小西葫芦黄花叶病毒外壳蛋白基因植物表达载体的构建

胡京昂; 古勤生; 刘丽锋; 张穗; 彭斌; 李莉; 《果树学报 》 2004 北大核心 CSCD

摘要：小西葫芦黄花叶病毒(Zucchiniyellowmosaicvirus,ZYMV)是危害中国葫芦科作物主要病毒之一。试验以该病毒中国分离物外壳蛋白基因的克隆载体pZCP-87(含ZYMV的CP基因)为材料,经SalⅠ和BamHⅠ双酶切,从胶上回收目的基因,与经过同两种酶酶切的植物表达载体pBIN438连接,转化感受态的大肠杆菌细胞,提取质粒,经PCR和SalⅠ/BamHⅠ双酶切验证,已将该病毒外壳蛋白基因克隆到植物表达载体上(重组质粒命名为pBZCP5),采用冻融法完成了对pBZCP5质粒的农杆菌转化。该工作是通过转基因获得抗ZYMV病毒研究的基础。

关键词： 外壳蛋白基因 植物表达载体 构建 小西葫芦黄花叶病毒

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利用RNAi抑制口蹄疫病毒的复制(英文)

任武泽; 潘洁; 孙世铎; 庄娟; 徐泉兴; 饶忠; 尤永进; 《中国兽医学报 》 2004 北大核心 CSCD

摘要：根据口蹄疫病毒 IRES和 L 串联序列两侧的保守区域设计了 2个引物 ,利用 RT- PCR和 PCR方法扩增出该串联序列 ,并进行了测序。测序结果表明 ,扩增产物与 Gen Bank上相应的序列具有很高的序列同源性 (大于 99% )。在测序的基础上 ,选择了 L 基因上的 1个靶位点 (位于启始密码子下游第 2 2 9nt后 2 1 nt长的序列 ) ,合成了 si RNA表达盒SEC- L2 2 9。细胞单层长成 5 0 %～ 70 %时 ,将纯化的 SEC- L2 2 9转染到 BHK细胞中 ,转染 4 h后用高感染复数 FMDV接种 ,2 4 h后用间接免疫荧光方法对口蹄疫病毒在 BHK细胞中的复制进行检测。研究结果表明 ,SEC- L 2 2 9极大地抑制了口蹄疫病毒在 BHK细胞中的复制 ,且该抑制作用具有序列特异性 ,并降低了 BHK细胞的死亡率。另外 ,2 5 ng和5 0 ng SEC- L2 2 9处理组间对病毒复制的抑制作用差异不明显 ,可能是病毒基因组发生了突变。本试验表明 ,利用 PCR方法合成的 SEC在 BHK细胞中能特异性地抑制 FMDV的复制 ,RNAi技术可能为防治口蹄疫提供一个新的途径

关键词： 抑制 病毒复制 RNAi 哺乳动物细胞

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辣椒疫病发病因子和化学防治技术研究

刘永刚; 吕和平; 谢丙炎; 朱宗源; 杜蕙; 《西北农业学报 》 2004 北大核心 CSCD

摘要：总结了甘肃省辣椒疫病防治技术研究的主要结果。明确了辣椒疫霉菌交配型、土壤菌源量、温湿度、栽培条件、管理水平等因素与病害发生流行的关系,通过农业防治措施和化学防治措施的有机结合可以有效控制辣椒疫病的为害,由此确立了以农业栽培防治技术为基础,药剂防治为重点的综合防治技术,对甘肃及邻近辣椒产区的辣椒疫病防治起到了重要作用。

关键词： 辣椒疫病 病原 发病因素 综合治理

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苹果多酚氧化酶双链RNA干扰(RNAi)研究

曹艳红; 章镇; 姚泉洪; 彭日荷; 熊爱生; 李贤; 《实验生物学报 》 2004 北大核心 CSCD

摘要：以成熟苹果果实的RNA为模板,经RT-PCR扩增并克隆苹果多酚氧化酶(APPO)长度为710bp的反义、正义基因片段。以副球菌中类胡罗卜素合成有关的(crtW+crtY)融合基因片段YYT为间隔区,将APPO反义基因片段、YYT和APPO正义基因片段串联,构成全长为2446bp的DNA并插入到植物双元载体pYPX145中,构成可表达苹果多酚氧化酶双链RNA的植物双元载体pYF7704。以根癌农杆菌介导的叶盘转化法转化苹果栽培品种红富士,通过50mg/L卡那霉素筛选和CUS检测,获得了转基因苹果抗性芽。荧光定量RT-PCR检测结果显示,转基因苹果抗性芽内多酚氧化酶基因的干扰效果达91.69%以上,研究结果证实多酚氧化酶双链RNA干扰在转基因苹果上是可行的。

