科研产出
玉米SLAF标记的开发及其在玉米果皮纤维素含量BSA分析中的应用
《中国农业科学 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：【目的】降低果皮纤维素是甜玉米品质改良的重要目标,然而玉米果皮纤维素含量调控的研究甚少,相关调控基因尚未定位。利用纤维素含量差异的重组自交系(RILs)群体,通过特异位点扩增片段(specific-locus amplified fragment-sequencing,SLAF)测序和分离混池分析(bulked segregant analysis,BSA)定位控制玉米果皮纤维素含量的染色体区段,鉴定调控玉米果皮纤维素含量的候选基因。【方法】以果皮纤维素含量显著差异的E327和G5-1为亲本,构建重组自交系(RILs)。对RILs群体进行果皮纤维素含量的测定,并根据纤维素含量的结果选择纤维素含量高、低的样本进行混池,用于SLAF标签的鉴定和BSA分析。在BSA分析中,首先对两混池和2个亲本DNA用HaeⅢ和Hpy166Ⅱ进行酶切,回收414—464 bp的酶切片段进行Illumina建库,并进行SLAF测序,然后根据多态性SLAF标签开发SNP标记,利用SNP标记对玉米果皮纤维素含量进行关联分析,鉴定调控甜玉米果皮纤维素含量的染色体区段。分析这些区段所包含的玉米基因,并找到它们对应的拟南芥同源基因,通过查阅拟南芥相关基因功能研究的文献,进一步鉴定控制玉米果皮纤维素含量的候选基因。【结果】两亲本和2个混池SLAF建库测序得到的SLAF符合预期,基于SLAF测序数据,鉴定了73 786个多态性SLAF标签,这些SLAF标签均匀分布在玉米的10条染色体上。在这些多态性标签中得到了523 395 SNP位点信息。通过关联分析,调控果皮纤维素变异的基因被定位到玉米基因组的6个染色区段,都位于玉米的第5染色体上。在这些区段上,一共有47个玉米基因。通过进一步的研究分析,在这些关联的染色体区段最终确定了9个候选基因。【结论】定位到调控玉米果皮纤维素的含量的基因,表明此方法可以用于基因定位。
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3种三唑类杀菌剂对斑马鱼的毒性研究
《浙江农业学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：探究戊唑醇、丙环唑、苯醚甲环唑3种三唑类杀菌剂对斑马鱼的急性毒性、两两等毒性和等浓度配比时对斑马鱼的联合毒性。同时,通过6 d胚胎发育试验,研究3种三唑类杀菌剂对斑马鱼胚胎的发育毒性。研究显示,戊唑醇、丙环唑、苯醚甲环唑3种三唑类杀菌剂对斑马鱼胚胎、仔鱼和成鱼的急性毒性为中毒,苯醚甲环唑和丙环唑在等毒性和等浓度配比下对斑马鱼胚胎和仔鱼阶段为协同作用,其余组合对斑马鱼胚胎和仔鱼阶段为拮抗作用。发育毒性试验结果表示,3种三唑类杀菌剂对早期生命阶段毒性更强,可诱导斑马鱼胚胎、仔鱼出现一系列不良症状,包括孵化率下降、心率异常、生长抑制等。
关键词： 三唑类杀菌剂 斑马鱼 生命阶段 急性毒性 联合毒性 发育毒性
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卵泡刺激素剂量依赖性表达基因的筛选
《浙江大学学报(农业与生命科学版) 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：为开发能高效检测卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)制品生物活性的新方法,选取猪卵泡颗粒细胞,利用转录组测序技术对比FSH处理组(40 m IU/m L)和空白对照组细胞中基因的表达情况,分析并获得大量受FSH调控的候选基因,运用荧光定量聚合酶链式反应验证FSH处理后显著上调的基因,并进一步利用FSH浓度梯度(0、20、40、60、80、100 m IU/m L)处理卵泡颗粒细胞。结果显示,基因OLR1、LHCGR、SCARA5和S100A12的表达量呈现FSH浓度依赖性升高。在3倍递增的FSH浓度梯度(0、1、3、9、27、81、243、729 m IU/m L)下观察各基因表达量的变化,发现在0~243 m IU/m L的FSH浓度范围内,LHCGR基因的表达量与FSH浓度呈高度线性相关(R2=0.982)。因此,可通过检测FSH刺激条件下细胞中LHCGR基因的表达量,来评估FSH制品的生物学效价。
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芸薹属B基因组异附加系材料高效鉴定体系的创建
《分子植物育种 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：芸薹属B基因组包含许多在育种中有用的性状和基因,然而它的研究却非常有限。为了创建全套甘蓝-黑芥单体异附加系来解析B基因组,在本研究中我们针对芸薹属B基因组染色体创建了一套以SSR分子标记和FISH技术为核心的高效、快速、准确地鉴定和筛选体系。利用该体系,我们在以异源三倍体杂种(2n=26,CC.B)作为母本,用亲本甘蓝(2n=18,CC)作轮回亲本的回交后代中进行异附加系的鉴定和筛选。结果表明,采用该体系能够准确的鉴定和筛选出在C基因组上附加的每一条B基因组染色体的单体异附加系(2n=19,CC+1B1-8);并且效率很高,仅回交3代我们就获得了7个不同的单体异附加系。创建的甘蓝-黑芥单体异附加系对于黑芥基因组结构和进化的研究以及优良性状的应用都具有重要价值。
