文献类型： 中文期刊

作者： 许英豪 ¹ ; 袁德保 ² ; 张海德 ² ; 李芬芳 ² ; 李奕星 ² ; 王朝政 ² ; 陈娇 ² ; 彭建 ² ; 董安华 ² ;

作者机构： 1.海南大学食品学院

2.海南大学食品学院;中国热带农业科学院海口实验站海南省香蕉遗传改良重点实验室

关键词： pH敏感型聚合物;木瓜蛋白酶;纯化

期刊名称： 现代食品科技

ISSN： 1673-9078

年卷期： 2016 年 02 期

页码： 158-163

收录情况： 北大核心

摘要： 本文以四种丙烯酸类单体合成了一种pH敏感型聚合物(PMDMN)。该聚合物连接金属螯合剂(IDA)后与Cu~(2+)或Fe~(3+)通过配位键形成聚合物PMDMN-Cu或PMDMN-Fe。首先对聚合物的红外光谱、等电点及回收率进行了测定。其次,探讨了PMDMN-Cu、PMDMN-Fe对木瓜蛋白酶粗酶的吸附条件,包括pH、时间及NaCl浓度。通过对洗脱液的酶活回收率的测定,考察了咪唑、盐酸胍、EDTA及其浓度配比的洗脱效果。最后通过SDS-GAGE对最优洗脱条件的酶液纯度进行了验证。结果显示:接枝金属配基前后的等电点分别为5.15或5.08,回收率皆大于95%(5个吸附-洗脱循环后);PMDMN-Cu、PMDMN-Fe最适吸附pH值均为7.0,并于120 min和210 min达到吸附平衡,最大吸附量分别为5.09 mg、4.58 mg,NaCl浓度的增加能一定程度增加木瓜蛋白酶的吸附量。在洗脱方案中,0.5 mol/L咪唑+1.0 mol/L盐酸胍具有最好的洗脱效果,洗脱率皆接近95%,同时不会造成金属配基的泄露。SDS-PAGE显示PMDMN-Cu和PMDMN-Fe都能大幅度提高木瓜蛋白酶的纯度,纯化倍数分别为4.29和4.48。