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基于RAA-CRISPR/Cas13a的鲤春病毒血症病毒快速检测方法的建立

渔业科学进展 2025 北大核心 CSCD

摘要:鲤春病毒血症病毒(spring viremia of carp virus, SVCV)是一种高致病性病原,对鲤科鱼类造成巨大危害,被世界动物卫生组织列为必须通报疫病。2002年,鲤春病毒血症(spring viremia of carp,SVC)在中国首次检出后,迅速在全国蔓延,给我国鲤鱼养殖业造成巨大威胁。因此,我国农业农村部将其列为二类动物疫病。迄今为止,早期、快速、准确的诊断仍然是控制其传播和流行的重要手段。本研究基于CRISPR/Cas13a系统结合重组酶介导等温核酸扩增技术(recombinase-aided amplification, RAA),通过对GenBank上登录的SVCV全基因序列比对,针对SVCV聚合酶L基因高度保守的区域设计了一组RAA扩增引物和相应cr RNA;建立了一种可用于SVCV现场快速检测的RAA-CRISPR/Cas13a的方法,可以覆盖SVCV的4种不同基因型(Ia、Ib、Ic和Id)。按照世界动物卫生组织推荐的检测方法验证程序,经实验验证该检测方法有较好的重复性,最低检出限为115 copies/μL,与其他病原之间不发生交叉反应。通过对实验室分离保存的60份来自进出境水生动物疫病监测、国内重大水生动物疫病监测以及攻毒实验的样本进行检测,RAA-CRISPR/Cas13a检测结果与实时荧光定量PCR、套式RT-PCR和病毒分离培养结果完全一致,诊断灵敏度和诊断特异性均达到100%。采用本研究建立的方法在4个不同实验室开展比对,在相同条件下对20份样本进行检测,4个实验室的检测结果一致。结果表明,本研究建立的方法重现性良好,为首次采用CRISPR-Cas13a系统进行SVCV检测的研究,对SVCV快速诊断和防控具有重要现实意义。

关键词: 鲤春病毒血症病毒 恒温扩增 CRISPR 重组酶介导等温核酸扩增技术

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近岸区红树林对堤前设计波浪要素的影响

科学技术与工程 2025 北大核心

摘要:为量化评估红树林消浪区对近海岸线的防护效果,基于广东台山镇海湾红树林工程示范区域,采用现场观测、理论分析、模型试验以及数值分析相结合的方法开展红树林消浪区与波浪相互作用过程研究,从波高方向统计特征、波高年极值统计特征等角度开展红树林消浪特性的验证与分析,从而实现了对红树林消浪机理以及消浪效果统计特征的总结。研究结果表明:基于刚性柱群绕流理论的植被消浪基本理论体系对于红树林类型植被的适用性较强,且相关消浪理论能够与基于波浪能量谱的数值计算模型进行适配融合;采用物理模型试验开展植被消浪过程研究,并与采用植被消浪经验公式的数值模拟结果进行比对,充分论证了本文研究所采用的植被消浪经验公式可靠性;进一步的数值模拟计算结果表明红树林可以从统计角度显著降低各个方向大浪的出现频率,在强浪向上红树林的消浪效果随着不同重现期的波高增加而显著加大,在常浪向和强浪向不一致的情况下,红树林的消浪率随着不同重现期的波高增加无显著增加趋势。

关键词: 红树林 消浪机理 模型试验 数值模拟 统计特征

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三峡库区四种小型鱼类能量溯源及时空差异

水生生物学报 2025 北大核心 CSCD

摘要:为评估三峡库区食物利用和食物链的营养转化效率,研究运用碳氮稳定同位素方法探究了浮游藻类、沿岸带C3植物、C4植物及着生藻类四种基础碳源对银鮈(Squalidus argentatus)、蛇鮈(Saurogobio dabryi)、似鳊(Pseudobrama simoni)和?(Hemiculter leucisculus)四种小型鱼类能量贡献比例的时空差异.结果显示,各种碳源生物的δ13C值和δ15N值均存在显著性差异(P<0.05),能很好地区分各基础碳源.Bayesian混合模型结果表明,浮游藻类均对四种小型鱼类的能量贡献比例最高,外源性碳源对小型鱼类能量的贡献率在不同水文时期无显著性差异(P>0.05),但是在空间尺度上存在极显著性差异(P<0.01).研究表明,内源性碳源是库区小型鱼类的主要能量来源,但外源性碳源对小型鱼类的贡献率在三峡库区河流纵向梯度上有较为明显的变化规律.越靠近库首,外源性碳源的贡献率越高,这可能与不同区域消落带的淹没特征和在库首静水环境下外源性碳源颗粒沉积有关.

