科研产出
新型抗菌蛋白内溶素在大肠杆菌中的融合表达与纯化
《浙江农业学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：抗菌蛋白E17G是一种通过基因改造获得的高效杀菌蛋白。为高效表达抗菌蛋白E17G并减少E17G的抗菌活性对大肠杆菌宿主菌的致死作用,将E17G基因克隆到原核表达载体pGEX-6P-1中,构建的重组原核表达载体pGEX-6P-1-E17G在低温下经IPTG诱导,E17G蛋白在大肠杆菌BL21中以GST-E17G融合蛋白的形式表达,采用GST亲和层析纯化和收集GST-E17G融合蛋白。SDS-PAGE和Western blotting检测结果显示,GST-E17G能在大肠杆菌中正确表达,为进一步研究E17G抗菌蛋白的生物学活性奠定了基础。
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一氧化氮参与疣粒野生稻对水稻白叶枯病的抗性
《浙江农业学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：疣粒野生稻高抗水稻白叶枯病,但是其具体的抗性机制目前仍不清楚。一氧化氮(nitric oxide,NO)是一种重要的信号分子,在植物的抗病反应中起到了重要的作用,然而对于NO是否参与疣粒野生稻对水稻白叶枯病的抗性目前仍缺乏研究。以抗病的疣粒野生稻和感病的水稻品种日本晴为材料,研究了接种白叶枯病菌对叶片病斑、NO含量、NO亚细胞定位和木质部超微结构的影响。结果表明,病菌侵染导致了日本晴叶片呈现枯黄色的干枯斑,疣粒野生稻叶片呈现褐色的凋亡斑,而且野生稻的病斑长度要明显短于日本晴的病斑长度。接种白叶枯病菌后日本晴叶片内NO含量未见明显的变化,而野生稻叶片内NO含量则显著升高,并且大部分的NO定位于导管细胞壁内。进一步通过电镜观察,发现病菌侵染诱导了野生稻叶片导管细胞壁厚度的明显增加。基于这些结果,推测NO参与了疣粒野生稻对白叶枯病的抗性,其功能可能包括诱导导管细胞壁增厚,从而抑制病菌的进一步侵染。
关键词： 疣粒野生稻 水稻白叶枯病 一氧化氮 亚细胞定位 细胞壁增厚
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与RBSDV外壳蛋白P10互作植物因子的筛选与验证
《核农学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：目前,我们对水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)编码的外壳蛋白P10在该病毒侵染过程中的作用了解甚少。本研究利用酵母双杂交技术,以P10为诱饵钓取拟南芥cDNA文库,得到与P10互作的真核翻译起始因子eIF5A-2。通过分别构建猎物和诱饵载体共转化酵母,结果表明P10与AteIF5A-2在酵母中互作。利用农杆菌转染烟草表皮细胞瞬时表达体系发现,P10和AteIF5A-2形成融合荧光蛋白后,荧光主要形成囊泡状的结构。通过荧光共定位实验分析发现,P10与AteIF5A-2能够共定位。本研究结果进一步揭示了水稻黑条矮缩病毒的致病机制。
关键词： 水稻黑条矮缩病毒 外壳蛋白 P10 真核翻译起始因子5A
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溴氰虫酰胺及其代谢物在辣椒和土壤中的残留降解研究
《分析化学 》 2014 SCI 北大核心 CSCD
摘要：建立了超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定辣椒和土壤中溴氰虫酰胺及其代谢物(J9Z38)残留量的方法,研究了溴氰虫酰胺和J9Z38在辣椒和土壤上的降解特性。样品经乙腈提取后用C18固相萃取柱净化,采用梯度洗脱程序、BEH C18色谱分离柱、应用UPLC-MS/MS正离子扫描测定溴氰虫酰胺和J9Z38。进行了添加浓度为0.01、0.10和1.00 mg/kg的回收实验,溴氰虫酰胺和J9Z38在辣椒和土壤中的日内平均回收率为88.6%~105.7%,日内相对标准偏差为3.8%~15.1%;日间平均回收率为91.4%~105.3%,日间相对标准偏差为4.9%~12.3%。溴氰虫酰胺和J9Z38在2.0~128.0μg/L浓度范围内相关系数r>0.9992,定量限分别为0.1和0.2μg/kg。应用本方法检测了田间实验样品,结果表明,溴氰虫酰胺在辣椒和土壤中降解半衰期分别为9.2~11.2 d和9.2~20.8 d,J9Z38在辣椒中残留量低于定量限,在土壤中降解半衰期为9.4 d;随着降水量增加,溴氰虫酰胺降解速度加快。
