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海豚链球菌兼职蛋白FBA的克隆表达、抗原性检测及免疫效果评价

文献类型: 会议论文

第一作者: 刘韬

作者: 刘韬 1 ; 陈德芳 2 ; 段靖 3 ; 王二龙 2 ; 王亚军 4 ; 汪开毓 2 ;

作者机构: 1.农业部渔用药物创制重点实验室,广东省水产动物免疫技术重点实验室,中国水产科学研究院珠江水产研究所,广东广州510380

2.四川农业大学鱼病研究中心,四川成都611130

3.四川农业大学动物疫病与人类健康/四川省重点实验室,四川成都611130

4.四川农业大学动物科技学院,四川成都 611130

关键词: 斑点叉尾鮰;海豚链球菌感染;兼职蛋白;抗原性;亚单位疫苗

会议名称: 2018水产动保产业发展论坛

主办单位: 中国水产学会`全国水产技术推广总站

页码: 00000100-00000115

摘要: 为检测斑点叉尾源海豚链球菌兼职蛋白(Fructose-1,6-bisphosphate aldolases,FBA)的抗原性和潜在的疫苗价值,本实验克隆得到斑点叉尾鮰源S.iniae DX09(基因组登陆号LXQF01)的fba基因序列(基因登录号A7N10RS06935),对克隆序列进行生物信息学分析,并通过原核表达得到重组FBA蛋白(rFBA),制备了兔抗rFBA血清用于FBA蛋白抗原性检测,同时通过免疫保护实验评估重组蛋白的免疫保护效果.结果显示,S.iniae DX09fba基因有1个由882个碱基组成的开放阅读框(ORF),编码293个氨基酸.生物信息学分析显示,其分子式为C1378H2172N368O422S8,分子质量为30.9ku,理论等电点为5.01,不具有信号肽和跨膜区域;具有保守的裂解酶结构域,且与其他来源的FBA蛋白同源性达100%;具有较高的抗原指数,表明其可形成多个抗原表位.SDS-PAGE检测结果发现,诱导表达的重组蛋白以包涵体的形式出现在沉淀中,大小约为47ku.Western-blot分析表明,兔抗rFBA血清能特异性结合菌体蛋白.同时免疫保护实验显示,重组蛋白对斑点叉尾鮰的相对保护率可达55%,免疫后鱼体抗体水平相对PBS对照组显著升高.本研究表明,原核表达的斑点叉尾鮰源S.iniae rFBA具备较好的抗原性和免疫保护作用,具有研发斑点叉尾鮰海豚链球菌亚单位疫苗的潜在价值.

分类号: S943.128:S941.42

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