科研产出
超高效液相色谱-串联质谱法测定浙贝母中6种农药残留
《农药学学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：建立了QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)同时测定浙贝母鲜样和干样中吡虫啉、啶菌齅唑、氟唑菌酰胺、嘧菌环胺、吡唑醚菌酯和阿维菌素共6种农药残留量的方法。样品用V(乙腈):V(水)=4:1混合溶液提取,经C_(18)50 mg+PSA 50 mg+MgSO_4 150 mg净化,采用UPLC-MS/MS电喷雾离子化正离子扫描和多反应监测模式(MRM)测定,基质匹配标准溶液外标法定量。结果表明:在0.001~0.2 mg/L范围内,6种农药的质量浓度与相应的峰面积间呈良好的线性关系,相关系数均大于0.994。6种农药在浙贝母鲜样中的定量限(LOQ)为0.01 mg/kg,检出限(LOD)为2×10~(–5)~3×10~(–4) mg/kg,在干样中的LOQ为0.05 mg/kg,LOD为1×10~(–4)~1×10~(–3) mg/kg。在0.01、0.5和2 mg/kg添加水平下,6种农药在浙贝母鲜样中的平均回收率均在80%~109%之间,相对标准偏差(RSD)在0.95%~13%之间(n=5);在0.05、0.5和2 mg/kg添加水平下,6种农药在浙贝母干样中的平均回收率均在77%~101%之间,RSD在0.89%~7.5%之间(n=5)。经实际样品检测验证,该方法快速、简便、可靠、高效,适用于同时检测浙贝母中吡虫啉、啶菌齅唑、氟唑菌酰胺、嘧菌环胺、吡唑醚菌酯和阿维菌素等农药的残留。
关键词： 超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS) 浙贝母 QuEChERS 农药 残留
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基于genic-SSR标记的MCID法鉴定浙江白沙枇杷地方种质资源
《果树学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：【目的】建立基于genic-SSR分子标记的鉴定白肉枇杷种质资源的方法,为白肉枇杷资源的品种审定与产业化利用提供依据。【方法】利用10对多态性枇杷genic-SSR引物对新收集的14份浙江地方白沙枇杷种质进行分子鉴定,并应用人工绘制品种鉴别示意图的方法(MCID法)与12个现有白沙枇杷品种建立品种鉴定图(CID)。【结果】仅用5对SSR引物就可将新收集的白沙枇杷新种质与现有品种区分。应用MCID法,依据扩增的多态性核酸片段与对应的引物构建了26份白沙枇杷资源的CID图。从CID图上可找出区分任意2个品种的引物。随机选择各亚组内、亚组间或小组内、小组间的6份种质进行验证,结果与得到的CID图谱一致。聚类结果表明,26个白沙枇杷种质与品种的聚类模式基本符合这些种质的地理起源与遗传背景信息。【结论】基于genic-SSR的MCID法是一种能有效鉴定白沙枇杷种质资源的方法,可应用于枇杷品种鉴定与品种指纹图谱构建。
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长期施肥对水田和旱地土壤微生物群落结构、活性碳氮及酶活性的影响
《浙江农业学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：为明确长期施肥对水田和旱地土壤微生物群落结构、活性碳氮含量及酶活性的影响,于2009年在浙江省东阳玉米研究所试验站进行了田间定位试验。试验由6个处理3次重复随机排列组成:水田无肥区(PCK),水田常规施肥区(PCF),水田测土配方施肥纯化肥区(PSTF),水田测土配方施肥化肥+有机肥区(PSTF+OF),旱地常规施肥区(DCF),旱地测土配方施肥化肥+有机肥区(DSTF+OF)。于2015年分析测定土壤养分、微生物生物量和群落结构。