科研产出
春兰(Cymbidium goeringii)CgDEF4基因的克隆和表达分析
《分子植物育种 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：采用反转录PCR和c DNA末端快速扩增技术从春兰(Cymbidium goeringii)中分离到1个B类MADS-box基因CgDEF4基因。CgDEF4的基因登录号为KU058678,属于PaleoAP3组的PeMADS4类基因,含有1个678 bp的开放阅读框(open reading frame,ORF),分子量24.05 k D,编码225个氨基酸。实时荧光定量表达分析表明,CgDEF4在春兰正常花和蝶花各花器官中差异表达。CgDEF4在正常花的唇瓣中强烈表达,在侧瓣的表达量较低;而在蝶花中在唇瓣和唇瓣化的侧瓣中都强烈表达,说明CgDEF4基因可能在春兰蝶花侧瓣唇瓣化的过程中具有重要作用。
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亚致死浓度氰氟虫腙对小菜蛾三种解毒酶及P450 mRNA表达量的影响
《应用昆虫学报 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：【目的】为探讨亚致死浓度氰氟虫腙对小菜蛾Plutella xylostella(L.)3种解毒酶和细胞色素P450基因表达量的影响。【方法】采用叶片浸渍法,测定用氰氟虫腙LC10和LC25处理72 h后小菜蛾羧酸酯酶、谷胱甘肽S-转移酶和多功能氧化酶3种解毒酶的活性;应用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)方法测定了其在24、48和72 h时对P450基因(Px CYP4、Px CYP6和Px CYP9家族)表达的影响。【结果】结果表明,氰氟虫腙LC10和LC25处理对羧酸酯酶活性影响不显著;对谷胱甘肽S-转移酶活性存在显著抑制作用(P<0.05);LC25处理后多功能氧化酶活性显著增加(P<0.05),为对照的1.39倍。同时,LC25氰氟虫腙处理组小菜蛾P450基因Px CYP4M19、Px CYP6BF1V2、Px CYP6CN1和Px CYP6CV2 m RNA的相对表达量分别为对照组的2.33~8.5倍、1.32~3.48倍、1.18~2.53倍、2.02~7.22倍。【结论】结果显示,氰氟虫腙可能通过诱导这4种P450基因m RNA的上调表达而增强了小菜蛾多功能氧化酶酶活性。
关键词： 小菜蛾 氰氟虫腙 解毒酶 细胞色素P450基因
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OsDCL1基因沉默突变体诱导稻瘟病抗性的转录组分析
《植物病理学报 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：稻瘟病是严重危害水稻生长的真菌病害,每年给水稻生产带来重大经济损失。与野生型日本晴NPB相比,OsDCL1基因沉默突变体增强了水稻对稻瘟菌的广谱抗病性。为了解水稻OsDCL1-RNAi突变体的抗病机制,我们分析和比较了它和野生型日本晴NPB在稻瘟菌侵染前后转录组水平的变化。响应稻瘟菌侵染的7 129个差异表达基因(DEGs)中,NPB和OsDCL1-RNAi突变体分别有5 382和5 180个基因表达发生了变化,参与生物胁迫反应、信号通路、蛋白代谢和RNA调控4个通路的基因明显被富集。以野生型未受稻瘟菌侵染的基因表达为对照,在OsDCL1-RNAi突变体中共发现1 318个DEGs,且超过70%是上调的,其中很多基因参与了生物胁迫反应(26.9%)和信号通路(11%),上调表达基因中与生物胁迫反应相关的主要为PR基因和细胞壁相关基因。另外,还发现10个茉莉酸相关基因和11个水杨酸相关基因分别在OsDCL1-RNAi突变体中显著下调和上调表达。在OsDCL1-RNAi突变体中还发现WRKY和MYB等一些转录因子家族以及部分受体类激酶被诱导表达。用qRT-PCR方法验证部分差异表达的基因,其结果与DEGs基本一致。OsDCL1-RNAi突变体中转录组变化的分析,为深入了解该突变体抗瘟性增强的机制奠定了基础。
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野生与人工栽培桑黄子实体中的粗多糖和粗酚含量及药用活性比较
