科研产出
鸭疫里默氏杆菌RIA_0940基因缺失株的构建及主要生物学特性测定
《中国畜牧兽医 》 2022 北大核心
摘要：[目的]通过构建鸭疫里默氏杆菌RIA_0940基因缺失株并测定其生物学特性,探讨RIA_0940基因的潜在功能.[方法]以鸭疫里默氏杆菌RA-GD株为亲本株,扩增其左右同源臂及红霉素抗性基因(ermR)盒片段,构建左同源臂-ermR抗性基因盒-右同源臂融合片段,通过自然转化的方法缺失RA-GD株RIA_0940基因,并利用PCR筛选、鉴定RA-GDΔRIA_0940基因缺失株.分别对亲本株RA-GD和缺失株RA-GDΔRIA_0940的生长特性、对雏鸭的半数致死量、感染鸭血液和组织载菌量及对Vero细胞的黏附和入侵性能进行比较分析.[结果]试验成功构建了 RA-GD株的RIA_0940基因缺失株(RA-GDΔRIA_0940);生物学特性检测结果显示,RA-GDΔRIA_0940株体外生长能力较亲本株低,基因缺失株在生长后期生长受到显著或极显著抑制(P<0.05;P<0.01);RA-GDΔRIA_0940株对雏鸭的半数致死量是亲本株的114倍;与亲本株相比,缺失株感染鸭血液和组织的载菌量显著或极显著下降(P<0.05;P<0.01);缺失株对Vero细胞的黏附和入侵性能均极显著低于亲本株(P<0.01).[结论]本试验成功构建RA-GD株RIA_0940基因缺失株,该缺失株在体外培养条件下生长能力较亲本株低,对雏鸭的致病力、感染鸭血液和组织载菌量及对Vero细胞的黏附和入侵性能均显著或极显著低于亲本株.本试验结果为深入研究鸭疫里默氏杆菌的分子致病机理和研制基因工程疫苗奠定了基础.
关键词： 鸭疫里默氏杆菌 RIA_0940基因 基因缺失 生物学特性 毒力因子
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番木瓜WRKY转录因子家族基因鉴定及其响应短孢炭疽菌侵染的表达分析
《西北农林科技大学学报(自然科学版) 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：[目的]在全基因组水平鉴定番木瓜（Carica papaya L.） WRKY（CpWRKY）转录因子家族基因,并对其在短孢炭疽菌侵染下的表达量进行分析,为CpWRKYs家族的功能研究和利用奠定基础。[方法]采用生物信息学方法,鉴定和筛选CpWRKYs转录因子家族基因成员,并对其进行系统进化分析、基因结构分析、蛋白保守基序预测和启动子顺式作用元件分析;同时以番木瓜炭疽病耐性品种和敏感性品种为材料,利用短孢炭疽菌侵染采后果实,于0,24,48 h取样,对其转录组学数据进行分析,筛选2个品种中差异表达的CpWRKY基因,并利用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）试验对筛选结果进行验证。[结果]经系统分析从番木瓜中共鉴定出48个CpWRKYs成员,分为Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ3类;其中第Ⅱ类成员最多,可分为Ⅱa、Ⅱb、Ⅱc、Ⅱd和Ⅱe5个亚类。CpWRKYs家族成员的氨基酸残基数目为97～747个,等电点为4.83～9.71,为亲水性蛋白,大部分CpWRKYs的结构域高度保守,但有个别蛋白保守域缺失。在CpWRKYs家族中共预测到10个保守基序,其中包括含有WRKY七肽结构域的基序1、含锌指结构的基序2和同时含有七肽序列和锌指结构的基序3,其中基序3为大多数I类CpWRKY转录因子N端WRKY结构域所特有。Cp WRKYs含有1～6个外显子,同一家族或亚家族成员在基因结构上表现出一定的相似性,同时在Cp WRKYs启动子中检测到大量与生物胁迫和非生物胁迫相关的元件。对短孢炭疽菌侵染番木瓜的转录组数据进行分析,在番木瓜耐性品种中筛选出了特异表达的CpWRKY22、CpWRKY11、Cp WRKY2、CpWRKY33和CpWRKY25,RT-qPCR检测结果显示,这些基因在耐性品种中特异上调表达,在敏感性品种中的表达量无明显变化。[结论]番木瓜WRKY家族共包括48个成员,该家族基因结构和蛋白基序具有组间差异性和组内保守性。CpWRKYs家族成员强烈响应炭疽菌侵染,其中CpWRKY22、CpWRKY11、CpWRKY2、CpWRKY33和CpWRKY25是有潜力的抗炭疽病候选基因。
