极杆-静电轨道阱质谱（ultra-high performance liquid chromatography-quadrupole orbitrap mass spectrometry,UPLC-Q-Exactive/MS）的代谢组学方法对其非挥发性化学成分进行系统研究并结合感官审评对其品质进行鉴定。本研究共鉴定出144种化合物，包括生物碱类、儿茶素类、二聚儿茶素类、氨基酸类、酚酸类、N-乙基-2-吡咯烷酮取代的儿茶素（N-ethyl-2-pyrrolidinone-substituted flavan-3-ols,EPSF）类、香气糖苷类、黄酮糖苷类及脂质类等11类化合物。偏最小二乘法判别分析和热图分析结果表明，不同烘焙处理岩茶化学成分存在较大差异，共得到84种具有组间显著性差异的化合物（P＜0.05），其中绝大部分为氨基酸类物质，以及大部分儿茶素类、二聚儿茶素类（茶黄素、聚酯型儿茶素）、生物碱类（5’-甲硫腺苷、磷酸腺苷等）、酚酸类（异绿原酸、小木麻黄素、茶没食子素等）及大部分黄酮糖苷类等化合物在温度达到120℃（中火）后随着焙火时间的延长含量逐渐下降。而大部分脂质类（甘油单酯（18:3）、溶血磷脂酰胆碱（18:3）、棕榈酸等）、小部分黄酮糖苷类化合物（杨梅素、山柰苷、槲皮素等）、部分有机酸类物质（焦谷氨酸、5-羟甲基-2-糠醛）等呈相反的变化趋势；绝大部分EPSF类化合物含量随着焙火温度升高和时间的延长而呈线性增加，但在温度达到140℃（高火）后随着烘焙时间的延长含量逐渐降低。感官审评鉴定表明，低温长时（100℃、8～10 h）或中温短时（120℃、2～4 h）烘焙有利于肉桂岩茶品质的提升。本研究采用UPLC-Q-Exactive/MS方法较为系统全面地阐明了肉桂岩茶在不同烘焙条件下样品化学物质的差异，为武夷岩茶品质研究及焙火工艺提供理论依据。
关键词： 武夷岩茶 烘焙 化学成分 超高效液相色谱-四极杆-静电轨道阱质谱联用 代谢组学 感官评价
全文链接
请求原文
宽谱鸭疫里默氏菌噬菌体筛选及生物学特性研究
《中国畜牧兽医 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：【目的】筛选宽谱鸭疫里默氏菌噬菌体，作为治疗用噬菌体组合的候选毒株。【方法】以不同含量的噬菌体进行噬斑分析测定35株噬菌体的噬菌谱；利用透射电镜观察、热与酸碱稳定性评估、最佳感染复数（MOI）测定、一步生长试验、杀菌试验分析噬菌体的形态结构和部分生物学特性。【结果】35株噬菌体中vB＿RanS＿202的裂解谱最宽，能裂解42%（42/100）的鸭疫里默氏菌，包括血清1、2、6、10、11和13型共6种血清型菌株。该噬菌体由直径约60 nm的截面为六边形的头部和长约220 nm的尾部组成，不耐热，效价为1.0×10~7 PFU/mL的噬菌体，经50℃水浴80 min或60℃水浴20 min,即降为1.8×10~5～2.6×10~5 PFU/mL。在pH 5.0～9.0的环境中能维持活性。以RAf488为宿主菌测得其最佳MOI为0.01。一步生长曲线显示，其潜伏期和暴发期分别为60和75 min,平均裂解量约为150 PFU/cell。在宿主菌RAf488中的杀菌试验结果显示，MOI在0.004～0.016时，vB＿RanS＿202均具有杀菌作用。【结论】噬菌体vB＿RanS＿202具有宽裂解谱的特点，具备在液体培养基中的杀菌能力。本研究结果为后续噬菌体治疗用毒株的筛选提供参考。
全文链接
请求原文
运用年龄-龄期两性生命表模拟昆虫种群动态及其在害虫治理中的应用
《昆虫学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：计算机模拟昆虫的种群数量动态变化对于昆虫种群预测和害虫治理十分重要。本文介绍以年龄-龄期两性生命表（age-stage, two-sex life table）为基础，利用计算机模拟预测昆虫的种群动态、种群捕食、寄生和取食的波动、害虫防治时机以及模拟的变异性。利用年龄-龄期两性生命表软件（程式）TWOSEX-MSChart与捕食率软件CONSUME-MSChart分析生命表与捕食率数据，再将分析结果用模拟软件TIMING-MSChart模拟预测种群增长过程中龄期结构以及捕食能力、寄生能力和取食能力的变化。依据种群动态可以预测害虫危害、天敌捕食、寄生蜂寄生能力，再用这些数据确定杀虫剂的施药时机和施药次数，预测生物防治中天敌释放的适当时机、释放数量和释放次数等；同时还可以依据生命表的变异性，利用自我重复取样（bootstrap）技术得到的2.5和97.5百分位（percentiles）或其他百分位的生命表预测种群增长的不确定性。借助基于两性生命表理论的计算机模拟可以预测害虫种群增长以及化学防治和生物防治的最佳时期，以达到经济有效的害虫综合治理，并为农业可持续性提供理论与技术支撑。
