科研产出
鸭肠炎病毒疫苗株EvaGreen实时荧光定量PCR方法的建立
《畜牧兽医学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：鸭肠炎病毒(duck enteritis virus,DEV)疫苗株自1960年以来一直被用于防控DEV感染,该疫苗安全稳定、生产技术成熟、可快速诱导机体体液免疫和细胞免疫。DEV的基因组庞大,复制非必需区多,可容纳多个外源基因的插入,被广泛用来作为基因工程载体来开发疫苗。当前,尚未见仅针对DEV疫苗株的实时荧光定量PCR检测方法相关研究报道。本研究通过分析DEV疫苗株和强毒株UL2基因特点,明确DEV疫苗株在UL2基因上存在528bp连续核苷酸缺失,设计针对该差异的实时荧光定量PCR引物,建立了EvaGreen实时荧光定量PCR检测DEV疫苗株的方法。结果表明,建立的检测DEV疫苗株实时荧光定量检测方法,当UL2基因含量为5.25×101~5.25×106拷贝·μL~(-1)时有良好的线性扩增,其标准曲线方程Y轴截距为34.95,斜率为-3.218,扩增相关系数为0.999,扩增效率为100%;敏感性强,最低检测限为52.5拷贝·μL~(-1);特异性好,对DEV疫苗株扩增产物的熔解曲线分析,仅出现1个单特异峰值[Tm=(90.62±0.28)℃],无引物二聚体,对其他鸭源传染病病原(如鸭肠炎病毒强毒、番鸭细小病毒、鸭圆环病毒、番鸭源鹅细小病毒、新型基因重组型鸭细小病毒、鸭腺病毒A型、鸭源鹅多瘤病毒、鸭源大肠杆菌、鸭疫里默菌和鸭源禽多杀性巴氏杆菌)检测均为阴性;重复性好,组内变异系数和组间变异系数分别为0.55%~1.72%和0.92%~2.49%。本研究建立了DEV疫苗株实时荧光定量检测方法,为评价DEV活载体基因工程疫苗免疫防控机制提供参考。
关键词： 鸭肠炎病毒 疫苗株 UL2基因 EvaGreen 实时荧光定量PCR方法
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不同CO_2环境下的空心莲子草对莲草直胸跳甲种群繁殖能力的影响
《福建农业学报 》 2018 北大核心
摘要：为探究CO_2含量升高对莲草直胸跳甲种群生长发育和种群繁殖能力的间接影响,建立了取食不同CO_2含量(420、750μL·L~(-1))条件下生长的空心莲子草的莲草直胸跳甲F5代种群两性生命表。结果表明,随着CO_2含量的增加,取食相应环境中生长的空心莲子草的莲草直胸跳甲的发育历期缩短、产卵期延长、产卵量增加,说明CO_2含量增加间接有利于莲草直胸跳甲的繁殖力。而同CO_2含量(420μL·L~(-1))条件下,F5代的产卵期和产卵量均少于F1代,发育历期延长,说明实验室条件下随着世代积累,莲草直胸跳甲种群繁殖力下降。420μL·L~(-1) CO_2含量下,莲草直胸跳甲F5代种群的净增值率(R_0)和内禀增长率(r)低于F1代;而750μL·L~(-1) F5代莲草直胸跳甲种群的净增值率和内禀增长率低于420μL·L~(-1) CO_2含量的F1代,但高于420μL·L~(-1) CO_2含量的F5代;周限增长率(λ)、平均世代周期(T)均无显著差异;高含量可育雌雄比率高于低含量且差异显著。上述结果表明,取食高CO_2含量环境下生长的空心莲子草增加了莲草直胸跳甲F5代种群的繁殖能力,间接对莲草直胸跳甲的生长发育产生了积极影响。
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外源水杨酸对低温胁迫下马铃薯幼苗生理指标的影响
《分子植物育种 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：以马铃薯郑薯5号(耐寒品种)幼苗为试验材料,采用0.5 mmol/L水杨酸(SA)叶面喷施处理,通过低温胁迫(4℃14 h,2℃10 h)后,测定马铃薯叶片丙二醛(MDA)、可溶性糖(SS)、可溶性蛋白(SP)、脯氨酸(Pro)和叶绿素总含量,过氧化物歧化酶酶(POD)和超氧化物歧化酶(SOD)活性,研究外源SA对马铃薯叶片渗透调节能力和抗氧化能力的影响。结果表明:低温胁迫下喷施SA后的马铃薯叶片MDA、SS、SP、Pro和叶绿素总含量显著提高,POD和SOD活性显著提高。因此叶面喷施外源SA能通过调控马铃薯的渗透调节和抗氧化能力来减轻细胞膜的损伤,抵制低温伤害,提高其耐寒性。
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嗜热芽孢杆菌CHB1环糊精酶基因优化及其在毕赤酵母中的表达
《食品与生物技术学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：为实现新型CGTase在毕赤酵母中的高效表达,提取嗜热芽孢杆菌CHB1基因组DNA为模块,PCR扩增野生型基因CGT1,编码680个氨基酸。将该基因进行密码子优化CGT2,与野生型基因CGT1分别插入分泌型载体pPICZαA转化毕赤酵母GS115,获得两株酵母工程菌GS115/pPICZαA-CGT1和GS115/pPICZαA-CGT2;经甲醇诱导表达120 h后,CGT2活力达0.62U/mL,是优化前CGT1(0.37 U/mL)活性的1.7倍;进一步对GS115/pPICZαA-CGT2进行摇瓶发酵条件优化,确定其最优发酵条件为:pH 6.5、28℃、200 r/min、每24小时补加体积分数1.5%的甲醇诱导,120 h后其胞外酶活力达到1.26 U/mL,是优化前的两倍。
关键词： 嗜热芽孢杆菌CHB1 环糊精酶 密码子优化 毕赤酵母
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日本恩蚜小蜂的发育历期、发育起点温度和有效积温的研究
《武夷科学 》 2018
摘要：日本恩蚜小蜂是烟粉虱的有效寄生蜂,在15、20、25、30、35℃这5个恒温条件下观察日本恩蚜小蜂的生长发育情况,记录卵、幼虫、预蛹、蛹和卵-成虫的发育历期,计算日本恩蚜小蜂各虫态的发育起点温度和有效积温。结果表明,温度显著影响日本恩蚜小蜂不同虫态的发育历期。在15-35℃范围内,日本恩蚜小蜂的不同虫态发育历期均随着温度的升高而逐渐缩短。日本恩蚜小蜂卵、幼虫、预蛹、蛹、卵-成虫的发育起点温度分别为9.62、8.82、9.00、7.03、8.44℃,有效积温分别为29.10、108.32、14.29、90.59、239.08 d·℃。
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