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boFcγRⅡ线性配体结合表位鉴定

文献类型： 会议论文

第一作者： LI Qing-Mei

作者： LI Qing-Mei 1 ; 郭军庆 2 ; GUO Jun-Qing 3 ;

作者机构： 1.Henan Provincial Key Laboratory of Animal Immunology Key laboratory of Animal Immunology of the Ministry of Agriculture,Henan Academy of Agriculture Sciences,Zhengzhou 450002,China

2.河南省农业科学院动物免疫学重点开放实验室 郑州450002

3.Henan Provincial Key Laboratory of Anim

关键词： 牛免疫球蛋白G受体Ⅱ细胞;基因表达;线性配体结合表位;抗体检测

会议名称： 2013年全国动物疫病与食品安全博士后学术论坛

主办单位： 河南省农科院免疫学实验室

页码： 214-222

摘要： 牛IgG Fc受体Ⅱ(boFcγRⅡ)与人FcγRⅡ (CD32)同源,胞外区含有2个Ig样结构域,为牛IgG的低亲和力受体,特异亲和牛IgG1但不结合牛IgG2.为在细胞表面表达受体分子,将boFcγRⅡ编码区cDNA亚克隆到表达载体pcDNA3,转染COS-7细胞,通过G418抗性筛选和连续克隆化,获得了在COS-7细胞表面稳定表达受体分子的boFcγRⅡ转染细胞株,其IgG1-RBC玫瑰花环形成率达90％左右,为boFcγRⅡ的功能研究提供了良好的技术平台.将boFcγRⅡ胞外区cDNA亚克隆到表达载体pcDNA3,转染NS0细胞,利用G418抗性细胞诱生小鼠腹水,以镍螯合层析纯化boFcγRⅡ分泌蛋白,该重组蛋白特异结合牛IgG1.为鉴定boFcγRⅡ的线性配体结合表位,在EC2结构域设计合成boFcγRⅡ多肽,Dot-blot分析表明boFcγRⅡ的122-131位多肽FYQDRKSKIF是特异结合牛IgG1的最短有效多肽,为boFcγRⅡ的线性配体结合表位,位于受体EC2结构域C-C'环;多肽突变结果显示,以Ala置换Phe122、Tyr123、Arg126、Lys127、Ser128、Lys129或Phe131均导致boFcγRⅡ线性配体结合表位多肽丧失结合牛IgG1活性,提示boFcγRⅡ 线性配体结合表位的上述氨基酸残基为结合牛IgG1的所必需.

分类号： S852.43:S858.26

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