文献类型： 中文期刊

作者： 姚琳 ¹ ; 逄凤娇 ¹ ; 张奇 ¹ ; 庞倩倩 ¹ ; 李风铃 ¹ ; 江艳华 ¹ ; 王联珠 ¹ ; 翟毓秀 ¹ ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院黄海水产研究所农业部水产品质量安全检测与评价重点实验室农业部水产品质量安全风险评估实验室(青岛);山东华宇工学院

关键词： 甲肝病毒;Qβ噬菌体;装甲RNA;标准参考样品;实时荧光RT-PCR

期刊名称： 微生物学通报

ISSN： 0253-2654

年卷期： 2019 年 01 期

页码： 209-216

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【背景】目前食品中甲肝病毒分子的检测缺乏安全、稳定的RNA标准参考样品,影响了检测结果的科学性与准确性。【目的】基于Qβ噬菌体装甲RNA技术构建内含甲肝病毒检测靶标的装甲RNA (Hepatitis A virus armored RNA,AR-HAV),并开展初步定值、均匀性、稳定性研究,为HAV分子检测提供标准参考样品。【方法】人工合成包含Qβ噬菌体成熟酶编码基因、衣壳蛋白编码基因、包装位点、HAV检测靶标cDNA序列的核酸片段QGBHAV,并亚克隆到pET-28a(+)中构建重组质粒pET-QGBHAV,转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行原核表达,利用超速离心、丙烯葡聚糖凝胶层析柱纯化AR-HAV后电镜观察。通过实时荧光RT-PCR对AR-HAV进行初步定值及均匀性和稳定性研究。【结果】SDS-PAGE结果表明重组质粒在大肠杆菌中有约14.1 kD的目的蛋白表达;纯化后的AR-HAV无杂蛋白和残留质粒;电镜下可见结构完整、大小约为25nm的病毒样颗粒;定值结果显示,AR-HAV中检测靶标RNA的含量为(2.57±0.12)×107 copies/μL;均匀性分析结果为F=1.23