文献类型： 中文期刊
作者： 姚琳 1 ; 寇晓霞 2 ; 江艳华 2 ; 王联珠 2 ; 吴清平 2 ; 翟毓秀 2 ;
作者机构： 1.农业部水产品质量安全检测与评价重点实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所
2.农业部水产品质量安全检测与评价重点实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所;广东省菌种保藏与应用重点实验室广东省微生物研究所
关键词： 诺如病毒;VP2蛋白;昆虫细胞;表达;亚细胞定位
期刊名称： 微生物学通报
ISSN： 0253-2654
年卷期： 2012 年 39 卷 03 期
页码： 378-385
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 【目的】利用杆状病毒表达系统表达诺如病毒(GenegroupⅡ)VP2蛋白,分析其亚细胞定位,为深入研究VP2蛋白的功能奠定基础。【方法】设计可扩增完整ORF3基因片段的引物P1和P2,在下游引物中引入6×His标签的编码序列,从质粒pMD-ORF3中克隆了含有6×His编码序列的ORF3基因,与pFastBac1载体连接,构建重组质粒pFB-ORF3,转化DH10Bac感受态细胞获得重组杆状病毒基因组Bac-ORF3,脂质体介导转染sf9昆虫细胞获得表达VP2蛋白的重组杆状病毒Ac-VP2,感染sf9细胞后,收集病变细胞,采用抗6×His标签的单克隆抗体作为一抗进行Western blot与间接免疫荧光实验鉴定。【结果】Western blot实验证实Ac-VP2感染的sf9细胞在约29 kD处出现特异性条带;间接免疫荧光实验证实Ac-VP2感染的sf9细胞出现特异性绿色荧光,并且VP2主要定位于sf9的细胞核与细胞膜。【结论】诺如病毒VP2蛋白在Ac-VP2感染的sf9细胞中获得成功表达,并且主要定位于sf9细胞的细胞核与细胞膜。
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