基于SLAF-BSA技术的蝴蝶兰花底色关联SNP分子标记开发与验证

肖文芳; 李佐; 陈和明; 吕复兵; 《中国农业大学学报 》 2021 北大核心 CSCD

摘要：为筛选与蝴蝶兰花黄白底色相关的单核苷酸多态性（Single-nucleotide polymorphism,SNP）位点,以’黄金豹’蝴蝶兰（♀）和’白天使’蝴蝶兰（♂）及其杂交后代为实验材料,选择33个分布在5个不同颜色分布类型组群中的黄色底色杂交后代和仅有的2个纯黄色个体作为黄色底色群体,35个分布在对应5个颜色分布类型组群中的白色底色杂交后代作为白色底色群体,分别提取DNA并等量混合后构建2个不同底色DNA混池,采用特异位点扩增片段测序（SLAF-seq）结合BSA技术,对与花底色密切相关的候选标记进行鉴定。结果表明:共获得164 874个SLAF标签,其中含21 031个多态性SLAF标签,多态率为12.76%。SLAF标记在亲本中的平均序列深度为42×,在子代中的平均序列深度为46×。关联分析表明,在阈值>0.745 5时,筛选得到15个与花底色相关的SLAF候选标记,具27个SNP位点。采用SNaPshot测序技术在2个亲本、11个子代和4个不同的种质资源中验证SNP位点,筛选发现,Marker35886和Marker70907的2个SNP位点与相关SLAF序列中的SNP位点一致,对花底色的鉴定准确率分别为66.67%和73.33%,组合准确率达93.33%。本研究筛选到的2个SNP位点可作为有效的分子标记位点在蝴蝶兰育种早期进行辅助选择。

关键词： 蝴蝶兰 底色 SLAF-BSA SNP

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转录组与蛋白组技术结合分析水稻耐低温分子机制

白嵩; 林文贵; 赵均良; 马雅美; 孔雷蕾; 张少红; 倪世明; 《分子植物育种 》 2021 北大核心 CSCD

摘要：低温冷害是影响水稻生长发育最严重的非生物胁迫之一.鉴定水稻耐冷相关功能基因、解析其调控耐冷性的分子机制,对水稻耐冷性分子育种有重要意义.本研究以强耐冷的粳稻品种'丽江新团黑谷'(LTH)和低温敏感的籼稻品种'三黄占2号'(SHZ-2)为材料,通过全基因组转录和蛋白表达谱分析这两个品种对低温响应的差异,鉴定LTH和SHZ-2差异表达的基因和蛋白及其信号通路.研究显示,两个材料中差异表达基因主要富集在蛋白代谢途径、糖代谢途径和膜转运相关途径等生物学过程,并发现抗病相关防卫基因在抗病但不耐冷的SHZ-2中上调,而在耐冷但不抗病的LTH中没有显著上调,表明水稻抗病性与耐冷性存在内在关系.此外,还发现LTH和SHZ-2之间存在很多在转录水平和翻译水平表达差异不一致的基因.本研究从转录和翻译水平对耐冷和低温敏感两个水稻品种在低温胁迫下的响应进行分析,研究结果促进对水稻苗期耐冷性分子调控机制的全面认识,并为下一步水稻耐冷基因的鉴定和耐冷性分子机制的深入研究奠定基础.

关键词： 水稻;耐冷性;转录组;蛋白质组

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广东省甘薯根结线虫的鉴定

罗梅; 陈欣瑜; 张新新; 陈胜勇; 董章勇; 黄立飞; 《中国农学通报 》 2021 CSCD

摘要：为了掌握广东省甘薯根结线虫病害发生情况,用常规分离法进行解剖分离,并对分离线虫进行形态鉴定和分子鉴定.从广东省粤东的陆丰、海丰和粤西的遂溪、吴川、廉江、雷州等地甘薯薯块带有明显根结的薯块进行分离,观察所分离根结线虫的2龄幼虫、雌成虫、会阴花纹特征,并通过根结线虫鉴定引物扩增条带约750 bp,结果表明引起广东省甘薯薯块危害的是象耳豆根结线虫.该病害逐年扩大危害对甘薯产业构成潜在威胁.

