科研产出
西藏株小反刍兽疫病毒H蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备
《微生物学通报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：【背景】小反刍兽疫是由小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)引起的一种急性、烈性、接触性传染病,严重威胁我国养羊业的发展。【目的】原核表达PPRVH蛋白,并制备其多克隆抗体。【方法】根据GenBank中PPRV西藏株h基因序列,对其进行密码子大肠杆菌偏爱性优化,采用两步PCR法全化学合成全长h基因。将测序验证正确的h基因克隆至原核表达载体pET-28a、pET-30a、pET-32a,转化E. coli BL21(DE3)并利用IPTG诱导H蛋白表达。以经SDS-PAGE割胶纯化的重组H蛋白免疫新西兰大白兔制备抗PPRV H蛋白多克隆抗体。【结果】重组E. coli [pET-28a(-30a,-32a)-H]表达的重组H蛋白相对分子质量分别约为70、68和86 kD;诱导7 h时PRRV H蛋白表达量最高,而且主要以包涵体形式表达;重组E.coli(pET-30a-H)表达的H蛋白经SDS-PAGE割胶纯化后免疫新西兰大白兔制备的多抗血清能与表达的重组H蛋白发生特异性反应;ELISA法检测抗体效价在1:6400-1:25600之间。【结论】原核表达了PPRVH蛋白,并制备了高效价的抗H蛋白多克隆抗体,为进一步研究PPRV H蛋白的功能及H蛋白的线性B细胞表位作图奠定了基础。
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大花六道木叶片直接诱导不定芽再生研究
《上海农业学报 》 2018 CSCD
摘要：以大花六道木幼嫩叶片为外植体,研究不同植物生长调节剂对不定芽诱导的影响,并采用正交试验设计的方法,研究基本培养基、生长素和蔗糖浓度对组培苗生根的影响。结果表明:诱导大花六道木不定芽发生的最适培养基为改良MS,同时添加0. 4 mg/L 6-BA、30 g/L蔗糖和2. 8 g/L结冷胶,在黑暗条件培养1个月后,不定芽直接从叶片伤口处发生,诱导率在35%左右。生根培养以WPM或MS为基本培养基,同时添加0. 5 mg/L IBA、1. 0 mg/L NAA、20 g/L蔗糖和7 g/L琼脂粉,生根率在90%左右。本研究建立了一种大花六道木不定芽离体再生的方法,可用于大花六道木的快速规模化繁殖及遗传改良。
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构建高效糖配体再生重组菌生物催化合成莱鲍迪苷D
《食品科学 》 2018 EI 北大核心 CSCD
摘要：利用拟南芥(Arabidopsis thaliana)蔗糖合酶AtSUS3构建活化糖配体尿苷二磷酸葡萄糖(uridine diphosphate glucose,UDPG)再生体系,与高效催化莱鲍迪苷D(rebaudioside D,RD)合成的糖基转移酶协同偶联完成RD的高效生物催化。从拟南芥cDNA克隆获得AtSUS3基因,将其装配至pET28a获得表达质粒pLW105,随后pLW105与携带糖基转移酶EUGT11基因的质粒共转化大肠杆菌BL21(DE3)构建双酶共表达工程菌。在不添加UDPG或者尿核苷二磷酸(uridine diphosphate,UDP)的条件下,以上述双酶共表达工程菌全细胞催化莱鲍迪苷A(RA)获得的底物摩尔转化率大于80%,RD产量达到930 mg/L。随后构建双酶基因串连质粒pLW108及双酶共表达大肠杆菌BL21(DE3)工程菌。用串连质粒构建的工程菌催化效果与双质粒共转化相同。采用共表达双酶工程菌的发酵破碎粗酶进行催化,结果显示以粗酶催化可简化催化体系,并可将细胞催化体系所需高质量浓度蔗糖用量降至质量浓度5 g/100 mL,同时在不添加外源UDPG的条件下实现RD的高效生物催化,RA底物摩尔转化率达到93%,RD产量约为1 051 mg/L。
关键词： 甜菊糖苷 莱鲍迪苷D 尿苷二磷酸葡萄糖 蔗糖合酶 UDP-糖基转移酶 生物催化
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观赏植物品种DUS测试指南的研制
《上海农业学报 》 2018 CSCD
摘要：植物品种DUS测试指南是植物新品种特异性、一致性和稳定性测试的技术标准。通过总结UPOV及我国观赏植物DUS测试指南现状,分别介绍了承担UPOV和我国植物品种DUS测试指南的一般流程,并指出我国已有测试指南中的不足,提出我国应力争承担更多UPOV测试指南研制任务。
关键词： DUS 测试指南 研制 国际植物新品种保护联盟 中国
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电击法转化金针菇菌丝碎片表达报告基因eGFP及GUS的研究