关键词： 番木瓜 WRKY家族 炭疽病 短孢炭疽菌 候选基因
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副猪嗜血杆菌外膜囊泡激活caspase-11和NLRP3炎性体诱导炎性细胞因子IL-1β和IL-18分泌
《微生物学通报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：【背景】副猪嗜血杆菌可引起多种炎性反应和较高死亡率，其致炎机制目前尚不清楚。【目的】探究副猪嗜血杆菌外膜囊泡（outermembranevesicles,OMVs）诱导RAW264.7细胞caspase-11及NLRP3炎性体活化的功能，以及caspase-11在OMVs活化炎性体诱导炎性因子表达过程中的关键作用。【方法】副猪嗜血杆菌OMVs感染RAW264.7细胞，收集6、12和24 h细胞，RT-PCR检测caspase-11、NLRP3、ASC和caspase-1 mRNA的表达；收集感染后48 h细胞，Western blotting检测caspase-11、NLRP3、ASC和caspase-1蛋白表达。收集感染后6、12、24、48和72 h细胞上清，ELISA检测interleukin （IL）-1β和IL-18表达水平；不同浓度OMVs （0、2.5、10、25、50和100μg/mL）感染RAW264.7细胞24 h,ELISA检测上清中IL-1β和IL-18水平。构建caspase-11沉默RAW264.7细胞株，收集OMVs感染后12、24和48 h细胞培养上清检测IL-1β和IL-18水平。【结果】Caspase-11mRNA转录水平在OMVs感染6、12和24h均极显著高于对照组（P＜0.01）;NLRP3 mRNA转录水平在感染后6、24 h极显著高于对照组（P＜0.01）;ASC mRNA转录水平在感染后12、24 h显著低于对照组（P＜0.05）;caspase-1 mRNA转录水平在感染后6、12和24 h显著高于对照组（P＜0.05）。Westernblotting结果显示，与空白对照组相比，OMVs组caspase-11、NLRP3、ASC和caspase-1蛋白表达均明显升高。OMVs感染RAW264.7细胞后12、24、48和72 h,IL-1β表达量极显著高于对照组（P＜0.01），而且呈现时间依赖性升高，IL-18表达水平在感染后6、12、24、48和72 h显著高于对照组（P＜0.05）；不同浓度OMVs感染细胞时，OMVs对细胞的致炎作用呈现剂量依赖性增强。Caspase-11沉默后，IL-1β水平在感染后12、24和48h显著低于未沉默组；Caspase-11沉默组IL-18表达量在感染后24、48h均显著低于未沉默组（P＜0.05）。【结论】副猪嗜血杆菌OMVs在副猪嗜血杆菌诱导的炎症反应中发挥重要作用，OMVs可诱导RAW264.7细胞caspase-11介导的非经典NLRP3炎性体信号通路活化。
关键词： 副猪嗜血杆菌 外膜囊泡 caspase-11 NLRP3炎性体 IL-1β IL-18
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酶解预处理工艺在烟叶茄尼醇提取中的应用
《中国烟草科学 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：为提高烟叶中茄尼醇的提取率,通过纤维素酶-半纤维素酶联用的方法对烟叶进行预处理,研究了酶种类、添加量、温度、pH和反应时间对烟叶提取液中游离茄尼醇和总茄尼醇含量的影响,并以Box-Behnken响应面法优化酶解工艺.结果表明,在单因素试验中,最优工艺为纤维素酶-半纤维素酶联用(酶添加量为每克烟叶各1.00 U)、温度55℃、pH 5.2和反应时间60 min;与未经酶解预处理的空白组(CK)相比,纤维素酶-半纤维素酶联用处理后,游离和总茄尼醇提取率分别增加305.61%和113.55%,响应面法优化后,总茄尼醇提取率较CK提高158.78%.本研究探索出一种提高茄尼醇提取率的有效方法,对烟草综合利用具有指导意义.
