科研产出
转TGEV-S基因玉米中目的基因的PCR检测及条件优化PCRdetectionofthetargetgeneintransgenicmaizederivedspikeglycoproteingeneofporcinetransmissiblegastroenteritisvirus
《北京农学院学报 》 2014 CSCD
摘要：为提高转基因玉米中目的基因的检出效率，本试验以猪传染性胃肠炎病毒纤突糖蛋白（TGEV-S）转基因玉米为材料，利用PCR方法检测样品中的目的基因。通过对PCR反应体系中4种不同DNA聚合酶和8种退火温度进行比较，建立和优化转基因玉米中TGEV-S基因的PCR检测方法。进而对450株转基因玉米叶片DNA和种子DNA中的TGEV-S基因片段进行检测，并设计33对引物检测插入转基因玉米基因组DNA中的质粒pBAC9020的DNA片段。结果显示，LATaq?酶对叶片DNA和种子DNA中TGEV-S的PCR扩增敏感性和特异性均优于其他Taq聚合酶，且退火温度为53~55℃时扩增效果较好。分别对450份...
关键词： 猪传染性胃肠炎病毒 转基因玉米 目的基因 DNA聚合酶 优化transmissiblegastroenteritisvirus transgenicmaize targetgene DNApolymerase optimization
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‘亚历山大'葡萄果实单萜生物合成相关基因转录及萜类物质积累规律
《中国农业科学 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：【目的】检测‘亚历山大'葡萄果实中萜类物质的种类和含量,分析果实发育过程中单萜类物质的积累与相关基因表达的关系,为揭示玫瑰香型葡萄香气物质的积累规律和香味育种奠定基础。【方法】从果实转色后至成熟期,每周取样一次,每次随机取样80—100粒,去籽去梗后榨汁,离心取上清液用于香气物质测定,使用顶空固相微萃取方法萃取样品中的挥发性成分,对采集到的质谱图用NIST 05谱库检索,并根据已有标样的色谱保留时间和保留指数,确定香气成分的化学组成,利用已有的化合物制备标准曲线进行定量。根据DXS的ORF序列设计引物,以充分成熟的样品RNA反转录获得的cDNA为模板,通过多次独立PCR扩增获得‘亚历山大'DXS的ORF片段,根据测序结果分析单核苷酸多态性位点。根据萜类生物合成途径中的8个关键酶基因序列设计引物,使用Ubiquitin,EF1-α和GAPDH3个看家基因做为内参,进行实时定量PCR,检测这些基因的转录丰度。【结果】从转色后至成熟期,在检测到的所有单萜中里那醇和香叶醇的含量远高于其它单萜,多种萜类浓度逐渐上升,其中里那醇、月桂烯、柠檬烯上升6—8倍,香叶醇、萜品醇、香叶醛和萜品油烯上升2—3倍,玫瑰醚和橙花醛含量变化较小,果实中里那醇、香叶醇、氧化玫瑰和月桂烯的含量高于嗅闻阈值。在单萜生物合成早期途径中,DXS1的表达从转色开始缓慢上升,在花后15周迅速上调,上升约5倍。DXS3则从12周开始迅速上升。DXR表现出波动变化规律。HDR的表达量在前期合成酶基因中是最高的,能达到DXS1、DXS3、DXR的1 0—20倍;在合成途径中期的2个基因FPPS和GPPS,从转色后至成熟期表达量持续上调,FPPS的表达量上升了4倍,GPPS的表达量上升了2倍;在合成途径的后期,Liner-syn和Terp—syn在花后的11—1 5周都出现表达量升高,所有基因在花后17周出现明显的表达下降。单萜总量从花后12-16周迅速积累,这与同期DXS3、DXR,HDR,GPPS、FPPS的表达上调的趋势相一致。通过相关性分析结果显示萜类总量与DXS3的相关系数为0.831。‘亚历山大'DXS1的cDNA的开放阅读框全长2 151 bp,编码716个氨基酸,通过多次独立克隆后对测序结果进行比对,在该序列中发现了16个单核苷酸多态性位点,导致4个位置编码的氨基酸发生变化。【结论】单萜合成途径中多个关键酶基因后期表达上调,导致成熟过程中单萜化合物含量上升2—8倍,DXS3与单萜总量的积累具有显著的相关性。
关键词： 亚历山大葡萄 萜类 生物合成 反转录聚合酶链式反应
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外源水杨酸对低温下杏花抗氧化酶和CBF转录因子表达的影响?
