文献类型： 中文期刊

作者： 黄艳娜 ¹ ; 王金斌 ¹ ; 王赛赛 ¹ ; 段赛菲 ¹ ; 周茂超 ¹ ; 唐雪明 ¹ ;

作者机构： 1.上海市农业科学院生物技术研究所

关键词： 保加利亚乳杆菌ATCC11842;L-乳酸脱氢酶同工酶;L-乳酸;基因克隆表达;L-LDH(乳酸脱氢酶)酶活

期刊名称： 微生物学杂志

ISSN： 1005-7021

年卷期： 2022 年 42 卷 005 期

页码： 12-18

收录情况： CSCD

摘要： 通过对保加利亚乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus)L-乳酸脱氢酶(L-lactate dehydrogen-ase,L-LDH)同工酶基因的异源表达、酶活测定和摇瓶发酵研究L-LDH在乳酸合成中的作用.将保加利亚乳杆菌ATCC11842中L-乳酸脱氢酶基因ldb0120和ldb0094分别克隆至载体pET28a(+)中,构建重组表达载体pET28aldb0120和pET28aldb0094,并转化到大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中进行表达.进一步对重组蛋白进行Ni-NTA柱亲和层析和酶学活性测定,结果显示,LDB0120和LDB0094的比活力分别为0和25 U/mg,表明LDB0094是具有低活性的L-乳酸脱氢酶,而LDB0120不具有活性.对两株重组菌分别进行好氧和微好氧发酵,重组菌E.coli BL21/pET28aldb0094在好氧和微好氧条件可以合成L-乳酸,浓度分别为41.9和227.9 mg/L,而菌株E.coli BL21/pET28aldb0120在两种培养条件下均基本不合成L-乳酸,推测保加利亚乳杆菌中L-乳酸脱氢酶LDB0094为催化L-乳酸合成的关键酶.首次对保加利亚乳杆菌的L-乳酸脱氢酶同工酶基因进行研究,通过基因异源表达、蛋白纯化、酶活测定和摇瓶发酵,揭示Ldb0094酶为保加利亚乳杆菌ATCC11842中催化L-乳酸合成的关键酶.