关键词： 烟叶;茄尼醇;酶解;响应面法
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26~45日龄竹丝鸡饲粮粗蛋白质需要量研究
《中国畜牧兽医 》 2022 北大核心
摘要：[目的]研究饲粮粗蛋白质水平对26~45日龄竹丝公鸡生长性能、胴体性状和血清生化指标的影响,为此生长阶段粗蛋白质精准供给提供理论基础.[方法]1 625只26日龄竹丝肉公鸡根据体重一致原则分为5个处理组,每个处理组5个重复,每个重复65只鸡,各处理组饲粮粗蛋白质水平依次为18.5%、19.5%、20.5%、21.5%和22.5%,试验期20 d.每个重复于试验结束当天挑选接近平均体重的2只鸡屠宰,制备血清和分割屠体,测定胴体性状和血清生化指标.[结果]①饲粮粗蛋白质水平极显著影响肉鸡终末体重、平均日增重和料重比(P<0.01),随着粗蛋白质水平的升高,终末体重和平均日增重呈线性和二次曲线升高(P<0.01),料重比呈线性和二次曲线降低(P<0.01).饲粮粗蛋白质水平对肉鸡平均日采食量和成活率无显著影响(P>0.05).②饲粮粗蛋白质水平显著或极显著影响肉鸡屠宰率(P<0.01)、半净膛率(P<0.01)和全净膛率(P<0.05),但对胸肌率、腿肌率和腹脂率无显著影响(P>0.05),且屠宰率和半净膛率随粗蛋白质水平的升高呈线性和二次曲线降低(P<0.01或P<0.05).③饲粮粗蛋白质水平极显著影响肉鸡血清胰岛素样生长因子1(IGF-1)和胆固醇(TC)含量(P<0.01),且TC含量随粗蛋白质水平的升高呈线性降低(P<0.05).饲粮粗蛋白质水平对肉鸡血清尿素氮(BUN)和甘油三酯(TG)含量无显著影响(P>0.05).[结论]饲粮21.5%粗蛋白质水平可改善肉鸡生长性能,19.5%~20.5%粗蛋白质水平可改善胴体性状,18.5%粗蛋白质水平可调节脂代谢.根据二次曲线模型估测,建议此生长阶段竹丝鸡饲粮粗蛋白质水平为21.41%~21.83%,可获得最佳生长性能.
关键词： 粗蛋白质水平 竹丝鸡 生长性能 胴体性状 血清生化指标
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百里香酚纳米复合诱导大豆蛋白自组装凝胶及机制
《现代食品科技 》 2022 北大核心
摘要：为了揭示百里香酚纳米复合诱导大豆蛋白自组装凝胶的途径及机制,该文研究了蛋白浓度、百里香酚添加量、反应初始pH值和反应终止pH值对大豆蛋白与百里香酚相互作用及其凝胶形成的影响.结果表明:四者协同调控大豆蛋白-百里香酚纳米复合物凝胶的形成,百里香酚荷载量的提高可降低大豆蛋白凝胶的临界蛋白浓度(75 mg/mL),反应结束后调节pH值至中性是凝胶形成的必要条件.在pH值为7.0条件下,百里香酚复合诱导大豆蛋白产生了明显的纤维化聚集,其颗粒平均粒径增加27.60%、光散射强度提高154.67%、Th T荧光强度提高93.78%,因此推测百里香酚复合主要通过诱导大豆蛋白纤维化聚集的产生继而诱导凝胶的形成.大豆蛋白-百里香酚纳米复合物凝胶在尿素和DTT溶液中的溶解度提高,因而推测维持凝胶网络的分子间相互作用力主要为氢键、疏水相互作用力和二硫键.研究结果为大豆蛋白冷致凝胶提供了新的技术解决方案,并为百里香酚的开发利用提供理论支撑.
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玫烟色棒束孢(Isaria fumosorosea)侵染小菜蛾的表达谱分析
《微生物学通报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：[背景]昆虫病原真菌对寄主的侵染是一个十分复杂的过程,是多基因共同作用的结果.玫烟色棒束孢(Isaria fumosorosea)IFCF01菌株对小菜蛾具有很高的致病力,然而有关玫烟色棒束孢对小菜蛾致病的相关基因少见报道.[目的]筛选玫烟色棒束孢侵染小菜蛾相关基因,为更好地利用玫烟色棒束孢防治小菜蛾提供基因靶点.[方法]采用第二代高通量测序技术RNA-Seq,对玫烟色棒束孢侵染小菜蛾2-3龄幼虫4、8、12、16、24、30、36 h的虫菌混合样品(处理组)及纯培养玫烟色棒束孢(对照组)进行测序分析并筛选差异表达基因,结合生物信息学方法分析差异基因涉及的功能模块和信号通路.[结果]玫烟色棒束孢侵染小菜蛾混合样品与纯培养玫烟色棒束孢对照组对比分析共获得28 384个差异基因,其中显著差异表达基因274个,上调表达118个,下调表达156个.筛选获得的显著差异表达基因,特别是上调表达基因可能与玫烟色棒束孢对小菜蛾的侵染有关.GO二级分类显示,差异表达基因能够注释到36个GO条目中,包含18个生物学过程、9个细胞组分和9个分子功能.KEGG通路分析显示共有171个差异表达基因(differentially expressed gene,DEG)注释到132个通路中,其中有66个DEG显著富集在14个通路中.这些显著差异表达基因中大部分为玫烟色棒束孢侵染过程中潜在致病毒力相关基因.[结论]本研究为筛选玫烟色棒束孢侵染小菜蛾致病相关基因提供重要数据库,也为阐明玫烟色棒束孢对小菜蛾的侵染机制提供基础.