关键词： 年龄-龄期两性生命表 种群预测 种群动态 变异性 害虫防治
全文链接
请求原文
冬瓜种子的休眠特性研究
《西北农林科技大学学报(自然科学版) 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：[目的]探讨影响冬瓜种子休眠的原因,确定种子休眠特性,为探明冬瓜种子休眠机理及破除方法提供理论指导.[方法]以冬瓜种子为材料,对其进行外观观察及形态指标和质量测定,分析数量性状分布规律及其相关性;采用恒温烘干法和 2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色(TTC)法检测种子含水量和生活力;采用去皮法和吸水法处理种子,计算其发芽率和吸水率;以蒸馏水为对照(CK),分析 0.02,0.04,0.06,0.08,0.10 g/mL冬瓜种子种皮、种胚水和甲醇浸提液对白菜种子萌发、幼苗生长的影响;此外还分析了 0.02,0.04,0.06,0.08,0.10 g/mL种皮、种胚甲醇浸提液对白菜幼苗超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)活性的影响,探讨冬瓜种子的休眠机理.[结果]冬瓜种子的种皮坚硬且厚,种子长、宽、厚平均值分别为 1.155,0.694 和 0.226 cm,千粒质量平均值为52.820 g,含水量为 75.800%.种子长、宽、厚在 4~5 级分布频率均较高,种子胚根长在 9 级分布频率最高,种皮质量和种胚质量均在 6 级分布频率最高,种子千粒质量和含水量主要分布在 4~6 级.种子厚与种子长、宽,胚根长与种子长,种皮质量与种子长、种子厚、胚根长均呈极显著正相关.在同等条件下培养 5 d后,完整冬瓜种子无萌发,而去皮冬瓜种子发芽率达到 54.67%.冬瓜种子的种皮透水性良好,吸水处理 21 h后,冬瓜完整种子和破壳种子的吸水率仅相差 5.80%.冬瓜种子种皮、种胚水和甲醇浸提液对白菜种子萌发和幼苗生长均有不同程度的抑制作用,其中种子种皮、种胚水和甲醇浸提液对白菜幼苗根长的抑制效应大于苗高;随着浸提液质量浓度的增大,种皮、种胚水和甲醇浸提液抑制效应总体增强;种皮和种胚甲醇浸提液的抑制效应大于水浸提液,种胚浸提液的抑制效应大于种皮浸提液.冬瓜种子种皮和种胚甲醇浸提液总体能抑制白菜幼苗的 SOD、CAT、POD活性.[结论]种子中的内源抑制物和种皮机械束缚可能是冬瓜种子休眠的重要原因,而种子各部位浸提物可能通过抑制保护酶活性而影响幼苗生长.
全文链接
请求原文
转录组和代谢组分析瘤菌根菌对铁皮石斛的促生机制
《热带亚热带植物学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：为筛选出促进铁皮石斛(Dendrobium officinale)生长的差异表达基因和差异代谢物,对瘤菌根菌与无菌盆栽铁皮石斛苗共生后形成的侧根根系进行转录组、代谢组和双组学联合分析.结果表明,转录组分析共找到262条差异表达基因富集到了35 条通路中,其中内质网蛋白质加工通路途径的差异基因最多,其次为氨基糖和核苷酸糖代谢通路.代谢组分析共检测出194 个差异代谢物富集到 33 个KEGG通路中,其中代谢途径的差异代谢物最多有 133 个,其次为不同环境的微生物代谢途径的差异代谢物有 70 个.通过联合分析,有 9 个差异基因的差异表达导致丝氨酸、谷氨酸、D-甘露糖和激素等代谢物的积累量发生变化,这可能是瘤菌根菌促进铁皮石斛生长的重要原因.因此,推测瘤菌根菌促进铁皮石斛生长与氨基酸、糖、植物激素的积累及相关基因的表达变化有关.
全文链接
请求原文
