科研产出
基于绵羊肺炎支原体Enolase蛋白建立间接ELISA抗体检测方法
《中国兽医科学 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：旨在建立一种检测绵羊肺炎支原体（Mo）血清抗体的间接ELISA方法,笔者构建了Mo Enolase基因原核表达载体,诱导表达后,纯化的重组蛋白用Western-blot分析其反应原性。以重组蛋白为包被抗原,建立了Mo间接ELISA抗体检测方法。结果显示,重组蛋白得到可溶性表达,Western-blot证实具有良好的反应原性。间接ELISA反应条件优化结果显示,包被抗原浓度为2 mg/L,37℃2 h,封闭条件为含10 g/L BSA的PBS,4℃过夜,待检血清稀释度为1∶50,37℃1 h,酶标二抗最佳稀释度为1∶4 000,37℃1 h,底物最佳显色条件为37℃避光10 min。分别利用38份阴性血清、38份阳性血清确定临界值为S/P=0.365。用该方法与间接血凝法对180份血清进行检测,两者符合率为81.11%。结果表明,本研究建立的间接ELISA方法敏感、特异,具有良好的临床应用前景。
关键词： 绵羊肺炎支原体 Enolase蛋白 原核表达 间接ELISA
全文链接
请求原文
滴灌施肥方式下不同品种梨树减肥提质增效研究
《北方园艺 》 2021 北大核心
摘要：以早熟品种‘中梨1号’和中熟品种‘圆黄’为试材,在2017—2018年和2018—2019年梨的2个生育周期中,以习惯施肥为对照（T0）,设置单倍滴灌施肥量（D1）和单倍滴灌加倍（D2）2个施肥水平,研究不同施肥方式和用量对果实养分、产量和品质等的影响,以期为水肥一体化技术在梨生产中的推广提供参考依据。结果表明:习惯施肥和单倍滴灌处理下不同施肥处理‘中梨1号’和‘圆黄’果实矿质养分含量随生育期变化趋势一致,均在幼果期处于较高值,处理间无显著差异。‘中梨1号’单倍滴灌处理在2个生育周期产量均较高,其商品果株产量平均值与滴灌加倍处理无差异,滴灌加倍处理下果实可溶性固形物含量提高。‘圆黄’单倍滴灌处理株产量与习惯施肥间和滴灌加倍处理相比无显著差异,但可溶性固形物含量有低于习惯施肥和滴灌加倍处理的趋势,表明水肥一体化技术中较少的水溶肥用量可以保证产量不降低,但对维持较高的果实品质需要较多的肥料供应。滴灌施肥方式所施用的肥料用量和肥料投入成本均显著低于施肥枪施肥方式。因此,通过水肥一体化模式的应用能够实现节水减肥、提高果实产量和改善品质,生产中可根据果园实际情况,采用适宜的水肥一体化技术模式,实现树高产、高效和优质的目标。
全文链接
请求原文
利用PEI-SWNT介导的瞬时转化检测青花菜基因编辑效率
《江苏农业科学 》 2021 北大核心
摘要：CRISPR/Cas9基因编辑系统是作物分子设计育种的重要手段,sgRNA设计对于提高基因编辑效率具有重要作用。为了提高sgRNA设计的准确度,构建了聚乙烯亚胺修饰的单壁碳纳米管（PEI-SWNT）介导的瞬时转化体系,并用于检测青花菜CRISPR/Cas9基因编辑效率。结果表明,CRISPR/Cas9编辑体系可以诱导青花菜特定基因位点发生突变,编辑效率为8.3%。研究结果为利用CRISPR/Cas9基因编辑系统创制青花菜新种质提供了基础。
全文链接
请求原文
自然青贮多花黑麦草优良乳酸菌的筛选及对多花黑麦草青贮品质的影响
《草业学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：为了筛选出适用于多花黑麦草青贮发酵的优良乳酸菌菌株,从自然青贮多花黑麦草中分离乳酸菌,筛选并鉴定生长快速且产酸效率高的菌株,分析其生理生化特征以及对多花黑麦草青贮品质的影响。利用传统的平板培养法,从自然青贮多花黑麦草中分离获得180株乳酸菌。其中,5株乳酸菌生长快速且产酸能力强,均能够在NaCl浓度为3.0%,温度为15～35℃,pH为3.5～7.0的MRS液体培养基中良好生长。经16S rRNA基因序列比对鉴定,菌株PRLAB9、PRLAB34、PRLAB67和PRLAB86为植物乳杆菌,PRLAB76为戊糖片球菌。对菌株进行生长曲线和产酸性能测定,该5株乳酸菌均能够在12 h内快速繁殖和产酸,菌株PRLAB76在24 h内生长速率和产酸效率均优于其他4株乳酸菌。进一步分析添加该5株乳酸菌对多花黑麦草青贮发酵品质、营养成分、微生物数量的影响,发现该5株乳酸菌均能提高多花黑麦草的青贮品质,包括显著降低青贮料pH和氨态氮含量,减少干物质损失,提高可溶性碳水化合物含量。其中,菌株PRLAB76处理组多花黑麦草青贮品质最优,干物质含量、粗蛋白含量、乳酸含量、乳酸菌数量显著高于其他4株乳酸菌处理组,且pH值、酵母菌数量显著低于其他4株乳酸菌处理组。综上,戊糖片球菌PRLAB76可作为多花黑麦草青贮的备选菌株。
