文献类型： 中文期刊

作者： 张奇 ¹ ; 姚琳 ² ; 江艳华 ² ; 李风铃 ² ; 张媛 ² ; 许东勤 ² ; 朱文嘉 ² ; 郭莹莹 ² ; 王联珠 ² ; 翟毓秀 ³ ;

作者机构： 1.上海海洋大学;中国水产科学研究院黄海水产研究所农业部水产品质量安全检测与评价重点实验室农业部水产品质量安全风险评估实验室(青岛);獐子岛集团股份有限公司

2.;上海海洋大学;中国水产科学研究院黄海水产研究所农业部水产品质量安全检测与评价重点实验室农业部水产品质量安全风险评估实验室(青岛);獐子岛集团股份有限公司

3.;上海海洋大学;中国水产科学研究院黄海水产研究所农业部水产品质量安全检测与评价重点实验室农业部水产品质量安全风险评估实验室(青岛);獐子岛集团股份有限公司;

关键词： 诺如病毒;装甲RNA;Qbeta噬菌体;标准参考样品;实时荧光定量RT-PCR

期刊名称： 中国生物工程杂志

ISSN： 1671-8135

年卷期： 2018 年 01 期

页码： 42-50

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的:针对目前检测领域缺乏诺如病毒(Norovirus,No V)核酸标准样品这一瓶颈,基于Qbeta噬菌体装甲RNA技术构建内含GII型No V检测靶标RNA的病毒样颗粒(virus like particles,VLPs)标准参考样品。方法:人工合成包含Qbeta噬菌体成熟酶编码基因、衣壳蛋白编码基因、包装位点、ISO/T15216-2 2012中规定的GII型No V检测靶标对应的c DNA序列及辅助多克隆位点的DNA片段QINVGII,将其克隆到p ET-28a(+)载体中,构建重组质粒p ET-QINVGII。将p ET-QINVGII转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞并诱导表达。表达产物经SDS-PAGE和透射电镜分析后,利用氯化铯密度梯度离心,制备纯化VLPs,并对纯化后的VLPs开展均匀性、稳定性及定值研究。结果:SDS-PAGE结果证实重组大肠杆菌在14.1k Da左右有目的条带表达;透射电镜下可观察到大量结构完整、直径约为25nm的VLPs。定值结果显示,制备的VLPs样品中GII型No V检测靶标RNA的含量为(1.06±0.06)×10~7copies/μl;均匀性分析结果表明样品均匀性良好,即F=2.24