关键词： 广东省;甘薯;象耳豆根结线虫;危害

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高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱技术非靶向快速筛查荔枝花、蜂巢和蜂蜜中农药

王思威; 孙海滨; 刘艳萍; 曾广丰; 王潇楠; 常虹; 曾鑫年; 《食品科学 》 2021 北大核心 CSCD

摘要：利用高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱结合QuEChERS前处理技术,建立荔枝花、蜂巢和蜂蜜中未知农药残留的非靶向快速筛查方法。样品均由乙腈溶液提取,经无水硫酸镁、N-丙基乙二胺和十八烷基键合硅胶吸附剂净化,采用Xbridge BEH C₁₈色谱柱分离,以甲酸溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱,在电喷雾离子源、化学电离源和正反监测模式条件下进行检测。利用目标化合物特征离子的精确质量数、同位素匹配、二级碎片信息和保留时间进行数据库匹配,筛查可疑未知农药,在Targeted MS/MS模式下,通过相应碰撞能量下的离子碎片信息进一步确证,以基质匹配标准溶液法定量。结果显示:共计筛选出嘧菌酯、吡唑醚菌酯及其代谢物BF 500-3、苯醚甲环唑、多菌灵、毒死蜱、除虫脲和灭幼脲8种农药,在1～1 000μg/L范围内线性关系良好,相关系数r²均大于0.99,方法的检出限为0.03～0.50μg/kg,定量限为0.4～0.8μg/kg。8种农药在荔枝花、蜂巢和蜂蜜中的平均加标回收率为80%～96%,相对标准偏差为1.2%～6.1%。该法快速、简便、灵敏,可用于荔枝花、蜂巢和蜂蜜样品中未知农药的筛查和鉴定。

关键词： 荔枝花、蜂巢和蜂蜜 高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱 筛查 农药

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杂交稻优质不育系泰丰A获第二届广东农业科技创新大比武总决赛冠军

广东省农业科学院水稻研究所; 《广东农业科学 》 2021 北大核心 CSCD

摘要：8月30日,第二届广东农业科技创新比武大赛——"海大杯"广东种业科技创新大比武在广州国家现代农业产业科技创新中心举行。经过激烈角逐,广东省农业科学院水稻研究所首席科学家王丰研究员领衔的项目"杂交稻优质不育系泰丰A的创制与应用"力压群雄,获得本届金星奖暨总决赛冠军。

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百香果茎基腐病菌分离鉴定与药剂筛选研究

邝瑞彬; 杨护; 杨敏; 周陈平; 黄炳雄; 魏岳荣; 《中国农学通报 》 2021 CSCD

摘要：为研究百香果产业中多发病害茎基腐病的病原菌鉴定与防治问题,在广东省百香果主产区采集茎基腐病病株,结合形态学观察与分子测序方法鉴定分离病原菌菌株,并对其进行致病性检测,同时检测系列杀菌药剂对病菌生长及其致病性的影响。结果表明,通过形态特征观察、分子生物学鉴定,从百香果茎基腐病病株中分离获得的8个菌株鉴定为腐皮镰刀菌（Fusarium solani）。离体和活体致病力测试结果显示,致病力较高的菌株为FP6、FP7、FP2,其次为FP1、FP3、FP8、FP4,最低为FP5。不同药剂处理对病菌的生长及致病力均产生影响,其中30%苯甲嘧菌酯处理的抑制效果为最佳。研究结果可为后续百香果茎基腐病病理学、百香果抗病育种等研究提供基础。

关键词： 百香果 茎基腐病 镰刀菌 致病性 杀菌剂

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2,2'-偶氮二(2-脒基丙烷)二盐酸盐诱导的氧化应激对猪肠上皮细胞活力及线粒体功能的影响

鲁慧杰; 张莹; 田志梅; 容庭; 刘志昌; 邓盾; 马现永; 《动物营养学报 》 2021 北大核心 CSCD

摘要：本试验旨在评估2,2'-偶氮二(2-脒基丙烷)二盐酸盐(AAPH)诱导的氧化应激对猪肠上皮细胞(IPEC-J2细胞)活力及线粒体功能的影响,以期建立一种稳定的体外研究肠道氧化应激的模型.以不同浓度(0、30、32、34 mmol/L)AAPH处理IPEC-J2细胞24 h后,检测细胞活力、细胞增殖、细胞内总活性氧(ROS)含量、线粒体膜电位、线粒体DNA(mtDNA)拷贝数以及线粒体功能相关基因[线粒体转录因子A(TFAM)、线粒体转录因子Bl(TFBIM)、线粒体转录因子B2(TFB2M)、解耦连蛋白1(UCP1)、解耦连蛋白2(UCP2)、解耦连蛋白3(UCP3)]表达的变化.结果表明:AAPH对IPEC-J2细胞活力的影响呈剂量及作用时间依赖关系.与0 mmol/L AAPH处理相比,不同浓度(30、32、34 mmol/L)AAPH处理均显著抑制了 IPEC-J2细胞增殖(P<0.05),细胞活力显著下降(P<0.05),细胞内总ROS含量显著升高(P<0.05),细胞线粒体功能相关基因(TFAM、TFBIM、TFB2M、UCP1、UCP3)表达显著下调(P<0.05),mtDNA拷贝数显著降低(P<0.05).综上所述,AAPH诱导的氧化应激通过增加IPEC-J2细胞内总ROS含量引起细胞线粒体功能损伤,进而导致细胞活力下降,抑制细胞增殖.

