文献类型： 中文期刊
作者： 教杨 1 ; 曲梦 1 ; 桂彬彬 1 ; 江艳华 1 ; 王联珠 1 ; 姚琳 1 ;
作者机构： 1.大连工业大学食品学院;农业农村部水产品质量安全检测与评价重点实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所
关键词： 太平洋牡蛎;类FUT10基因;原核表达
期刊名称： 食品安全质量检测学报
ISSN： 2095-0381
年卷期： 2022 年 08 期
页码： 2573-2579
收录情况： 北大核心
摘要： 目的 获取太平洋牡蛎类α1,3岩藻糖基转移酶10 (α1,3 fucosyl-transferase 10-like, FUT10-like)蛋白并探究与人FUT10的免疫相似性。方法 本研究基于课题组前期克隆完整的类FUT10基因cDNA,依照大肠杆菌表达蛋白的密码子偏爱性,利用GenSmart Optimization在线优化软件对类FUT10基因开放阅读框序列进行优化并合成,亚克隆至载体pET-28a(+),得到重构质粒pET-OFu3,转入大肠杆菌BL21(DE3),通过异丙基-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-D-thiogalactoside,IPTG)诱导后获取目的蛋白,进行蛋白质印迹法(Westernblot)鉴定。结果 在37℃、IPTG终浓度为1.0 mmol/L诱导4 h后,出现蛋白分子量大小约为55 kDa的条带。该蛋白条带与抗6×His(组氨酸标签)抗体、抗人FUT10抗体均能发生特异性结合。结论 优化后的类FUT10蛋白与人体转移酶FUT10具有相似的免疫原性,类FUT10蛋白的可溶性表达为探究太平洋牡蛎体内Ⅱ型血型抗原合成路径提供研究基础。
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