科研产出
绵羊角蛋白中间丝I型基因多态性及其与羊毛性状的关系
《江苏农业科学 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：采用PCR-RFLP分子标记技术,检测了湖羊、哈萨克羊及中国美利奴多胎羊、"A"型羊和细型、超细型羊5个群体,共314只个体,角蛋白中间丝I型基因第1外显子的遗传多态性,并进行与绵羊羊毛性状相关性分析。结果表明:480 bp PCR产物经M spⅠ消化分析后在5个绵羊群体中均有2个等位基因突变(M占0.910 8,N占0.089 2)和3种基因型(MM占0.839 2,MN占0.141 5,NN占0.019 3),优势等位基因M基因频率比欧洲绵羊和印度绵羊品种高。序列比对发现,第1个M spⅠ酶切位点发生1个碱基C→T突变(g.160 C>T)。中国美利奴羊在该位点处于Hardy-W e inberg不平衡状态(P<0.05),其中中国美利奴细型、超细型群体在该位点处于Hardy-W e inberg极不平衡状态(P<0.01)。该位点与羊毛纤维直径不相关。
关键词： 中国美利奴 角蛋白中间丝I型基因 羊毛性状 多态性 羊毛弹力
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临床等级质粒DNA的实验室制备
《生物技术通报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：在实验室有效获得100 mg临床试验等级的质粒DNA。摇床发酵3个批次,每批次4 L培养液,产生大约160 g的细菌沉淀物。碱裂解菌体,气浮法结合离心分离浮杂沉淀。裂解液经0.45/0.22μm囊式过滤器过滤。然后采用阴离子色谱介质富集质粒,异丙醇沉淀。重新溶解沉淀后采用100 kD切向流超滤处理,获得100 mg临床试验等级质粒DNA。体外、体内转染试验对质粒表达效果进行了鉴定。结果表明,纯化的质粒DNA几乎检测不到内毒素、RNA和蛋白质,A260/A280比值在1.82～1.86范围内。纯化的质粒DNA能够满足动物临床试验。
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牛病毒性腹泻病毒玛纳斯株E2基因的克隆及其主要抗原表位区的分段表达
《中国兽医科学 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：应用RT-PCR方法扩增了牛病毒性腹泻病毒(BVDV)新疆玛纳斯分离株的E2基因,应用软件对序列进行分析,预测了可能存在的抗原表位;分别扩增了包含预测抗原位点的片段(1～118)-(144～340)-(100～300)-(1～345),并将其克隆到pMD18-T Si mple载体中;将重组质粒pMD-(1～118)、pMD-(144～340)、pMD-(100～300)、pMD-(1～345)的HindⅢ+BamHI双酶切产物分别插入pET28a(+),构建了原核表达载体pET-(1～118)、pET-(144～340)、pET-(100～300)、pET-(1～345)。将这些原核表达载体分别导入BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,收集菌液进行SDS-PAGE分析,结果显示,4个重组质粒在BL21(DE3)中均成功表达,表达融合蛋白的分子质量分别为18.6、28.2、29.2和43.9 ku,与预测蛋白质分子质量一致,Western-blot分析结果表明,28.2、29.2和43.9 ku的融合蛋白可被牛抗BVDV阳性血清识别。
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抗CP型、NCP型牛病毒性腹泻病毒高免卵黄抗体的制备
《中国畜牧兽医 》 2009 北大核心
摘要：本研究采用致细胞病变(cytopathic,CP)型牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)标准毒和非致细胞病变(noncytopathic,NCP)型新疆优势毒株免疫产蛋鸡,用改良PEG法提取卵黄抗体(IgY),并对提取的IgY采用SDS-PAGE检测纯度,间接ELISA检测免疫后每隔7 d的抗体效价,并测定所得抗体对NCP型BVDV的中和效价。结果表明,用该法提取的IgY纯度较高;间接ELISA结果证明,经过4次免疫后,抗CP型BVDV的效价达到1∶32000,抗NCP型BVDV的效价达到1∶40000,3个月后再次检测,卵黄抗体效价未见明显下降。最后一次免疫14 d的抗体对NCP型BVDV的中和效价达到1×10-3。
关键词： 牛病毒性腹泻病毒 卵黄抗体 间接ELISA 非致细胞病变
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绵羊附红细胞体感染PCR检测方法的建立