《蚕业科学 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：为了明确人工栽培桑黄(Phellinus spp.)的药用价值,以野生桑黄和人工栽培桑黄的子实体为材料,检测分析其水溶性活性物质粗多糖和粗酚的含量,以及其抗肿瘤、抗感染活性。采用乙醇浸提及甲醇萃取的方法提取栽培桑黄子实体粗酚的得率显著高于野生桑黄子实体,经超高效液相色谱-飞行时间质谱(UPLC-MS)技术分析2种桑黄子实体中的桑黄酚主要由丁香酸、原儿茶酸、原儿茶醛、咖啡酸4种单体酚组成。采用MTT法检测2种桑黄子实体来源粗多糖、粗酚以及4种单体酚物质对体外培养HCT116、HT-29、HepG 2肿瘤细胞的增殖均有较强抑制作用,2种来源的活性成分样品在相同剂量下的抑制作用差异不显著,其中原儿茶醛抑制肿瘤细胞增殖的活性较强。用流式细胞术体外检测桑黄粗酚中的单体酚物质对结肠炎患者外周血CD4+T细胞凋亡具有诱导活性,且咖啡酸、原儿茶酸抑制细胞增殖并诱导其凋亡的活性较强。研究结果表明,人工栽培桑黄子实体有良好的药用价值,其中多糖和原儿茶醛成分是抑制结肠癌、肝癌细胞增殖的主要活性物质,丁香酸、原儿茶酸通过诱导CD4+T细胞凋亡发挥抗感染作用。
关键词： 桑黄子实体 人工栽培 粗多糖 桑黄酚 肿瘤细胞 抑制活性 抗感染
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工业用高油高芥酸转基因油菜株系的获得
《分子植物育种 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：芥酸在工业上具有诸多用途,目前主要从菜籽油中制取,提高芥酸含量和含油量是工业专用高芥酸油菜育种的两个重要目标。本研究在甘蓝型油菜高油品种CY2中籽粒特异正向表达拟南芥At FAE1基因,增强脂肪酸延伸酶的活性,获得了两个高油高芥酸转基因株系,其芥酸含量由CY2的43%提高到了60%左右,含油量超过了50%,稍高于CY2。这一研究表明,极长链脂肪酸生物合成关键酶基因FAE1表达的上调不仅能显著促进芥酸合成,而且对提高含油量也有一定作用。田间观察和考种结果显示,两个株系的主要农艺性状与CY2相仿,未发生显著变化。该转基因油菜的产业化开发将有助于降低企业的原材料和芥酸产品的生产成本。
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基于近红外光谱技术的柑橘罐头品质测定方法的研究
《食品工业科技 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：为了快速检测柑橘罐头主要营养指标的含量,实验对柑橘罐头进行光谱采集,通过偏最小二乘(PLS)线性拟合建立关于柑橘罐头总糖、总酸、黄酮和维生素C的近红外定量分析模型。通过分析比较不同的光谱预处理方法对近红外光谱模型的影响,其中经归一化预处理后建立的总糖和黄酮模型最优,相关系数分别为0.9156和0.9147,交互验证均方根误差(RMSECV)为0.6305%和2.7028 mg/100 g;平滑预处理后总酸的相关系数为0.8921,RMSECV为0.0539%;以原始光谱数据建立的维生素C模型的相关系数为0.9129,RMSECV为1.4323 mg/100 g;预测集总糖、总酸、黄酮和维生素C的相关系数分别为0.8519、0.8106、0.8334和0.8425,预测均方根误差(RMSEP)为0.8969%、0.0638%、3.6055 mg/100 g和1.9732 mg/100 g。实验结果表明:应用近红外光谱技术测定柑橘罐头中总糖、总酸、黄酮和维生素C的含量是可行的。
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氮肥促进Bt水稻和非Bt水稻上溴氰菊酯诱导的褐飞虱再猖獗能力
《昆虫学报 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：【目的】褐飞虱Nilaparvata lugnes是Bt水稻上重要的非靶标害虫之一,多种药剂会引起褐飞虱的再猖獗。本研究旨在探究氮肥使用下Bt水稻上褐飞虱对农药的生态适应性和再猖獗能力。【方法】取Bt水稻T1C-19(含cry1C*基因)和T2A-1(含cry2A*基因)稻苗分别施以0,100和250kg N/hm~2的氮肥,用不同浓度溴氰菊酯(0,1,3和6 mg/L)喷雾处理其上饲养的褐飞虱,分析氮肥处理的Bt水稻上褐飞虱对农药的生态适应性指标(若虫发育历期、若虫存活率、雌成虫体重、单雌产卵量和卵孵化率)。【结果】高浓度溴氰菊酯(6 mg/L)处理下褐飞虱的若虫存活率显著低于未处理组,而单雌产卵量则高于未处理组。方差分析表明,氮肥与溴氰菊酯相互作用可以显著影响褐飞虱的若虫存活率、雌成虫体重、单雌产卵量和卵孵化率。在0 kg N/hm~2处理下,溴氰菊酯处理对褐飞虱的产卵量无显著影响。在100和250 kg N/hm~2处理稻株上褐飞虱产卵量随着溴氰菊酯浓度的升高而增加。随着氮肥施用量的增加,褐飞虱若虫历期缩短,雌成虫体重增加,产卵量增加,褐飞虱若虫孵化率和存活率增高。相同氮肥施用量、溴氰菊酯同一浓度处理条件下,Bt水稻和常规水稻相比对褐飞虱的若虫发育历期、产卵量、卵孵化率和存活率均无显著影响。【结论】本研究结果表明,氮肥可以促进Bt水稻和非Bt水稻上溴氰菊酯诱导的褐飞虱再猖獗。