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槲皮素对断奶仔猪生长性能、营养物质表观消化率、血清生化指标、粪便微生物及其代谢产物的影响
《动物营养学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：本试验旨在研究饲粮中添加不同水平槲皮素对断奶仔猪生长性能、营养物质表观消化率、血清生化指标、粪便微生物及其代谢产物的影响.试验选取144头健康且体重[(7.45±0.09)kg]相近的21日龄"杜×长×大"三元杂交断奶仔猪,随机分成3组,每组8个重复,每个重复6头猪.3组分别饲喂基础饲粮(对照组)、基础饲粮+200 mg/kg的槲皮素(Ⅰ组)和基础饲粮+400 mg/kg的槲皮素(Ⅱ组).试验期24 d,其中预试期5 d,正试期19 d.结果表明:1)Ⅱ组的结束体重和平均日增重显著或极显著高于对照组(P<0.05或P<0.01).2)Ⅰ组和Ⅱ组的干物质和钙表观消化率显著或极显著高于对照组(P<0.05或P<0.01),Ⅱ组的粗蛋白质表观消化率显著高于对照组(P<0.05).3)Ⅰ组和Ⅱ组的血清总蛋白含量显著高于对照组(P<0.05),Ⅱ组的血清尿素氮含量极显著低于对照组和Ⅰ组(P<0.01).4)Ⅰ组和Ⅱ组的粪便大肠杆菌数量显著或极显著低于对照组(P<0.05或P<0.01),Ⅱ组的粪便普雷沃氏菌属、梭菌簇Ⅳ和双歧杆菌属数量显著或极显著高于对照组(P<0.05或P<0.01).5)Ⅱ组的粪便乳酸和乙酸含量显著或极显著高于对照组(P<0.05或P<0.01),粪便异丁酸和支链脂肪酸含量显著低于对照组(P<0.05).Ⅰ组和Ⅱ组的粪便腐胺、尸胺和总生物胺含量极显著低于对照组(P<0.01).由此可见,饲粮中添加400 mg/kg的槲皮素可提高断奶仔猪干物质和粗蛋白质表观消化率,调节机体代谢,同时促进有益菌增殖,抑制潜在致病菌增殖,改变粪便微生物发酵模式,使其偏向碳水化合物发酵模式,进而维持肠道乃至整个机体的健康,最终促进动物生长.
关键词： 槲皮素 断奶仔猪 生长性能 表观消化率 血清生化指标 微生物 代谢产物
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栀子黄色素提取、精制及药理活性的研究进展
《食品工业科技 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：栀子是一种药食两用的植物资源,栀子黄色素是从栀子果实中分离出的活性成分,属于天然水溶性类胡萝卜素.研究表明,栀子黄色素具有抗氧化、抗肿瘤、抗抑郁、抗炎以及降血糖降血压等多种活性功能.因此,在食品及医药等领域极具开发潜力.但目前有关栀子黄色素药理活性的研究还不够系统,有必要对其进行详细分析与总结.本文简要综述了栀子黄色素的提取及精制方法,如传统溶剂浸提法、超声波提取法、柱层析法和膜分离法等,并在此基础上针对栀子黄色素的药理活性进行了系统的论述,总结了其治疗疾病的机制,以期为栀子黄色素的深入研究与应用提供理论指导.
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香蕉栽培品种基因组类型的分子标记鉴定体系建立
《分子植物育种 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：常见的栽培香蕉品种资源的基因组类型有AA、BB、AB、AAA、AAB、ABB、AAAA、AAAB等,一般依赖于外部植物学特征性状鉴定,耗时长、易出错.为建立一个快速、准确的香蕉基因组类型鉴定体系.本研究以已知基因组类型的香蕉品种资源为材料,利用流式细胞术与分子标记,建立了该体系:(1)首先使用流式细胞术鉴定倍性;(2)提取基因组DNA后,使用ITS-PCR-RFLP或BanActin分子标记鉴定是否含有A、B基因组;若只含有A或只含B基因组,结合倍性结果即可鉴定出类型为AA、BB、AAA、AAAA等;若同时含有A和B,倍性结果为二倍体,即可鉴定出类型为AB;(3)若同时含有A和B,且倍性结果为三倍体或四倍体时,则需下一步copia-IRAP分子标记鉴定.copia-IRAP分子标记结果在200 bp处有两条特异条带且倍性结果为三倍体,则鉴定为ABB类型,若为四倍体则鉴定为ABBB类型;若在300 bp和100 bp处有特异条带,如倍性结果为三倍体则鉴定为AAB类型,如果为四倍体则鉴定为AAAB或AABB类型.此外,本研究还使用该体系对8份未明确基因组类型的香蕉种质进行了鉴定,测得'鸡蕉'、'Vellapalayan kodan'为AAB类型,'Dwarf French Plantain'、'MY3'、'YN5'、'佳丽蕉'和'佛手蕉'为AA类型,'贵妃蕉'为AAA类型.本研究建立的体系可基本满足常见香蕉栽培品种的基因组类型鉴定,可为种质资源精准评价和杂交种质鉴定奠定基础.
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