文献类型： 中文期刊

作者： 赵冬敏 ¹ ; 黄欣梅 ¹ ; 刘宇卓 ¹ ; 韩凯凯 ¹ ; 谢星星 ¹ ; 刘晓燕 ¹ ; 李银 ¹ ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院兽医研究所,农业部兽用生物制品工程技术重点实验室,国家兽用生物制品工程技术研究中心

关键词： 鹅坦布苏病毒;E蛋白质;结构域Ⅰ和Ⅱ;大肠杆菌

期刊名称： 江苏农业学报

ISSN： 1000-4440

年卷期： 2014 年 03 期

页码： 590-594

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了实现鹅坦布苏病毒E蛋白质结构域I和II在大肠杆菌中的表达。利用PCR方法扩增得到目的片段,并引入FLAG标签序列(DYKDDDDK),构建重组表达质粒pET28a-E-I/II。转化至BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达目的蛋白质,并对其进行SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定。结果显示,PCR扩增得到约900 bp的目的片段,经鉴定成功构建重组表达载体pET28a-E-I/II。重组菌在IPTG诱导4 h后在37 000处出现目的蛋白质并且表达量达到高峰。经超声波破碎后SDS-PAGE分析显示,融合蛋白质以包涵体形式存在。Western-blot结果显示,重组蛋白质与FLAG单抗和E蛋白质阳性血清均可发生特异性反应。表明鹅坦布苏病毒E蛋白质结构域Ⅰ和Ⅱ在大肠杆菌中成功表达,经鉴定重组蛋白质具有良好的免疫反应性。