文献类型： 中文期刊

作者： 韩凯凯 ¹ ; 李银 ¹ ; 黄欣梅 ¹ ; 赵冬敏 ¹ ; 刘宇卓 ¹ ; 刘青涛 ¹ ; 谢星星 ¹ ; 安凤娇 ¹ ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心

关键词： 鹅坦布苏病毒;NS5蛋白;原核表达

期刊名称： 浙江农业学报

ISSN： 1004-1524

年卷期： 2015 年 27 卷 10 期

页码： 1704-1709

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 通过在大肠杆菌中表达鹅坦布苏病毒非结构蛋白NS5对其纯化,并进行特性分析。根据鹅坦布苏病毒JS804株非结构蛋白NS5基因序列,设计1对特异性引物,利用PCR技术扩增得到全长NS5基因序列,并将其定向克隆至原核表达载体p ET32a中,获得重组表达质粒p ET32a-NS5,经双酶切鉴定及测序正确后,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中。经IPTG诱导表达,表达的重组融合蛋白最终经SDS-PAGE及Western-blotting鉴定。结果显示,NS5融合蛋白分子质量约为120 ku,在诱导后5 h达到表达量高峰,融合蛋白以包涵体形式存在,Western-blotting显示原核表达的蛋白可被兔抗鹅坦布苏病毒血清特异性识别,表明以NS5蛋白为抗原制备的多克隆抗体具有较高的敏感性与特异性。