关键词： 多花黑麦草 青贮 植物乳杆菌 戊糖片球菌 产酸特性 青贮品质
全文链接
请求原文
未来预期、农户分化与宅基地退出抉择
《长江流域资源与环境 》 2021 北大核心 CSCD CSSCI
摘要：建立农村宅基地有偿退出机制是缓解城乡用地供需矛盾、促进乡村振兴的重要方面。基于宅基地退出试点地区农户调研数据,通过中介效应和调节效应检验,考察农户未来预期对宅基地退出行为的作用机理。研究表明:积极的预期使农户具有更高的宅基地退出意愿,并对农户退出行为具有显著的正向作用;农户分化在"未来预期—宅基地退出意愿—退出行为"影响路径中具有调节效应,非农收入占比越高的农户,宅基地退出意愿对退出行为的正向影响越强,农户将积极的预期转化为退出行为的概率越大。故此,可从稳定农户预期和创造农户宅基地退出的能力及条件入手,稳定农户预期,关注农户就业,鼓励和引导有积极预期、有条件的农户参与宅基地退出。
关键词： 未来预期 农户行为 宅基地退出 中介效应 调节效应
全文链接
请求原文
一步法快速构建长片段RNAi发夹的载体
《江苏农业学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：利用RNA干扰（RNA interference, RNAi）技术可以进行基因功能研究以及作物遗传改良,但常规构建RNAi载体方法费时费力。本研究报道了一种基于USER酶一步法快速构建RNAi发夹结构的载体2301/RNAi/OS及其应用方法,操作简便,省时省力。与已报道的利用酶切连接、Gateway兼容的同源重组或PCR直接连接等构建RNAi载体相比,该载体不需要酶切片段,片段扩增完成后即可与制备好的线性化载体进行反应,缩短操作流程和时间,提高成功率;该载体对插入片段的酶切位点和长度没有要求,理论上任何位置和长度的片段均可进入2301/RNAi/OS载体中,尤其是长片段RNAi的构建。本试验以本氏烟（Nicotiana benthamiana）PDS（Phytoene desaturase）基因为例,利用农杆菌介导的瞬时表达体系验证了该RNAi能够在植物体内有效地实现基因沉默。该载体以新霉素磷酸转移酶基因（NPTII）作为筛选标记基因,可以利用卡那霉素（Kanamycin）和G418（Geneticin）等抗生素筛选转基因阳性植株,适合单子叶和双子叶植物的遗传转化。
关键词： RNA干扰（RNAi） USER酶 一步法 载体构建 基因沉默
全文链接
请求原文
白背毛木耳真菌瘿蚊防控技术
《北方园艺 》 2021 北大核心
摘要：以3种不同浓度的除虫脲为试材,采用菌丝生长抑制率法、菌丝干质量法,研究白背毛木耳菌丝对除虫脲的敏感性,同时以拌料方式施药于白背毛木耳栽培料,研究除虫脲防治白背毛木耳真菌瘿蚊的效果,并检测试验处理的农残情况,以期为除虫脲防治毛木耳真菌瘿蚊技术提供参考依据。结果表明:供试的除虫脲浓度对白背毛木耳菌丝生长速度抑制作用小,均低于10%。而2 500倍除虫脲T1处理对白背毛木耳菌丝体生长量有一定的抑制作用。供试的除虫脲浓度对产量无明显不利影响,由于污染菌包数量减少,单包平均产量均提高。2 500倍除虫脲T1处理,菌株1261、B2872平均单袋产量分别比对照提高21.81%、31.91%,差异均达极显著水平。2 500倍除虫脲T1处理,菌株1261的真菌瘿蚊发生率仅3.06%,比对照（20.56%）降低85.12%。菌株B2872发生率为9.72%,比对照（20.56%）降低64.65%。各试验处理子实体均未有农残危害。2020—2021年示范2 500倍除虫脲拌入发酵料中防治毛木耳真菌瘿蚊,示范2万袋,虫害降低83.3%,示范效果好。
全文链接
请求原文
不同颜色LED光对苏系长毛兔毛品质及皮肤毛囊发育的影响