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毒死蜱和百菌清对斑马鱼早期发育阶段的联合毒性效应
《浙江农业学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：为评价毒死蜱和百菌清的单剂毒性和联合毒性,以斑马鱼为受试生物,采用静态法和实时荧光定量PCR方法,研究毒死蜱和百菌清单剂,以及二元组合时对斑马鱼胚胎的急性毒性和对斑马鱼幼鱼性腺轴相关基因的影响。结果显示,毒死蜱和百菌清对斑马鱼胚胎分别表现为中等和高等毒性,96 h-LC_(50)(半致死浓度)分别为2.139 mg·L~(-1)和0.353 mg·L~(-1)。毒死蜱和百菌清联合作用类型为协同作用,联合暴露时,对斑马鱼胚胎的96 h-LC_(50)分别为0.38 mg·L~(-1)和0.063 mg·L~(-1)。中浓度(26.7μg·L~(-1))和高浓度(106.7μg·L~(-1))的毒死蜱可以诱导斑马鱼幼鱼体内芳香化酶基因(CYP19α)、卵黄蛋白原基因(VTG1、VTG2)和雌激素受体基因(ERα、ERβ1、ERβ2)不同程度的上调表达;低浓度(1.1μg·L~(-1))百菌清诱导斑马鱼体内VTG1、VTG2、ERβ1和ERβ2基因的上调表达;低浓度(6.7μg·L~(-1)毒死蜱+1.1μg·L~(-1)百菌清)二元组合会引起斑马鱼体内VTG1、ERβ1、ERβ2和ERα基因下调。说明毒死蜱和百菌清对斑马鱼幼鱼具有雌激素内分泌干扰效应,但毒死蜱和百菌清二元组合对斑马鱼幼鱼的雌激素内分泌干扰效应降低。在评估农药对水生生物的危害时,应充分考虑复合污染时的联合效应。
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麦角硫因抑制双孢蘑菇褐变及其与能量代谢关系
《中国农业科学 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：【目的】控制和降低运输与贮藏过程中的褐变是目前双孢蘑菇保鲜的重点。研究麦角硫因处理对双孢蘑菇采后褐变的抑制效果,进一步分析褐变与能量代谢关系,为控制褐变和延长其保质期提供科学依据和生产指导。【方法】对具有代表性的双孢蘑菇品种AS2796喷涂浓度为0.12 mmol·L-1的麦角硫因溶液,对照组采用超纯水处理,于4℃低温下贮藏17 d,贮藏时定期测定其褐变度、菌盖白度、丙二醛含量(MDA)和能量相关物质(ATP、ADP、AMP含量)、能荷及琥珀酸脱氢酶(SDH)、细胞色素氧化酶(CCO)、H+-ATPase、Ca2+-ATPase等线粒体呼吸代谢相关酶活性。【结果】随着贮藏时间的延长,双孢蘑菇的褐变度和MDA含量逐渐增加,菌盖白度不断下降。与对照组相比,麦角硫因处理延缓了MDA含量和褐变度的上升及菌盖白度的下降,保护了细胞膜的完整性,降低了膜脂过氧化程度,有效抑制了双孢蘑菇菌盖表面及内部组织的褐变。贮藏过程中,双孢蘑菇的ATP含量呈现出先上升后下降的趋势,且始终维持在较高水平,最低点(贮藏第17天)也高于0.6 mg·g-1。整个贮藏期间,双孢蘑菇的ADP和AMP含量逐渐上升,处理组的ATP和AMP含量显著高于对照组(P<0.05),而ADP含量始终低于对照组。能荷值不断下降,但处理组双孢蘑菇的能荷值始终略高于对照组。表明麦角硫因处理延缓了双孢蘑菇采后ATP含量的下降,提高了ATP的利用效率,在一定程度上维持了较高的能荷水平。麦角硫因处理的双孢蘑菇SDH、H+-ATPase和Ca2+-ATPase酶活性显著高于对照组(P<0.05),且CCO酶活性在贮藏前期(第5天)和贮藏末期(第17天)相较于对照组也有所提升,从而维持了更好的线粒体功能,保证了ATP的高效合成。【结论】麦角硫因处理明显抑制了双孢蘑菇采后褐变,且其对褐变的抑制作用与能量代谢密切相关。
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2011—2017年浙江省猪病毒性腹泻病的流行病学调查