关键词： 双链RNAi APPO基因 载体构建 遗传转化 苹果 荧光定量 RT-PCR

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园艺种子引发技术

李明; 姚东伟; 陈利明; 《种子 》 2004 北大核心 CSCD

摘要：本文介绍了国内外种子加工领域种子引发技术的研究与应用概况,种子引发的方法、引发产生的效果,比较详细地介绍了种子引发的机理、种子引发过程中的生理生化变化、种子引发最佳条件的选择以及影响种子引发效果的一些因素等。同时分析了国内外在种子引发技术上的差异,提出我们今后的研究和发展方向。

关键词： 园艺 种子 引发

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利用异源胞质TPS雄性不育系选育白菜新品种杂交矮萁青

谢祝捷; 周志疆; 金翠娣; 《中国蔬菜 》 2004 北大核心

摘要：杂交矮萁青是利用TPS雄性不育系育成的一代杂种白菜 (B .c.ssp .L .chinensis) ,植株生长势强 ,束腰 ,株高 15～ 18cm ,开展度 2 5cm左右 ,叶片深绿 ,叶柄肥厚、较短 ,秋冬季收获期单株质量 4 0 0～ 5 0 0 g。平均产量35 0 0kg·(6 6 7m2 ) -1,较耐热 ,抗逆性强 ,可在长江流域地区种植。

关键词： 白菜 TPS雄性不育系 杂交矮萁青 一代杂种

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白僵菌Bb98土壤培养方法的优化

季香云; 杨长举; 蒋杰贤; 《华中农业大学学报 》 2004 北大核心 CSCD

摘要：采用液固双相发酵技术 ,对白僵菌的培养进行了液体接种、固体配方筛选和固体培养发酵抗污染试验。结果表明 ,加有土样成分配方比传统配方可降低生产成本 ,简化操作方法 ,而且具有一定的抗污染作用。

关键词： 白僵菌 土壤 培养方法

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灵芝中有效成分灵芝酸的抑制肿瘤作用研究

周昌艳; 唐庆九; 杨焱; 郭倩; 白韵琴; 潘迎捷; 《菌物学报 》 2004 北大核心 CSCD

摘要：本文采用了体外肿瘤细胞培养增殖抑制试验与体内肿瘤细胞抑制试验,结果显示灵芝酸在体外对肿瘤细胞株SW620、LS180、S180的增殖具有明显的抑制作用,体内抗肿瘤疗效试验显示灵芝酸对Lewis肺癌(足趾接种)具有一定的疗效,对荷Lewis肺癌的小鼠IL-2的生成及NK细胞的免疫活性均有一定的促进作用。因此可以认为灵芝酸通过直接细胞毒作用与激活免疫体系实现抑制肿瘤作用。

关键词： NK细胞 免疫 Lewis肺癌 细胞毒

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韩国西瓜新品种——新汉城嘉年华

宋祥孚; 吴宏国; 《长江蔬菜 》 2004 北大核心

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新城疫热稳定性天然弱毒B95株核酸疫苗的构建

顾惠明; 侯绍华; 裘孝良; 陈燕军; 郝勤宗; 潘饶霖; 赵本进; 王权; 刘金明; 《中国兽医科技 》 2004 北大核心 CSCD

摘要：将含有新城疫热稳定性天然弱毒B95株F基因的重组克隆质粒 pGEM F用NotⅠ单酶切 ,电泳回收纯化目的片段 ,与同样用NotⅠ单酶切并经去磷酸化处理的真核表达载体 pcDNA3.1连接 ,构建了新城疫核酸疫苗 ,并用所构建的新城疫核酸疫苗与载基因阳离子脂质体结合进行了免疫试验 ,通过ELISA、淋巴细胞转化试验检测了核酸疫苗在鸡体内的表达。结果显示 ,表达产物作为抗原物质刺激机体产生了特异性应答反应 ,引起了机体特异性的体液免疫和细胞免疫 ,对新城疫强毒攻击的保护率为 75 %。

关键词： 新城疫病毒B95株 融合蛋白 真核表达 脂质体 免疫

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