文献类型： 中文期刊

作者： 马平 ¹ ; 杨婧 ¹ ; 刘宇卓 ¹ ; 李银 ¹ ; 黄欣梅 ¹ ; 赵冬敏 ¹ ; 韩凯凯 ¹ ; 章丽娇 ¹ ; 刘青涛 ¹ ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院兽医研究所

关键词： 禽流感病毒;NS1蛋白;原核表达;蛋白纯化;蛋白免疫印迹

期刊名称： 江苏农业科学

ISSN： 1002-1302

年卷期： 2022 年 50 卷 001 期

页码： 40-44

收录情况： 北大核心

摘要： 为对H9N2亚型禽流感病毒(AIVs)NS1基因进行原核表达,并对表达产物进行抗原性分析,根据NS1基因合成1对特异性引物,进行PCR扩增,将扩增片段连接至PMD18-T载体,通过序列测定和比对筛选出保真基因克隆;将保真基因克隆至pET32a表达载体,构建重组质粒pET32a-NS1后转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,加入IPTG进行诱导表达;并对IPTG使用浓度和诱导时间进行优化,对表达的重组蛋白用His-tag镍柱进行纯化,利用Western Blot和免疫荧光技术对纯化的重组蛋白进行鉴定及免疫原性的测定.结果显示,本试验成功扩增出H9 N2 AIVs的NS1基因,并筛选到保真克隆;带有NS1保真基因的重组载体pET32a-NS1可在大肠杆菌中进行IPTG诱导表达,其中,IPTG最佳使用浓度为2 mmol/L、最佳诱导时间为8 h时表达量最大,并且表达产物主要存在于包涵体中;纯化后的重组蛋白可被抗His标签识别,利用重组蛋白制备的抗体可识别H9N2 AIVs在细胞内表达的NS1蛋白,说明重组蛋白具有良好的免疫原性,该试验为H9N2 AIVs NS1蛋白的功能特性和免疫学研究奠定了基础.