科研产出
草菇低温诱导蛋白分离纯化及其部分性质的测定
《菌物系统 》 2003 北大核心 CSCD
摘要:采用硫酸铵分级沉淀和制备电泳分离技术,从低温处理过的草菇菌丝中分离纯化得到三种低温诱导蛋白,分别命名为CspDZG1 ,CspDZG2 ,CspDZG3。IEF测定了等电点,分别为3.7,4.4,4.4。SDS-PAGE结果表明,CspDZG1 ,CspDZG2由一条多肽组成,分子量分别为56kD,54.5kD;CspDZG3由两个亚基组成,分子量分别为54.5 kD,68 kD。经S. aureus V8蛋白酶酶解后,测定了N端氨基酸序列。
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ACC氧化酶和ACC合成酶反义RNA融合基因导入番茄和乙烯合成的抑制
《实验生物学报 》 2003 北大核心 CSCD
摘要:从番茄品种强力米寿的总DNA中克隆番茄果实特异启动子2A11,以番茄成熟果实的RNA为模板,进行RT-PCR扩增,克隆番茄全长的ACC氧化酶基因和ACC合成酶基因片段。完成两个基因的克隆和测序后,将888bp的番茄ACC氧化酶基因和943bp的ACC合成酶基因片段串联,构成全长1837bp的融合基因。将该融合基因以反义的方向插入植物双元载体pYPX145中番茄果实表达特异启动子下游,获得ACC氧化酶基因和ACC合成酶基因融合的植物双元载体pOSACC。该载体外源基因表达单元的两端含两个烟草SAR序列,利于转基因的稳定遗传。以番茄栽培品种合作903子叶和下胚轴为外植体,利用根癌农杆菌进行基因转化,通过200mg/L卡那霉素选择和GUS检测,获得了105株番茄GUS阳性植株,转基因番茄果实在当代表现明显耐贮特点。经过4代的耐贮和果实农艺性状的综合选择,获得了两个表现良好的株系DR-1和DR-2,两株系果实乙烯释放量显著下降,是未转基因材料的9.5%,番茄的贮存期在50天以上。
关键词: ACC氧化酶基因 ACC合成酶基因 反义基因融合 根癌农杆菌 乙烯 番茄
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快速测定微量甲醛的新方法——光度测定法研究
《南京农业大学学报 》 2003 北大核心 CSCD
摘要:在FeCl3 HCl存在条件下 ,甲醛与蛋白胨能产生紫色 ,可以定量测定微量甲醛。测定范围 0 1~ 1 0mg·L-1,回收率 95 0 8%~ 10 3 5 % ,相对标准差为 1 19% (n =6 )。与乙酰丙酮法相比 ,用该法测定水发虾仁中甲醛含量 ,全程只需 10min ,具有简单、快速、灵敏度高、使用试剂少等优点 ,适合现场检测
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无土栽培基质的质量参数(孔隙性)研究
《上海农业学报 》 2003 CSCD
摘要:在蔬菜无土栽培中 ,稳定、良好的根际环境如水分、氧气、养分、温度、酸碱度等主要决定于基质的理化性质。其中基质的孔隙性 (孔隙度、孔径分配 )直接影响水分和空气的含量 ,是最重要的理化性质参数。通过不同颗粒粒径配比试验 ,研究了颗粒粒径 (孔径 )分配对基质物理性质、水分常数和栽培黄瓜生长的影响。结果表明 ,孔隙性可作为基质的质量标准参数之一 ,其标准为总孔隙度 60 %~ 90 % ,非活性孔 +毛管孔隙度与通气孔隙度的比例为 1∶1。具体操作时 ,可通过不同颗粒粒径的配比来调控基质的孔隙性 ,具有一定的实用性和可操作性 ,为因地制宜配合基质和基质产业化生产的质量控制提供参考依据
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拟南芥热激因子cDNA的克隆及转化烟草研究
《上海农业学报 》 2003 CSCD
摘要:拟南芥热激因子是一重要的耐热基因。从拟南芥幼苗中提取总RNA ,根据报道设计引物 ,利用RT PCR的方法扩增出大约 1.4kb的拟南芥热激因子基因Athsfc。将其克隆入pBluescriptSK载体的XbaI和SacI位点 ,测序结果显示核苷酸序列与国外H櫣bel(1994)报道的Athsf1基因间 99.8%同源 ,只有 3个核苷酸不同。序列分析显示 ,编码相同的氨基酸。将该基因构建入含内含子Km筛选标记的植物双元表达载体pYP12 0 3E中 ,构成了拟南芥热激因子基因 Athsfc植物表达载体pYP12 0 3E(Athsfc)。利用根癌农杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens)对烟草进行Athsfc基因的转化 ,获得了GUS染色显示阳性的烟草转基因植株 ,经过PCR和PCRsouthernblot分子检测证明了转基因植株为阳性
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两种西洋杜鹃的组织培养
《上海农业学报 》 2003 CSCD
摘要:以西洋杜鹃的两个栽培品种Rhododendronbritannia和Rhododendronamerica为供试材料 ,比较MS、Anderson、Read、N6 四种基本培养基对外植体诱导的影响 ;外源激素种类及浓度对杜鹃繁殖系数的影响 ;培养基中添加活性炭、抗坏血酸和聚乙烯吡咯烷酮对西洋杜鹃组培苗褐化的影响 ;以及激素IBA、IAA和NAA对西洋杜鹃组培苗生根的影响 ,研究结果表明Read培养基表现最为出色 ,诱导率达 85 % ;在ZT与NAA组合上获得了较高的繁殖系数 ;培养基中添加活性炭和聚乙烯吡咯烷酮对西洋杜鹃组培苗褐化有较为明显的抑制作用 ;在添加IBA1.0mg/L的生根培养基上 ,生根率可达 84%
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儿茶酚双加氧酶基因大肠杆菌表达体系研究
《上海农业学报 》 2003 CSCD
摘要:从恶臭假单孢菌 (Pseudomonassp .S 47)的DNA中扩增得到 92 4bp编码儿茶酚双加氧酶的基因片段 ,将其构建入 pBluescriptSK载体 BamHI和 SacI位点间。测序结果显示与Kim ( 2 0 0 0 )报道一致。将该基因插入带庆大霉素抗性基因启动子和t1t2终止子载体pG2 5 1、分别带ompA和EAP信号肽、lpp和Gmr 启动子载体 pYF3 95和 pYF5 2 5 4中 ,构建组成型表达载体pG2 5 1,分泌型表达载体 pYFX1,pYFX2。酶活测定结果显示pG2 5 1为 665mu/mL ,pYFX1,pYFX2分别为 1815mu/mL ,10 15mu/mL。SDS PAGE电泳显示表达蛋白产物的分子量约为 3 5kD。分泌型表达载体pYFX1表达量大于 pYFX2 ,组成型表达载体 pGX1由于使用弱启动子表达量较低
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