关键词： 溴氰虫酰胺 J9Z38 辣椒 残留 液相色谱-串联质谱
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采前3种杀菌剂喷施对樱桃番茄采后品质的影响及啶菌噁唑残留检测
《食品科学 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：以金珠樱桃番茄为试材,研究采前杀菌剂喷施对采后樱桃番茄发病率、质量损失率和食用品质的影响,并测定樱桃番茄果实中啶菌噁唑残留变化。结果表明:采前喷施杀菌剂显著降低了金珠樱桃番茄采后发病率,提高了樱桃番茄果实中VC和可溶性固形物含量,减缓了VC和可溶性固形物含量贮藏期间的损失;但对质量损失率和可滴定酸含量的影响不显著(P<0.05)。对樱桃番茄采后贮藏保鲜效果最好的杀菌剂为啶菌噁唑,喷施质量浓度为0.4 g/L。采前喷施啶菌噁唑后,樱桃番茄中啶菌噁唑残留在采前和采后均呈下降趋势;且采后樱桃番茄中啶菌噁唑残留下降的速度比采前下降的慢,贮藏温度越低,下降越慢。
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微生态制剂对养殖后期虾池水质及细菌群落的影响
《浙江农业学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：水产养殖可持续发展的要求促进了微生态制剂的研究,为了解微生态制剂MP-1和MP-2的应用效果及其作用机理,选择处于养殖后期虾池开展应用试验,每周从试验池中采样分析水体COD Mn、氨氮、亚硝酸盐、硝酸盐和总氮的变化,并用PCR-DGGE分析了虾池细菌群落结构的变化。结果显示:投加微生态制剂MP-1和MP-2后1周,虾池亚硝酸盐均低于0.01 mg·L-1,2周后虾池氨氮分别稳定在0.26~0.33 mg·L-1和0.35~0.48 mg·L-1,试验过程中水体硝酸盐和COD Mn保持稳定,总氮的去除率达到34.1%以上;虾池的主要细菌类群和细菌群落结构发生显著变化。结果表明:微生态制剂MP-1和MP-2可显著改善养殖后期虾池水质,其净水作用可能是微生态制剂调控虾池土著微生物群落变化后的共同作用结果。
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叶面营养对杨梅果实品质及采后贮藏的影响
《浙江农业学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：以丁岙杨梅为试材,研究叶面肥对杨梅果实品质及采后贮藏的影响。结果表明,喷施叶面肥可显著提高杨梅果实品质,爱农氨基酸处理效果最佳,果实固形物、总糖含量平均比对照提高1.30、1.52个百分点,总酸含量平均比对照降低0.22个百分点,糖酸比、固酸比明显提高,其次为美钙镁和翠康钙宝。喷施叶面肥可显著降低果实失水率、烂果率,其中美钙镁、翠康钙宝处理失水率分别比对照降低5.07和4.07个百分点,烂果率分别比对照减少7.84和7.90个百分点。喷施叶面肥还可延缓杨梅品质变化,降低果实POD活性及变化幅度,其中翠康钙宝处理果实的品质下降幅度和POD活性变化幅度最小。
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IBDV丝素蛋白/壳聚糖DNA微球疫苗的制备及免疫原性分析