结果表明,与不施肥处理相比,施肥处理显著(P<0.05)提高土壤有效磷和速效钾含量,降低p H值。不同施肥处理对水田和旱地土壤的可培养细菌与放线菌数量无显著影响,仅PSTF+OF处理显著(P<0.05)提高土壤可培养真菌的数量。测土配方施肥+有机肥处理(PSTF+OF和DSTF+OF)显著(P<0.05)提高水田和旱地土壤的微生物量碳、氮含量。各处理对土壤纤维素酶活性无显著影响,但测土配方施肥+有机肥处理(PSTF+OF和DSTF+OF)显著(P<0.05)提高了土壤脱氢酶和过氧化氢酶的活性。总体来看,化肥和有机肥长期配合施用,可有效提高土壤肥力。
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thanatin串联抗菌肽原核表达研究
《浙江农业学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：抗菌肽thanatin是一类广谱性的阳离子抗菌活性肽,对病原性真菌有很好的杀灭效果。为了提高thanatin抗菌肽表达丰度,将3个thanatin单体拷贝基因进行串联,与MBP蛋白进行融合表达,表达的产物经过酶切纯化后,通过Western blot和质谱鉴定,结果表明3×thanatin在大肠埃希菌中成功表达,对核盘菌的抑菌活性测定结果表明,原核表达的3×thanatin最低抑菌浓度为6.6μmol·L~(-1),而化学合成的thanatin抗菌肽对核盘菌的抑菌浓度约为64μmol·L~(-1),3×thanatin抗菌肽对核盘菌的抑菌活性提升了约1个数量级。
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浙江省稻田系统秸秆还田问题及对策
《浙江农业学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：秸秆还田是实施肥药减施及有机养分替代的主要技术。稻-麦轮作是浙江北部和中部稻区的主要栽培模式,稻-油和稻-稻模式则主要分布在浙江中部和南部稻区。调查表明,浙江稻区不同栽培模式的秸秆还田与耕作方式主要有:双季稻田秸秆翻耕还田,稻-麦(油)轮作水稻秸秆覆盖还田,以及稻-麦(油)轮作水稻季的4种秸秆还田耕作方式———麦(油)秸秆覆盖还田免耕水稻直播方式、麦(油)秸秆还田浅耕水稻直播方式、麦(油)秸秆还田深耕水稻插秧方式、麦(油)秸秆还田深耕水稻直播方式。不同耕作及还田方式各有利弊,但同时存在秸秆量大、还田困难,肥料配施没有定量计算方法,病虫害加剧,土壤水分需要科学管理,农机需要合理选择与操作等问题。通过调查研究,参考已有的研究技术资料,针对秸秆还田存在的问题进行分析与总结,提出以下对策。1)采取方式轮换措施调和不同耕作类型及不同秸秆还田方式产生的不足。2)中等肥力农田以单季秸秆还田量5~6 t·hm~(-2)、全年秸秆还田量10~12 t·hm~(-2)比较适宜,超过的秸秆量建议通过综合利用方式加以解决。3)肥料配施采取以氮肥全季调施、前期适当增施,钾肥适当减施为主的秸秆还田施肥策略。4)病虫害防治采取提前翻耕、秸秆深埋、淹水闷田的措施。5)水分管理以易于机械耕作和秸秆还田后保持土壤湿度促进秸秆腐解为原则,晚稻提倡干湿交替的灌溉管理方式。6)机械类型应选择带有秸秆切碎装置的收割机,耕作机械要保证翻埋深度,以实现稳定与均匀的还田作业。
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低磷条件下过表达OsPHF1基因对粳稻农艺性状的影响