关键词: 三峡库区 稳定同位素分析 小型鱼类 营养溯源 基础碳源

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急性高温胁迫对河鲈组织损伤、抗氧化酶活性及热休克蛋白基因表达的影响

淡水渔业 2025 北大核心 CSCD

摘要:为探究急性高温胁迫下河鲈(Perca fluviatilis)组织损伤、抗氧化指标以及应激相关基因的变化规律,揭示河鲈机体对高温胁迫的响应及耐受限度,为河鲈在高温环境下的科学养殖提供参考依据。采用突变升温的方法,以29℃作为急性高温胁迫温度,于0、3、6、12、24 h后取河鲈肝脏、鳃样本,分别开展组织病理学分析、抗氧化指标分析以及应激相关基因hsp70和hsp90的qPCR检测。结果表明:河鲈肝脏和鳃组织随着胁迫时间的延长,都表现出明显的损伤。在高温胁迫24 h后肝脏细胞出现水肿,空泡化,细胞核萎缩;鳃小片末端出现细胞水肿、膨大、弯曲变形的现象,部分鳃小片甚至还会出现表皮脱落的情况。抗氧化指标方面,高温应激后抗氧化酶活性均有不同程度的变化。随着高温胁迫时间的延长,河鲈肝脏中CAT活性呈先升高后降低的趋势;SOD活性呈升高的趋势;GSH-Px活性呈先升高后降低的趋势;MDA含量呈升高的趋势。河鲈肝脏的hsp70基因相对表达量呈先升高后降低再升高再降低的趋势;hsp90基因相对表达量呈先升高后降低再升高趋势。结果表明急性高温胁迫下河鲈机体为应对高温胁迫带来的损伤,通过激活抗氧化系统、提高hsp70和hsp90的基因表达量来进行自我调节,但胁迫时间过长或胁迫温度超过其自身调节能力,导致河鲈出现组织病理损伤。本研究揭示了河鲈对高温的耐受能力,为河鲈的抗高温应激技术研究奠定了科学基础,对河鲈在高温季节的养殖管理具有指导意义。

关键词: 河鲈(Perca fluviatilis) 高温胁迫 抗氧化酶 组织病理 热休克蛋白基因

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细胞周期调控基因在水生动物生殖发育过程中的作用研究进展

水产学杂志 2025

摘要:细胞周期蛋白(Cyclins)、细胞周期蛋白依赖性激酶(Cyclin dependent kinases, CDKs)和细胞周期蛋白依赖性激酶的抑制蛋白(Cyclin-dependent kinase inhibitors,CKIs)是细胞周期的关键调控因子。Cyclins和CDKs的复合物调节有丝分裂和减数分裂,CKIs调控Cyclins和CDKs的复合物,三者协同工作,使细胞周期进程顺利进行。Cyclins、CDKs和CKIs参与动物生长发育的各个基本生理过程,近年来其在生殖调控中的研究也越来越被广泛关注。本文主要综述了Cyclins、CDKs和CKIs三者的生理生化特性及参与水生动物生殖调控过程的研究进展,重点汇总其在有丝分裂、减数分裂中的作用,以期为水生动物生殖调控研究提供参考。