《生物工程学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：为了制备传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)DNA微球疫苗,并评价其免疫效果。以丝素蛋白(Silk fibroin,SF)/壳聚糖(Chitosan,CS)为壁材,IBDV的VP2/4/3 DNA疫苗为芯材,通过戊二醛和Na2SO4介导的乳化交联技术,制备出SF/CS复合微球疫苗,然后经肌肉注射14日龄非免疫鸡,2周后加强免疫一次,酶联免疫法(ELISA)定期监测鸡血清的IBDV抗体,以研究微球化疫苗的免疫原性。结果显示:戊二醛介导交联方法影响荷载DNA疫苗的活性,而Na2SO4介导的交联方法操作简单且不影响荷载DNA活性;建立了以壳聚糖浓度0.5%(pH 5.0)、丝素蛋白浓度0.6%,质粒DNA 500μg/mL溶解在2%Na2SO4溶液中的工作条件;SF-CS复合微球DNA疫苗荷载率89.14%,大小1.98μm,对DNaseⅠ的消化有保护作用。免疫后的抗IBDV血清ELISA抗体的检测显示,微球免疫组总体高于质粒疫苗免疫组(P<0.05),而且SF/CS复合微球组免疫反应要略高于单纯CS包被的抗原组。研究表明,丝素蛋白/壳聚糖作为微球佐剂能提高IBDV DNA疫苗的临床免疫效果,有很好的应用前景。
关键词： 微球疫苗 丝素 壳聚糖 IBDV VP2/4/3 免疫原性
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四明香鸡体重和体尺性状指标的主成分分析
《浙江农业学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：以四明香鸡为研究对象,分别测定了公鸡91日龄、母鸡119日龄的体重与体尺性状指标,并进行了体重与体尺性状的主成分分析。结果表明:四明香鸡公鸡平均体斜长、龙骨长、胸宽、胸深、骨盆宽、胫长、胫围和体重分别为18.84,10.57,7.53,9.09,6.06,8.51,4.35 cm和1 591.13 g,母鸡各项指标平均值分别为18.18,10.72,7.30,8.24,6.32,7.20,3.96 cm和1 648.33 g;公鸡体重与体斜长、龙骨长、胸宽、骨盆宽均极显著相关(P<0.01);母鸡体重与体斜长、胫长、胫围均极显著相关(P<0.01),与胸宽、胸深显著相关(P<0.05)。从主要成分的特征根和贡献率来看,体重、龙骨长、胸宽和胫长对主成分的贡献率最大,提示今后对四明香鸡的体型性状进行选育时至少应包括以上4个指标。
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油菜种子硫苷含量QTL定位和低硫等位基因的发掘与应用
《浙江农业学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：以中、高硫苷油菜品种‘Sollux’与‘高油605’选系‘Gaoyou’杂交F1产生的DH(doubled haploid)群体(SG,n=282)为材料,在中国和德国4种环境下对其硫苷含量进行QTL定位分析,旨在解析高硫双亲背景下的超亲分离现象,发现新的低硫苷等位基因为育种服务;并在QTL水平上通过分析硫苷含量的上位性和环境互作,揭示硫苷遗传较预期复杂的可能原因。研究结果表明,定位的8个主效QTL加性效应值在2.2~3.4μmol·g-1,纯合并存时可影响硫苷表型44μmol·g-1,可解释群体内遗传变异的约50%。其中3个主效QTL(GSLq A9-1,GSLq C2和GSLq C9)可能与前人在低硫×高硫分离群体中检测到的属同位点。GSLq A9-2,GSLq A8和GSLq C1是SG群体中新检测到的控制种子硫苷含量的QTL。通过育种手段将低硫等位基因引入目前的双低油菜品种,有望进一步降低其硫苷含量至15μmol·g-1以下,进一步提高其饼粕饲用价值;另检测到8对上位性QTL,效应值在0.50~1.85μmol·g-1,累计总效应20.62μmol·g-1,约为加性总效应的1/2,可能是造成该性状复杂遗传机理的原因之一;5个QTL的8个连锁标记,其标记基因型和性状表现型的符合率在60%~85%,可作为辅助手段应用于低硫苷育种材料筛选。
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