《中国水稻科学 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：【目的】磷酸盐转运体运输协助因子(PHF1)通过转录后调节特定磷转运蛋白,影响磷酸盐的利用效率。本研究通过培育过表达OsPHF1的无选择标记转基因粳稻空育131,研究在不同磷浓度环境中OsPHF1的过表达对粳稻空育131产量的影响,为培育可商品化的磷高效转基因水稻品种提供依据。【方法】利用双T-DNA方法构建OsPHF1的过表达载体,通过农杆菌侵染法和后续筛选获得了无选择标记的转基因空育131纯合株系,通过对T_3和T_4代转基因植株的田间试验,研究转基因品系在低磷浓度(75或112.5 kg/hm~2过磷酸钙)、中低磷浓度(225或300 kg/hm~2过磷酸钙)和正常磷浓度(450 kg/hm~2过磷酸钙)下的农艺性状。【结果】获得了3个无筛选标记的纯合OsPHF1过表达转基因空育131株系F18-18、F22-32和F25-6。其中,F22-32和F25-6的OsPHF1的表达量远高于野生型。大田试验显示,F22-32和F25-6株系的T_3代在中低磷(300kg/hm~2过磷酸钙)环境中,分蘖数比对照分别增加了55%和25%,增产幅度分别为38%和34%;F22-32和F25-6株系T_4代在低磷条件下(112.5kg/hm~2过磷酸钙)产量的增幅最大,增产了30%～35%;在中低磷条件下(225 kg/hm~2过磷酸钙)分蘖数和产量也有明显增加。【结论】双T-DNA法能用于培育过表达OsPHF1的无筛选标记转基因水稻。田间试验显示,高表达OsPHF1的转基因株系在中低磷条件下(112.5、225或300 kg/hm~2过磷酸钙)分蘖数和产量稳定增加。
关键词： OsPHF1 过表达 无选择标记的转基因水稻 低磷浓度 产量
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个人用葡萄糖传感器(PGM)即时检测金黄色葡萄球菌及血浆凝固酶鉴定
《中国兽医学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：建立基于个人用葡萄糖传感器(personal glucose meter,PGM)的血浆凝固酶阳性金黄色葡萄球菌(Staphylococus aureus,S.aureus)即时检测(point-of-care testing,POCT)方法,将定量和血浆凝固酶试验合并为一步完成,达到快速、简便、经济和准确的目的,便于推广应用。通过优化配方得到一种专用于PGM检测的Baird Parker-BHI-Glu混合培养基,并建立一套标准的检测方法;同时从自然界中分离纯化多株野生S.aureus;用加标回收法验证该方法与国标法在定量和血浆凝固酶试验上的符合程度,确定其可行性。结果显示:本试验成功设计优化了PGM即时检测血浆凝固酶阳性S.aureus的专用培养基,建立了检测标准方法,并制作了标准曲线,检测限为5.9×100CFU/mL,加标样品检出率及血浆凝固酶阳性样品检出率分别为100.00%和96.55%,检测时间不超过24h,为实际应用与商品化提供了理论支撑。
关键词： 个人用葡萄糖传感器 金黄色葡萄球菌 血浆凝固酶 即时检测法
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利用荧光蛋白标记研究稻瘟病菌有性世代的细胞结构
《中国细胞生物学学报 》 2018 CSCD
摘要：稻瘟病是水稻最重要的病害之一,同时稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)是植物病原真菌研究的模式生物。稻瘟病菌是异宗配合的子囊菌,但其有性世代的细胞学过程、形态结构、分子机制以及对病菌变异的贡献研究都较少,也缺乏必要的研究手段。该文利用荧光蛋白标记结合荧光染色的方法对稻瘟病菌有性世代结构进行了标记和显微观察,以期为稻瘟病菌有性生殖过程和机制研究提供方法与借鉴。将绿色荧光蛋白GFP和红色荧光蛋白m Cherry分别导入两个相对交配型的稻瘟病菌菌株Guy11(MAT1-2)和70-15(MAT1-1),各转化子及野生型按交配型组合对峙培养,观察有性世代结构中的荧光表达情况。结果表明,组蛋白H3启动子、核糖体蛋白RP27启动子和疏水蛋白MPG1启动子均可在稻瘟病菌有性孢子形成过程中高丰度表达。