《食用菌学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：以不完全酶解的金针菇(Flammulina velutipes)菌丝碎片作为转化受体,通过电击转化法将载体pYN6981导入金针菇单核体Dan3基因组中。结果显示:在复筛培养基上生长良好的转化子,其基因组中可扩增出潮霉素基因片段,通过激光共聚焦显微镜可观察到绿色荧光,GUS组织染色显示为蓝色,说明目的载体已经成功插入金针菇基因组中并获得表达。转化效率达16个转化子每10~6个菌丝碎片。有丝分裂稳定性分析显示80%的转化子可以稳定遗传。
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65%氨氟乐灵WG对交播黑麦草生长的影响研究
《上海农业学报 》 2018 CSCD
摘要：采用大田试验方法,测定了65%氨氟乐灵WG使用后黑麦草(Lolium perenne)的相对出苗率、株高、地上部鲜重等指标,研究65%氨氟乐灵WG对交播黑麦草生长的影响。主要结果如下:(1) 65%氨氟乐灵WG[585—1 462. 5 g (a. i.)/hm2]于黑麦草交播前30 d施用,会使黑麦草出苗数降低、植株矮化、地上部鲜重减轻,且剂量越高,影响越大;(2)黑麦草交播前45 d施用65%氨氟乐灵WG[585 g (a. i.)/hm2],黑麦草的出苗数、株高、地上部鲜重等指标与对照相比没有显著差异,这种使用方案对黑麦草安全,处于6级安全等级(1至9级,安全性由低到高,6级为可接受最低级别)。但是中[877. 5 g (a. i.)/hm2]、高[1170 g (a. i.)/hm2]和倍量[1 462. 5 g (a. i.)/hm2]的65%氨氟乐灵WG处理对黑麦草生长影响较大,综合目测等级均小于6级;(3) 65%氨氟乐灵WG[585—1 462. 5 g (a. i.)/hm2]于黑麦草交播前60 d及以上施用,对黑麦草生长无不良影响,相对出苗率、株高、地上部鲜重等指标与空白对照相比没有显著差异,综合目测等级为9级。建议在交播前60 d及以上施用氨氟乐灵,交播前45 d要谨慎施用氨氟乐灵,以不超过585 g (a. i.)/hm2为宜;间隔交播时间少于30 d时要避免施用氨氟乐灵。
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不同采收期对沪五彩花糯1号品质的影响
《玉米科学 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：以沪五彩花糯1号为试材,设6个采收期,研究采收期对子粒品质和糊化特性的影响。结果表明,采收期为授粉后20 d时,沪五彩花糯1号感官和蒸煮品质综合评分达最高,为85.6分。蛋白质和可溶性糖含量随采收期推迟而降低,而淀粉则相反。不同采收期下的峰值粘度、谷值黏度、终值黏度、崩解值和回复值变异系数要大于峰值时间和糊化温度的变异系数,说明除峰值时间和糊化温度之外,峰值黏度、谷值黏度、终值黏度、崩解值和回复值受采收期影响较大。与淀粉和可溶性糖相比,子粒中的蛋白质对糊化特性的影响较大。
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大鳞副泥鳅摄食节律及日摄食量研究
《南方水产科学 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：为建立大鳞副泥鳅(Paramisgurnus dabryanus)的科学投喂策略,在实验室内开展了大鳞副泥鳅的养殖模拟实验,通过72 h的观察,探讨了不同体质量和不同性别大鳞副泥鳅的昼夜摄食节律及日摄食量。结果表明,大鳞副泥鳅属于典型的夜间摄食类型,一天中有2个极明显的摄食高峰,集中在04:00—05:00和20:00—21:00。大鳞副泥鳅的昼夜摄食节律与个体大小和性别无显著相关性。小规格雌、雄群体均具有最大的日摄食量,且雌性群体的日摄食量随着个体大小的增加显著降低。15℃条件下,大鳞副泥鳅群体的日摄食量占群体总体质量的2.2%~4.8%,个体的日摄食量约占个体体质量的3.0%。建议大鳞副泥鳅的投饲频率为一天2次,以体质量的3%~5%进行饲料投喂,最佳投饵驯化时间集中在6:00—7:00和18:00—19:00。
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糯玉米品种‘沪玉糯3号’种子真实性与纯度鉴定的SSR核心引物筛选
《上海农业学报 》 2018 CSCD
摘要：利用40对玉米SSR核心引物对2个供试品种进行DNA指纹鉴定,确定‘沪玉糯3号’的真实性。通过在‘沪玉糯3号’及其双亲间扩增,发现SSR标记umc2007y4、bnlg1940k7、bnlg2305k4、bnlg1702k1、umc1125y3、phi080k15能在样品与‘沪玉糯3号’间扩增出清晰稳定的多态条带,因此,认为这6对SSR引物可用于‘沪玉糯3号’品种真实性的快速鉴定。此外,筛选出6对共显性SSR核心引物(bnlg1940k7、bnlg2305k4、umc1536k9、bnlg249k2、bnlg2235y5和phi233376y1),可用于‘沪玉糯3号’的纯度鉴定。SSR标记bnlg1940k7和bnlg2305k4作为首选,可同时对‘沪玉糯3号’种子进行真实性和纯度鉴定。为加强‘沪玉糯3号’的产权保护及种子质量监测提供了理论依据和技术支持。
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