文献类型： 中文期刊

作者： 田佳琳 ¹ ; 董蓓蓓 ¹ ; 唐传红 ² ; 周帅 ² ; 冯娜 ² ; 冯杰 ² ; 张劲松 ² ; 谭贻 ² ;

作者机构： 1.上海海洋大学食品学院

2.上海市农业科学院食用菌研究所

关键词： 灵芝;双核体;基因位点纯合菌株;CRISPR/Cas9;单单杂交

期刊名称： 食用菌学报

ISSN： 1005-9873

年卷期： 2025 年 32 卷 003 期

页码： 1-12

收录情况： 北大核心

摘要： 以营养缺陷型筛选标记基因ura3为靶标，利用基于核糖核蛋白（ribonucleoprotein, RNP）的成簇规律间隔短回文重复序列及其相关蛋白9(clustered regularly interspaced short palindromic repeat/CRISPR-associated protein 9,CRISPR/Cas9)基因编辑技术，对灵芝（Ganoderma lucidum）双核菌株‘沪农灵芝1号’G0119及从其分离的2个交配亲和的单核菌株L1、L2进行基因编辑，比较单双核的编辑效率；对编辑的2个单核，进行杂交，以获得ura3被编辑的双核基因位点纯合菌株。结果表明：利用CRISPR/Cas9基因编辑技术，获得G0119双核编辑株7个，经双单杂交实验鉴定，有6个G0119编辑株为L1核被编辑，1个为L2核被编辑，7个编辑株均为杂合子；获得L1、L2的单核编辑株分别为10、7个，其中L1核被编辑的效率为100%。将突变类型均为C碱基缺失的单核L1-2和L2-1编辑株以及A插入碱基的L1-5和L2-3编辑株分别进行单单杂交，获得2株ura3被破坏的双核纯合菌株。利用CRISPR/Cas9基因编辑与杂交技术靶向创制灵芝基因位点纯合菌株的方法，可为创制灵芝其他功能基因的基因位点纯合菌株提供新的方法，也可为灵芝双核菌株的基因表型分析研究提供新的途径。