《植物生理学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：为探讨水杨酸(SA)对杏花抗寒性的影响机制,以早熟品种‘骆驼黄’杏的显蕾期花枝为试材,分析–2℃的低温下适宜浓度SA及其抑制剂ABT和PAC对杏花MDA、抗氧化酶和CBF转录因子的影响。结果表明,–2℃低温条件下,对照和2个SA抑制剂处理的杏花细胞膜系统均受到严重伤害,CAT、POD和SOD等抗氧化酶活性降低,MDA含量明显升高。而SA预处理的杏花在低温胁迫期间抗氧化酶活性增强,MDA含量比对照和抑制剂处理的有明显降低且相对稳定。通过荧光定量检测CBF转录因子的表达水平,表明SA能诱导杏花CBF基因的表达,尤其在低温处理3 h时,SA预处理的杏花中CBF的表达量明显高于对照和SA抑制剂处理。由此认为,适宜浓度的外源SA可能是通过调控低温下杏花中CBF转录因子的表达、增强细胞的抗氧化酶活性,减轻低温造成的膜脂过氧化伤害,从而在一定程度上增强了杏花的抗寒性。
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黑籽瓜种子蛋白质的功能特性
《食品工业科技 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：为了探究不同影响因素对黑籽瓜种子蛋白质功能特性的影响。采用碱溶酸沉法制备黑籽瓜种子蛋白。用DSC测定蛋白质的变性温度,研究pH、NaCl浓度和温度对黑籽瓜种子蛋白功能特性(溶解性、持水性、持油性、乳化性及乳化稳定性、起泡性及起泡稳定性)的影响。结果表明:黑籽瓜种子蛋白的热稳定性相对较好,变性温度为84.79℃;较低的NaCl浓度(0~1mol/L),对蛋白的各项功能性质有利,但当NaCl浓度继续升高,会降低蛋白的各项功能性质;温度对蛋白质不同性质的影响不同,但随着温度的升高,蛋白质的各项功能性质都呈现先增加后降低的趋势;pH对蛋白质的各项功能性质的影响显著。除乳化稳定性外,各项功能性质在等电点附近均较差,远离等电点,各种功能性质均得到改善。pH、NaCl浓度和温度对黑籽瓜种子蛋白质的功能特性有显著影响,通过调节这些因素能明显改善黑籽瓜种子蛋白质的功能特性。
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华北落叶松林木生长、草本植物多样性及地形因子之间的关系
《水土保持通报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：以河北省小五台山区华北落叶松人工林为对象,通过对林木生长因子和草本多样性指数的调查、计算和分析,对华北落叶松林木生长、草本植物多样性以及地形因子之间的关系进行了研究。结果表明,(1)坡度与树高、胸径、第一活枝高(枝下高)和冠幅呈显著负相关性,而海拔、坡位和坡形与林木生长因子之间的相关性不显著;(2)从相关系数和相关性强度综合分析,林木生长因子对草本多样性影响程度为:郁闭度>枝下高>胸径>树高>冠幅;(3)在海拔1 400~2 000 m范围,随海拔高度增加,Shannon—Wiener多样性指数和Pielou均匀度指数表现出较为平稳的变化趋势,而Simpson多样性指数和Menhinick丰富度指数则表现出上下波动的变化趋势;(4)海拔、坡形、坡度对华北落叶松林下草本多样性变化影响程度较小,而坡位与草本植物Menhinick丰富度指数和Simpson多样性指数达到显著负相关水平,表明坡位对草本植物多样性变化影响程度较大。
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花椰菜—黑芥渐渗系和异附加系的获得与分析
《园艺学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：以花椰菜—黑芥体细胞杂种自交及回交后代为材料,结合形态学特征,分子标记和荧光原位杂交(FISH)等群体分析技术,在16份高代回交及自交材料中筛选获得了花椰菜类型渐渗系材料12份,偏花椰菜类型异附加系材料4份。形态学调查及FISH分析表明:12份渐渗系材料除茎、叶等营养器官特征与花椰菜近似外,已具有较正常的花球形成,染色体数为18条,均来源于花椰菜;植株花粉母细胞减数分裂行为基本正常。SSR和AFLP分子标记检测表明,渐渗系材料除扩增到数量不等的黑芥多态性位点外,还扩增到埃塞俄比亚芥特异的多态性位点和少量新位点,另外发现渐渗系材料有丢失亲本花椰菜多态性位点的现象。FISH分析4份异附加系材料的染色体组成,结果显示:PFCN29BC2S1-4为9条花椰菜染色体附加8条黑芥染色体;PFCN15-2S1BC5-6-2和PFCN29BC4-37-7为16条花椰菜染色体分别附加7条和14条黑芥染色体;PFCN29BC4-38-5为花椰菜染色体附加了5～7条黑芥染色体。
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