《石河子大学学报(自然科学版) 》 2009
摘要：为建立特异、敏感、快速的绵羊附红细胞体感染诊断方法,本试验根据已测得的绵羊附红细胞体16S rRNA基因序列(Gene Bank:EU916726、FJ440328),设计1对特异性引物,建立了绵羊附红细胞体的PCR诊断方法。特异性实验和敏感性实验结果表明,该方法与绵羊肺炎支原体、大肠杆菌、葡萄球菌、白色念珠菌、枯草杆菌均无交叉反应,能检测到绵羊附红细胞体最低DNA量为5.2pg/μL,在-80℃存放1年的血样中也检测到阳性样品。通过临床血样检测,证明该方法可以用于本病的早期感染和隐性感染的检测。
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用SMART技术构建扩展莫尼茨绦虫成虫全长cDNA文库
《中国畜牧兽医 》 2009 北大核心
摘要：利用SMART(switching mechanismat 5′end of RNA transcript)技术,采用Clontech公司的SMARTTMcDNALi-brary Construction Kit构建扩展莫尼茨绦虫成虫全长cDNA文库。用Trizol Reagent提取总RNA,用Oligotex mRNA Kits分离mRNA,以逆转录酶PowerScriptTM合成第一链cDNA,通过LD-PCR合成并扩增双链cDNA;扩增产物经蛋白酶K消化、SfiⅠ酶切、过SPIN-400TM柱去除小片段,连接到SfiⅠ消化过的pBluescriptⅡSK*质粒载体中,最后将重组质粒转化到E.coliDH5α内得到原始文库,扩增后,将文库保存于96孔细胞培养板中。经测定,构建的cDNA文库滴度为2.52×105PFU/mL;重组率为94.7%,插入片段长度多在0.5～3kb之间,平均长度约1.2kb。经5′端测序获得2642条有效序列,归并为1081条unigene。结果表明成功构建了扩展莫尼茨绦虫成虫全长cDNA文库,获得了较丰富的扩展莫尼茨绦虫成虫表达基因,为筛选扩展莫尼茨绦虫的功能基因全长序列奠定了基础。
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绵羊生殖道抗菌肽
《生物化学与生物物理进展 》 2009 SCI 北大核心 CSCD
摘要：以屠宰场收集的新鲜、健康、雌性绵羊生殖器官为原材料.采用乙酸浸提、透析、Sephadex G-50凝胶过滤层析和反相高效液相色谱(RP-HPLC)等方法分离纯化绵羊生殖道抗菌肽.以G+、G-和真菌为抗菌活性检测指示菌株,利用薄层琼脂糖孔穴扩散法、微量肉汤稀释法进行抗菌活性检测.对分离纯化所得纯品进行分子质量质谱测定、纯度鉴定、N端测序,并对其性质进行研究.结果表明:分离纯化所得两个绵羊生殖道抗菌肽分子质量分别为4820.47u和4012.5u,N端部分氨基酸序列分别为AYVLDEPKP和YDSGA.对G+细菌(S. aureus ATCC2592、Streptococcu ATCC55121)、G-细菌(E. coli ATCC25922)、真菌(C. albicans ATCC2002)均具有良好的抑菌活性.对家兔红细胞无溶血活性,对人血液凝固无影响.目前未见有从绵羊生殖道分离纯化得到抗菌肽的报道,并且这一研究结果进一步证实抗菌肽在多种动物生殖道天然免疫防御方面起着重要作用.
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滴灌条件下盐分对棉花养分及盐离子吸收的影响
《植物营养与肥料学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：在温室条件下,通过盆栽试验研究了滴灌条件下不同土壤盐度对棉花养分、盐离子吸收的影响。结果表明,棉花于物质生产受土壤盐分影响显著,高盐度条件下棉花生育进程滞后,生殖生长与营养生长不协调,造成脱落率增加,经济产量下降。土壤盐度显著影响棉花对N、P和K养分的吸收和分配;N、P和K的积累总量以及在子棉和铃壳中的吸收量随土壤盐度增加显著降低,而茎秆和叶片受影响较小。棉花植株体内的盐分离子(Ca~(2+)、Na~+与Cl~-)含量随土壤盐度的增加显著增加;吸收的盐分离子主要积累在茎叶,尤其以叶片中的盐分离子含量为最高,而子棉的盐分离子含量较少。
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甜高粱汁发酵贮藏技术的研究
《酿酒科技 》 2009
摘要：介绍了一种新的甜高粱汁液的发酵贮藏方法,首先将高粱汁杀菌、冷却,然后加入酵母菌,使其中的糖转化为酒精,密封贮藏。初步试验结果表明,发酵液在贮藏6个月后不发生变质。
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