文献类型： 中文期刊
作者： 姚琳 1 ; 寇晓霞; 江艳华; 王联珠; 吴清平; 翟毓秀;
作者机构： 1.农业部水产品质量安全检测与评价重点实验室
关键词： 诺如病毒;VP2蛋白;昆虫细胞;表达;亚细胞定位;Norovirus, VP2 protein, Insect cell, Expression, Subcellular localization
期刊名称： 微生物学通报
ISSN： 0253-2654
年卷期： 2012 年 39 卷 003 期
页码： 378-385
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 【目的】利用杆状病毒表达系统表达诺如病毒(GenegroupII)VP2蛋白,分析其亚细胞定位,为深入研究VP2蛋白的功能奠定基础。【方法】设计可扩增完整ORF3基因片段的引物P1和P2,在下游引物中引入6×His标签的编码序列,从质粒pMD—ORF3中克隆了含有6×His编码序列的ORF3基因,与pFastBacl载体连接,构建重组质粒pFB—ORF3,转化DH10Bac感受态细胞获得重组杆状病毒基因组Bac—ORF3,脂质体介导转染sf9昆虫细胞获得表达VP2蛋白的重组杆状病毒Ac—VP2,感染sf9细胞后,收集病变细胞,采用抗6×His标签的单克隆抗体作为一抗进行Westernblot与间接免疫荧光实验鉴定。【结果】Westernblot实验证实Ac—VP2感染的sf9细胞在约29kD处出现特异性条带:间接免疫荧光实验证实Ac—VP2感染的sf9细胞出现特异性绿色荧光,并且VP2主要定位于sf9的细胞核与细胞膜。【结论】诺如病毒VP2蛋白在Ac-VP2感染的sf9细胞中获得成功表达,并且主要定位于sf9细胞的细胞核与细胞膜。
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