关键词： 褐飞虱 Bt水稻 氮肥 溴氰菊酯 生态适应性 再猖獗
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鸭呼肠孤病毒基因Ⅰ型与Ⅱ型鉴别诊断RT-PCR方法的建立与应用
《农业生物技术学报 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：临床发病鸭(Anas platyrhynchos domestica)群中存在两种基因型鸭呼肠孤病毒(Duck reovirus,DRV)的感染。为建立一种能鉴别诊断DRVⅠ型(classical DRV,C-DRV)与Ⅱ型(novel DRV,N-DRV)的一步法RT-PCR检测方法,本研究通过对Gen Bank已公布的现有C-DRV和N-DRV S1和S4基因片段序列进行比对分析,设计合成两对特异性引物,并对引物浓度、退火温度和循环次数等扩增条件进行优化,建立一种能鉴别诊断C-DRV和N-DRV的一步法RT-PCR检测方法。结果表明,一步法RT-PCR最佳的反应体系为:Prime Script 1 Step Enzyme Mix 1μL,2×1 Step Buffer 12.5μL,RNA模板1.5μL,上下游引物(20μmol/L)各1μL,RNase Free d H_2O补足25μL;最佳反应条件:50℃反转录30 min;94℃预变性2 min;94℃变性30 s,55℃退火30 s,72℃延伸30 s,共30个循环。该方法可从C-DRV和N-DRV基因组中扩增出大小分别为249和505 bp单一特异性片段,从两种病毒基因组混合物中可同时扩增出两条特异性片段,而对鸭源常见病毒及正常细胞基因组在同等条件下检测均为阴性;该方法具有较高的敏感性,其最低病毒检出量分别为0.47和0.62个半数组织培养感染剂量(50%tissue culture infective dose,TCID50);对不同代次、不同时间提取的病毒RNA样品重复检验3次,结果均一致。对浙江省2011~2015年采集的239份疑似临床病料进行检测,C-DRV与N-DRV的阳性率分别为2.5%(6/239)和31.4%(75/239);通过对阳性病料P10和P18扩增序列的测序也证实检测结果的准确性。本研究建立的双重一步法RT-PCR可以有效区分两种基因型DRV,且临床样品检测表明N-DRV是浙江省流行的优势基因型。本研究为鉴别诊断CDRV与N-DRV提供了一个快速、灵敏性高及低成本的实验室诊断方法,该方法的建立可为DRV的分子流行病毒学调查提供有效的技术支持。
关键词： 鸭呼肠孤病毒(DRV) 多重一步法RT-PCR 基因型
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柑橘果实浮皮发生机理的研究进展
《园艺学报 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：柑橘果实浮皮是其成熟后期或采后贮藏过程中发生率较高的一种生理性病害,目前对其发生机理的研究还没有明确的结论,生产上难以对其进行有效的防治。概述了柑橘果实浮皮的症状、主要影响因素及生产上现有的防护措施;针对浮皮发生机理研究进展,重点从细胞形态学变化、细胞生理生化效应及分子调控等方面阐述了目前的研究;探讨了今后的研究重点及未来的应用前景。
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十字花科植物嫁接mRNA长距离运输基因IAA14的鉴定及比较
《分子植物育种 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：Aux/IAA家族基因是一类典型的生长素诱导表达基因,是植物生长素信号转导通路的重要调控基因。IAA14基因是Aux/IAA基因家族的成员,IAA14基因mRNA被认为在嫁接中发生了长距离运输。本研究从十字花科11个物种中鉴定了14个IAA14基因,每种植物中至少有1个IAA14基因。比较分析了IAA7、IAA14和IAA17的蛋白特性,显示IAA14蛋白特性不同于Aux/IAA家族的其他蛋白,氨基酸序列比对显示所有的IAA14蛋白均包含4个保守结构域。在基因组织结构分析中,发现所有的IAA14基因分享了保守的基因结构:均由5个外显子和4个内含子构成,且内含子定位在保守位置。分析了IAA14基因起始密码子上游1 500 bp序列中的生长素响应相关元件。基于现有的白菜RNA-seq数据,发现白菜IAA14基因在花器官中有大量表达,在胚胎发育中特异表达在心形胚和早期子叶胚中。通过本研究,我们对十字花科11个物种的IAA14基因的基因定位、蛋白特性、基因组织结构、进化关系、启动子基序以及基因表达情况有了基本了解,对于未来进一步深入研究IAA14基因奠定基础。
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