《中国兽医科学 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：为了解浙江省不同地区猪群中猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(Po RV)和猪Delta冠状病毒(PDCo V)导致猪病毒性腹泻的感染情况,本研究应用RT-PCR方法对2011—2017年收集的浙江省不同地区猪腹泻样品进行4种病毒的检测与分析。结果显示,2011年至今,PEDV阳性率为71.25%,TGEV阳性率为3.05%,Po RV阳性率为17.67%,PDCo V阳性率为8.75%;单独感染中PEDV阳性率为51.89%,TGEV阳性率为0.94%,Po RV阳性率为5.19%,PDCo V阳性率为4.25%;混合感染中PEDV/TGEV阳性率为2.4%,PEDV/Po RV阳性率为15.1%,PEDV/PDCo V阳性率为2.8%,Po RV/PDCo V阳性率为0.5%,PEDV/TGEV/PDCo V阳性率为0.5%。结果表明,浙江省不同地区存在这4种病毒所导致的猪病毒性腹泻病,其中在单独感染中以PEDV感染为主,混合感染中以PEDV/Po RV二重混合感染为主。不同年份中以PEDV感染最为严重,阳性率均在50%以上;Po RV感染在2015年上半年阳性率高达60.9%,其余年份均稳定在20%左右;TGEV每年均有零星发病;PDCo V在2016年感染最为严重,阳性率为22.9%。该结果为浙江省猪病毒性腹泻病的诊断和防控积累了资料。
关键词： 猪流行性腹泻病毒 猪传染性胃肠炎病毒 猪轮状病毒 猪Delta冠状病毒 RT-PCR 流行病学调查
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纳米二氧化钛对水生生物的急性毒性与安全评价
《浙江农业学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：为系统评价纳米二氧化钛(n Ti O_2)对水生生物的安全性,研究其对斜生栅列藻(Scenedesmus obliquus)、大型溞(Daphnia magna Straus)、斑马鱼(Brachydanio rerio),以及非洲爪蟾(Xenopus laevis)蝌蚪的急性毒性,并进行安全评价。结果表明,n Ti O_2对斜生栅列藻、大型溞、斑马鱼和非洲爪蟾蝌蚪的急性毒性分别为0.140 mg·L~(-1)(72 h-EC_(50))、1.26 mg·L~(-1)(48 h-EC_(50))、22.0 mg·L~(-1)(96 h-LC_(50))和5.02 mg·L~(-1)(96 hLC_(50)),毒性级别分别为高毒、中毒、低毒和中毒。
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黄绿绿僵菌侵染对褐飞虱部分生理生化指标的影响
《中国生物防治学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：本研究测定了3个不同浓度(1.0×10~7、1.0×10~8和1.0×10~9孢子/m L)黄绿绿僵菌孢悬液处理的褐飞虱Nilaparvata lugens St?l体内的羧酸酯酶(carboxylesterase,Car E)、谷胱甘肽-S-转移酶(glutathioneS-transferase,GST)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、过氧化物酶,酚氧化酶(phenoloxidase,PO)以及尿酸与6种必需氨基酸含量随侵染时间的变化。结果表明,3个浓度绿僵菌溶液处理的褐飞虱种群体内Car E与GST含量在处理72 h后均呈现显著下调趋势;而CAT与SOD含量随着处理时间延长,呈现上升趋势,其中SOD 3个浓度处理至72 h时分别达到430.87、377.64和376.16 U/mg显著高于对照的276.63 U/mg;酚氧化酶PO含量在24和48 h内均无显著变化,直至72 h,1.0×10~9孢子/m L浓度处理褐飞虱种群体内PO含量上升至316.43 U/mg。结果显示,虽然低浓度处理褐飞虱种群体内产生大量尿酸的囤积,但同一处理褐飞虱种群体内的6种必需氨基酸含量未呈现显著降低趋势,当处理72 h后,1.0×10~7孢子/m L处理褐飞虱种群体内赖氨酸(Lys)与苏氨酸(Thr)含量反而突然上升至204.68和112.38μg/g。结果显示绿僵菌的侵染会对褐飞虱体内解毒酶、保护酶以及氨基酸含量等造成影响。
关键词： 黄绿绿僵菌 褐飞虱 保护酶 解毒酶 酚氧化酶 尿酸 氨基酸
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稻瘟病菌分泌蛋白组学研究
《浙江农业学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：稻瘟病菌分泌蛋白在稻瘟病菌入侵水稻过程中发挥重要作用。收集稻瘟病菌(Guy11菌株)液体培养的上清液,富集蛋白,经过烷基、还原处理和酶解后,采用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)对酶解肽段进行分离及鉴定,利用信号肽预测工具Signal P和蛋白质亚细胞定位软件Protcomp对鉴定到的蛋白进行生物信息学预测验证。结果显示,共鉴定出30个稻瘟病菌的分泌蛋白,其中:24个蛋白具有N端信号肽,26个蛋白可分泌到胞外,3个蛋白定位在细胞膜上。对其功能进行分类,发现多数为酶类,参与水解及能量代谢。这些酶类和蛋白的发现与进一步研究,将为揭示稻瘟病菌侵染的机理提供帮助。
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