《畜牧兽医学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：本试验拟研究LED光照对苏系长毛兔毛品质及皮肤毛囊发育的影响。试验选择3月龄健康、体重相近（（2.245±0.296） kg）的50只苏系长毛兔,随机分为5个处理组,即LED红光组、LED绿光组、LED蓝光组、黑暗组和对照组（自然光组）,每组5个重复,每个重复2只。采用16L∶8D光照制度,光照强度50 lx,试验期73 d。试验末采集毛样测定毛品质,采集血液测定激素指标,采集皮肤组织观察毛囊发育。结果表明:1)LED光照对长毛兔终末体重、平均日增重（ADG）、采食量无显著的影响（P>0.05）,但红光组提高了长毛兔的毛产量,高于对照、绿光、黑暗组（P=0.050）。2)红光组显著提高肩胛部的毛纤维长度,比对照组和绿光组长35.36%（P<0.05）。红光组显著降低了粗毛率,显著低于绿光组（P<0.05）。对照组粗毛细度显著小于绿光组和黑暗组（P<0.05）,各组间细毛细度无显著性差异（P>0.05）,但红光组最细。回潮率各组之间均无显著差异（P>0.05）。3)与对照组相比,红光组能显著提高血清褪黑激素（MT）、三碘甲状原氨酸（T3）的浓度（P<0.05）,黑暗组显著降低催乳素（PRL）的浓度（P<0.05）。4)组织切片观察发现,红光毛囊群个数最多（16.5）,且多为次级毛囊,初级毛囊极少,毛囊分布均匀;对照、蓝光、黑暗组毛囊群结构处于正常水平;绿光组毛囊群个数最少（10.0）,毛囊分布不均。LED红光可以促进机体MT的分泌,提高苏系长毛兔皮肤组织毛囊群数和次级毛囊数,进而改善毛纤维品质。
全文链接
请求原文
基于特有基因VY93_RS02885为靶标的滑液支原体qPCR检测方法建立
《江苏农业科学 》 2021 北大核心
摘要：利用CD-HIT-EST快速聚类分析和BLASTN同源性比对共鉴定出17个滑液支原体(Mycoplasma synoviae)特有基因,并从中选取保守基因VY93_RS02885作为分子诊断的靶标基因.根据该基因核苷酸序列设计了1对引物,建立了滑液支原体的SYBR green qPCR检测方法.结果表明,该方法对不同浓度的模板和对应的CT值具有较好的线性关系,R2值为0.9988;该方法的特异性较好,BLASTN比对,检测引物对仅能匹配滑液支原体的特有基因VY93_RS02885,结果显示,该方法能特异性地检测滑液支原体,与其他常见的引起禽关节炎的细菌/支原体性病原无交叉反应;该方法的敏感性较好,100%阳性检测的靶标基因最小拷贝数为10;该方法的重复性较好,对3个不同浓度的模板进行组间和组内重复检测,变异系数≤1.1727%.此外,该方法对临床样品的检出率与传统检测方法相符.因此,本研究建立的针对滑液支原体特有基因的SYBR green qPCR检测方法具有用时短、特异性高、准确性高、敏感性高、可重复性强的优点,可为滑液支原体的快速诊断和流行病学调查提供技术手段.
关键词： 滑液支原体;特有基因;qPCR;检测方法
全文链接
请求原文
水肥一体化下氮肥不同追施量对设施蔬菜生长的影响
《江苏农业科学 》 2021 北大核心
摘要：针对设施蔬菜生产中因追肥方式不合理引起的养分利用率低的问题,在南京市大白菜塑料大棚中通过田间小区试验研究了滴灌条件下氮肥不同追施量对大白菜生长及土壤肥力的影响。试验处理包括:空白对照（不施用任何肥料）、常规施肥、滴灌追肥、追肥减氮20%、追肥减氮30%。结果表明,与常规施肥处理相比,3个滴灌追肥处理的大白菜产量均增加,且追肥减氮30%处理的大白菜产量显著高于常规施肥处理。3个滴灌追肥处理的大白菜中有机酸含量均显著降低。各施肥处理中追肥减氮30%处理的大白菜中可溶性糖含量最高,且显著高于常规施肥处理。追肥减氮20%处理的大白菜中氨基酸含量最高,且显著高于其他处理。此外,追肥减氮30%处理的大白菜中氨基酸含量也显著高于常规施肥处理。与常规施肥处理相比,3个滴灌追肥处理的大白菜氮含量均显著降低。采用滴灌追肥的3个处理土壤电导率均显著低于常规施肥处理。在本试验条件下,大棚大白菜栽培中在滴灌条件下追肥减氮20%30%在增产的同时还可改善大白菜品质,且可有效避免土壤发生次生盐渍化。
全文链接
请求原文
