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玉米磷酸丙糖异构酶基因的克隆及原核表达

文献类型： 中文期刊

作者： 马芳芳 1 ; 苏彦冰 1 ; 张彬 1 ; 李红英 1 ; 韩渊怀 1 ;

作者机构： 1.山西农业大学

关键词： 玉米;磷酸丙糖异构酶;基因克隆;原核表达

期刊名称： 山西农业大学学报(自然科学版)

ISSN： 1671-8151

年卷期： 2016 年 36 卷 06 期

页码： 381-386+438

摘要： 为克隆玉米(Zea mays L.)磷酸丙糖异构酶基因ZmTPI,并进行序列分析和原核表达研究,根据玉米TPI基因的cDNA全长序列设计特异引物,以玉米叶片总RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增得到了约750bp的基因编码区cDNA片段,T/A克隆后进行了序列测定及序列分析,随后将克隆到的该基因片段构建到原核表达载体PGEX-4T-1上,得到的重组表达质粒GST-ZmTPI转化Bl21进行融合蛋白的诱导表达及纯化。结果显示,玉米ZmTPI(GenBank:EU959275)cDNA全长1 216bp,753bp开放阅读框编码250个氨基酸,推测分子量26.7205kDa,理论等电点为5.12;该蛋白具有高度保守的TIM结构域,与其它高等植物的同源蛋白有很高的相似性;进化树分析表明,玉米TPI与甘蔗亲缘关系最近,处于同一进化支;SDS-PAGE检测结果显示,成功诱导表达并且纯化了与预期大小一致的融合蛋白。玉米ZmTPI蛋白的基因克隆和原核表达及纯化的成功,为进一步研究目的蛋白的酶活性质及生物学功能奠定了基础。

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