关键词： AAPH;氧化应激;肠上皮细胞;线粒体

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顶复门原虫磷脂酶A₂蛋白家族研究进展

胡俊菁; 廖申权; 戚南山; 吕敏娜; 吴彩艳; 李娟; 蔡海明; 林栩慧; 于林增; 张健騑; 孙铭飞; 李国清; 《中国兽医科学 》 2021 北大核心 CSCD

摘要：顶复门原虫属于专性细胞内寄生的单细胞真核生物,其中多种属于重要病原,影响人类的健康和畜牧业的发展。已有研究表明,磷脂酶A₂为顶复门原虫发病机制中的关键酶,主要与顶复门原虫入侵、膜重塑等有关,可以影响寄生虫毒力和疾病进展,具有重要的生物学意义。而脂肪滋养蛋白磷脂酶A₂（PLP）家族基因结构域与细菌PLP相似性较高,与真核生物PLP存在显著差异,成为研究抗顶复门原虫药物靶点的热点。本文就近年来磷脂酶A₂家族中的关键酶PLP及磷脂酶A₂的生物学功能在顶复门原虫上研究进展进行综述,以期为寄生原虫病的防治提供理论依据。

关键词： 顶复门原虫 磷脂酶A₂ 生物学功能

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玉米肌动蛋白解聚因子ZmADF4基因克隆、转录活性及表达分析

王欣; 黄君; 李高科; 《南方农业学报 》 2021 北大核心 CSCD

摘要：【目的】克隆玉米肌动蛋白解聚因子4（ZmADF4）基因,并对其转录活性和表达模式进行分析,为探究玉米ADF家族基因的功能及调控机制提供参考依据,也为玉米抵抗逆境胁迫研究提供潜在的基因资源。【方法】采用同源克隆技术克隆玉米叶片ZmADF4基因,运用生物信息学软件分析其编码蛋白的理化性质、保守结构域及二、三级结构;通过原生质体瞬时转化进行亚细胞定位;利用酵母自激活分析该基因转录活性,下载RNA-Seq数据分析其在不同组织中的表达特性,并利用实时荧光定量PCR检测其在不同逆境胁迫下的表达情况。【结果】从玉米叶片克隆获得的ZmADF4基因,编码区（CDS）长度为420 bp,编码139个氨基酸残基,蛋白分子量为15.855 kD,理论等电点（pI）为7.66,属于亲水性蛋白,具有典型的植物ADF蛋白家族的保守结构域ADF_gelsolin,主要定位于细胞质中。ZmADF4基因不具有转录自激活效应,且在根、茎、叶、花丝、花药、胚、胚乳和果皮等组织中呈差异性表达,在茎、果皮和叶片中表达量较高。ZmADF4基因对高温胁迫、低温胁迫、高盐胁迫、干旱胁迫及脱落酸处理均有响应,其中高温胁迫下,整体呈上调表达趋势,而低温胁迫和脱落酸处理下,整体呈下调表达趋势,干旱和高盐胁迫下则呈先上调再下调表达的趋势。【结论】ZmADF4基因属于ADF基因家族成员,不仅参与玉米茎、果皮和叶片的生长发育调控,还参与低温、高温、干旱、脱落酸、盐胁迫等逆境响应调控。

关键词： ZmADF4 基因克隆 亚细胞定位 表达分析 非生物胁迫

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天津市小麦田荠菜对双氟磺草胺的抗性及其乙酰乳酸合成酶基因突变

李琦; 于金萍; 郭文磊; 刘亦学; 张惟; 《农药学学报 》 2021 北大核心 CSCD

摘要：为明确天津市小麦田荠菜种群对双氟磺草胺的抗性情况及可能的抗性机理,本研究在天津市静海区、武清区、宝坻区及蓟州区等荠菜发生严重地区的小麦田共采集到6个荠菜种群,采用整株水平测定法测定了6个荠菜种群对双氟磺草胺的抗性水平,并扩增、比对了其靶标乙酰乳酸合成酶（ALS）基因部分片段的差异。结果表明:6个荠菜种群对双氟磺草胺均产生了高抗性,抗性倍数在11.4～47.2之间。对抗性和敏感种群的ALS基因片段进行测定比对发现,6个荠菜种群ALS基因197位氨基酸均由脯氨酸（CCT）突变为丝氨酸（TCT）,该突变可能是导致荠菜种群对双氟磺草胺产生抗性的重要原因之一。

关键词： 荠菜 双氟磺草胺 抗性 乙酰乳酸合成酶 抗性机制 基因突变

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