关键词: 细胞周期 Cyclins CDKs CKIs 生殖

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不同障碍物对3种幼鱼游泳能力的影响

中国水产科学 2025 北大核心 CSCD

摘要:为了解不同障碍物所形成的复杂水流环境对鱼类游泳能力的影响,以青鱼(Mylopharyngodon piceus)、中华倒刺鲃(Spinibarbus sinensis)和长鳍吻鮈(Rhinogobio ventralis)幼鱼为对象,通过在游泳水槽中放置圆形、方形和半圆形柱状障碍物,研究3种幼鱼的临界游泳速度及感应流速差异.结果表明,青鱼幼鱼在半圆形障碍物影响下临界游泳速度与无障碍物组无显著性差异(P>0.05),在圆形和方形障碍物影响下临界游泳速度显著降低(P<0.05),绝对临界游泳速度(Uacrit)分别降低了 36.3%和15.6%,相对临界游泳速度(Urcrit)分别降低了 34.9%和15.3%;中华倒刺鲃幼鱼在方形障碍物下Urcrit为(15.20±0.84)BL/s,相较于对照组[Urcrit=(17.42±0.55)BL/s]降低了 12.7%(P<0.05);长鳍吻鮈幼鱼在3种障碍物影响下的临界游泳速度均显著低于无障碍物组(P<0.05),其中圆形障碍物组影响最为显著,Uacrit和Urcrit为(62.83±7.52)cm/s和(8.17±0.73)BL/s.青鱼、中华倒刺鲃幼鱼感应流速在无障碍物和不同形式障碍物下均无显著性差异(P>0.05),长鳍吻鮈幼鱼感应流速在圆形和方形障碍物影响下差异显著(P<0.05),3种幼鱼绝对感应流速(Uaind)范围为1.60~5.20 cm/s,相对感应流速(Urind)范围为0.17~0.62 BL/s.在相同障碍物环境中,中华倒刺鲃Urcrit和Urind均显著高于青鱼和长鳍吻鮈.3种实验鱼临界游泳速度均大于感应流速.研究发现,障碍物对鱼类的临界游泳能力具有显著影响,而对幼鱼感应流速的影响仅在种类间表现出显著性差异.结果可为鱼类栖息场所和鱼道设计提供参考.

关键词: 障碍物 青鱼 中华倒刺鲃 长鳍吻鮈 临界游泳速度 感应流速

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禁捕初期石臼湖鱼类早期资源现状及其与环境因子的关系

水生生物学报 2025 北大核心 CSCD

摘要:为了解石臼湖鱼类早期资源现状及环境影响因素,于2023年5月9日—2023年8月9日期间,针对石臼湖鱼类早期资源开展了逐日调查。结果显示,共采集仔稚鱼14251尾,鉴定出鱼类39种,隶属于9目10科,其中鲤科鱼类最多共27种,占总物种数的69.23%。优势种共5种,为子陵吻虾虎鱼(Rhinogobius giurinus)、贝氏餐(Hemiculter bleekeri)、餐(Hemiculter leucisculus)、陈氏新银鱼(Neosalanx tangkahkeii)、飘鱼(Pseudolaubuca snensis)。群落构成以小型鱼类为主,种类数占总物种数的56.41%。依据产卵类型划分,产沉性卵鱼类物种数最多共23种,占总物种数的58.97%;产沉性卵鱼类采集数量最多共12394尾,占总数量的86.97%。就时间特征而言,共出现5次密度峰值,最大值出现在5月13日,为548 ind./100 m2;7月30日出现最后一个峰值,为365 ind./100 m3,此后仔稚鱼密度开始波动下降。就空间特征而言,北岸仔稚鱼密度均值最高为108 ind./100 m3,南岸最低为79 ind./100 m3,南岸、河道中线和北岸仔稚鱼密度差异不显著(P>0.05)。冗余分析(RDA)表明,水温、水位、溶氧量和透明度与仔稚鱼密度关联性较强。研究结果填补了石臼湖水域鱼类早期资源的研究空白,可为通江湖泊鱼类资源养护和生态修复提供科学依据。

关键词: 早期资源 时空特征 环境因子 石臼湖

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斑节对虾耐高温性状的遗传力评估

河北渔业 2025

摘要:本研究通过急性高温胁迫试验,评估了20个斑节对虾(Penaeus monodon)家系的耐热性差异及遗传参数。试验设定38℃恒温条件(升温速率≤1℃/12 h),记录个体存活时间并采用单性状动物模型进行了分析。结果表明:斑节对虾家系间耐热性呈极显著差异(P<0.000 1),平均存活时间48~150 h;斑节对虾耐高温性状遗传力估计值为0.20±0.02(Z=10,P<0.01),属中等遗传力范畴,显示该性状具有选育潜力。