进一步利用这三种启动子和两种荧光蛋白对稻瘟病菌有性孢子的细胞器(细胞核、过氧化物酶体)进行标记和观察,结果表明,融合组蛋白H2B的m Cherry及融合核定位信号(NLS)的GFP均能有效标记子囊孢子细胞的细胞核,荧光集中而明亮;带有过氧化物酶体定位信号1(PTS1)的GFP可以有效地标记子囊孢子中的过氧化物酶体,每个细胞中均有数量不等的过氧化物酶体,表明子囊孢子中需要过氧化物酶体参与生化代谢。该文还利用脂肪染色剂尼罗红、BODIPY和细胞壁染色剂卡氏白结合荧光蛋白标记对子囊和子囊孢子进行组合染色。结果显示,尼罗红、BODIPY、卡氏白染色剂互不干扰,可以与不同颜色的荧光蛋白相互组合,从而更加清晰地标记子囊和子囊孢子的结构、细胞器和储藏物质。
关键词： 稻瘟病菌 有性世代 荧光蛋白 BODIPY 尼罗红 卡氏白
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玉米SLAF标记的开发及其在玉米果皮纤维素含量BSA分析中的应用
《中国农业科学 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：【目的】降低果皮纤维素是甜玉米品质改良的重要目标,然而玉米果皮纤维素含量调控的研究甚少,相关调控基因尚未定位。利用纤维素含量差异的重组自交系(RILs)群体,通过特异位点扩增片段(specific-locus amplified fragment-sequencing,SLAF)测序和分离混池分析(bulked segregant analysis,BSA)定位控制玉米果皮纤维素含量的染色体区段,鉴定调控玉米果皮纤维素含量的候选基因。【方法】以果皮纤维素含量显著差异的E327和G5-1为亲本,构建重组自交系(RILs)。对RILs群体进行果皮纤维素含量的测定,并根据纤维素含量的结果选择纤维素含量高、低的样本进行混池,用于SLAF标签的鉴定和BSA分析。在BSA分析中,首先对两混池和2个亲本DNA用HaeⅢ和Hpy166Ⅱ进行酶切,回收414—464 bp的酶切片段进行Illumina建库,并进行SLAF测序,然后根据多态性SLAF标签开发SNP标记,利用SNP标记对玉米果皮纤维素含量进行关联分析,鉴定调控甜玉米果皮纤维素含量的染色体区段。分析这些区段所包含的玉米基因,并找到它们对应的拟南芥同源基因,通过查阅拟南芥相关基因功能研究的文献,进一步鉴定控制玉米果皮纤维素含量的候选基因。【结果】两亲本和2个混池SLAF建库测序得到的SLAF符合预期,基于SLAF测序数据,鉴定了73 786个多态性SLAF标签,这些SLAF标签均匀分布在玉米的10条染色体上。在这些多态性标签中得到了523 395 SNP位点信息。通过关联分析,调控果皮纤维素变异的基因被定位到玉米基因组的6个染色区段,都位于玉米的第5染色体上。在这些区段上,一共有47个玉米基因。通过进一步的研究分析,在这些关联的染色体区段最终确定了9个候选基因。【结论】定位到调控玉米果皮纤维素的含量的基因,表明此方法可以用于基因定位。
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3种三唑类杀菌剂对斑马鱼的毒性研究
《浙江农业学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：探究戊唑醇、丙环唑、苯醚甲环唑3种三唑类杀菌剂对斑马鱼的急性毒性、两两等毒性和等浓度配比时对斑马鱼的联合毒性。同时,通过6 d胚胎发育试验,研究3种三唑类杀菌剂对斑马鱼胚胎的发育毒性。研究显示,戊唑醇、丙环唑、苯醚甲环唑3种三唑类杀菌剂对斑马鱼胚胎、仔鱼和成鱼的急性毒性为中毒,苯醚甲环唑和丙环唑在等毒性和等浓度配比下对斑马鱼胚胎和仔鱼阶段为协同作用,其余组合对斑马鱼胚胎和仔鱼阶段为拮抗作用。发育毒性试验结果表示,3种三唑类杀菌剂对早期生命阶段毒性更强,可诱导斑马鱼胚胎、仔鱼出现一系列不良症状,包括孵化率下降、心率异常、生长抑制等。
关键词： 三唑类杀菌剂 斑马鱼 生命阶段 急性毒性 联合毒性 发育毒性
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