关键词: 斑节对虾(Penaeus monodon) 高温胁迫 存活时间 遗传力

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温度对美洲鲥胚胎发育的影响

水产学报 2025 北大核心 CSCD

摘要:【目的】研究不同孵化温度对美洲鲥胚胎发育、仔鱼孵化的影响。【方法】实验设置16、18、20、22和24℃共5个孵化温度,观察胚胎发育情况和鱼苗存活率,并分析孵化温度为18℃时美洲鲥不同胚胎发育阶段基因表达情况。【结果】16、18、20和22℃4个孵化温度下都能观察到胚胎的完整发育过程。随着孵化温度的升高,孵化总时长减少,孵化温度为16℃、18、20和22℃时,从受精卵到仔鱼出膜总用时分别为103 h 50 min、84 h 40 min、78 h 40 min和64 h 50 min。孵化水温为18和20℃时,孵化率、仔鱼存活率显著升高。孵化水温22℃时,胚胎死亡率显著高于16、18和20℃。18℃孵化温度下,美洲鲥胚胎中hif1α、hspb1、fbf1、hec、asgr1和vegfα等基因在细胞增殖期表达抑制,而细胞分化期表达显著激活。在出膜期和出膜前的器官形成期,hec的表达被显著激活。在胚胎发育早期sod和gst高表达,而hspb1和hif1α则是在器官形成后期和出膜期高表达。Rbpj在胚胎发育早期的多细胞器和囊胚期显著高表达,并随着胚胎的发育表达下调。【结论】美洲鲥孵化最适温度为18~20℃,囊胚期是美洲鲥胚胎发育的关键时期,从此时期开始,与细胞形成、细胞分裂相关的基因表达开始下调,而与器官形成、细胞分化等功能相关的基因表达明显上调。本研究为美洲鲥早期发育的调控及苗种繁殖、选育提供了参考依据。

关键词: 美洲鲥 温度 胚胎发育 基因表达 遗传育种

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海水养殖中华鲟亚成体行为特征的观察

渔业信息与战略 2025

摘要:为研究海水养殖环境下中华鲟亚成体昼夜行为节律特征,每天0∶00—6∶00、6∶00—12∶00、12∶00—18∶00和18∶00—24∶00观察记录其活动情况,统计分析尾摆频率、游泳速度、游泳距离、改变方向频率、浮出水面频率和翘头频率。海水养殖中华鲟亚成体的尾摆频率在18∶00—24∶00和0∶00—6∶00较高,分别为(60.00±4.45)次·min-1与(60.00±5.53)次·min-1,在6∶00—12∶00和12∶00—18∶00较低,分别为(53.00±4.60)次·min-1与(52.00±6.45)次·min-1;游泳速度在18∶00—24∶00和0∶00—6∶00较快,分别为(0.45±0.05)m·s-1与(0.46±0.04)m·s-1,在6∶00—12∶00和12∶00—18∶00较慢,分别为(0.40±0.05)m·s-1与(0.39±0.06)m·s-1;游泳距离在18∶00—24∶00和0∶00—6∶00较大,分别为(1 085.61±115.99)m·0.5h-1与(1 058.56±111.14)m·0.5h-1,在6∶00—12∶00和12∶00—18∶00较小,分别为(927.28±110.55)m·0.5h-1与(947.06±161.26)m·0.5h-1;改变方向频率在18∶00—24∶00和0∶00—6∶00较高,分别为(5.00±2.20)次·0.5h-1与(6.00±1.97)次·0.5h-1,在6∶00—12∶00和12∶00—18∶00较低,分别为(4.00±2.15)次·0.5h-1与(3.00±1.49)次·0.5h-1;且尾摆频率、游泳速度、游泳距离和改变方向频率4个指标在18∶00—24∶00、0∶00—6∶00、6∶00—12∶00和12∶00—18∶00时间段之间均有显著性差异。实验结果表明海水养殖中华鲟亚成体活动具有昼夜节律变化特征,且夜晚活动频率显著增大。根据本实验中不同时间段的游泳距离计算出海水养殖中华鲟亚成体平均白天12 h可游22.49 km,晚上12 h可游25.73 km,推测中华鲟亚成体平均一个昼夜(即24 h)可游动约48.22 km,一年可游动约17 600 km。本研究结果可为中华鲟健康监测、资源保护及管理决策提供参考。

关键词: 海水养殖 中华鲟亚成体 昼夜节律 行为特征

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