抗猪瘟病毒中和性单克隆抗体的制备与鉴定

刘运超; 陈玉梅; 冯丽丽; 汪磊; 王聚财; 陆东峰; 张改平; 《河南农业科学 》 2019 北大核心

摘要：为了获得具有中和活性的抗猪瘟病毒(CSFV)单克隆抗体,分别将CSFV和杆状病毒表达系统表达纯化的CSFV E2蛋白与佐剂混合后免疫BABL/c小鼠,经杂交瘤细胞融合制备抗CSFV单克隆抗体,经过多轮亚克隆和免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)筛选,成功获得5D1、8H7、9A1和13B2共4株能够稳定分泌抗CSFV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。4株单克隆抗体轻链均属于κ型,其中5D1、8H7、13B2为IgG1亚型,9A1为IgG2c亚型。间接ELISA检测结果显示,4株单克隆抗体的腹水效价在2.56×10~5～1.02×10~6;IPMA效价分别为6.40×10~4、1.28×10~5、2.56×10~5、1.28×10~5;SDS-PAGE和Western blot检测结果显示,4株单克隆抗体均能与经原核表达系统及杆状病毒表达系统获得的CSFV E2蛋白发生特异性反应;IPMA检测结果显示,4株单克隆抗体均能与CSFV发生特异性反应,而与牛流行性腹泻病毒(BVDV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒(PCV2)均无交叉反应。病毒中和试验证实,单克隆抗体13B2具有中和活性,其中和效价为1.28×10~4。综上,成功筛选出4株能够分泌抗CSFV特异性抗体的杂交瘤细胞株,其中单克隆抗体13B2具有中和CSFV感染活性。

关键词： 猪瘟病毒 E2蛋白 中和性单克隆抗体 抗体中和效价 免疫过氧化物酶单层细胞试验

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猪流感病毒NP蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

李鸽; 刘肖; 李青梅; 杨艳艳; 王彦红; 张改平; 《河南农业科学 》 2019 北大核心

摘要：为了制备猪流感病毒(SIV)核蛋白(NP)的单克隆抗体(MAb),采用差速离心法纯化H1N1和H3N2亚型SIV后交叉免疫BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,通过建立的免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)单克隆抗体检测方法进行筛选。获得3株能稳定分泌抗NP蛋白的杂交瘤细胞,分别命名为16D5、18G8和20C4,将它们诱导小鼠产生的腹水IPMA效价分别为1×10~(-6)、1×10~(-6)和1×10~(-5)。亚型鉴定结果显示,3株单克隆抗体的重链均为IgG1,轻链为κ链。3株单克隆抗体特异识别H1N1、H3N2、H5N1、H7N9和H9N2亚型流感病毒,并且与猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒和猪细小病毒无交叉反应。Western blot检测结果表明,3株杂交瘤细胞培养上清均在56 ku附近出现一条特异性的蛋白质条带,说明针对SIV的NP蛋白制备了3株单克隆抗体。综上,成功制备了针对SIV NP蛋白的3株单克隆抗体,可识别不同亚型的SIV。

关键词： 猪流感病毒 免疫过氧化物酶单层细胞试验 NP蛋白 单克隆抗体

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郑196耐大豆胞囊线虫病研究及耐病机理初探

练云; 雷晨芳; 王树峰; 王庭峰; 张辉; 卢为国; 《分子植物育种 》 2019 北大核心 CSCD

摘要：郑196是从黄淮海大豆产区选育的优良大豆品种。该品种在SCN2病圃中鼓粒情况良好;2017年,郑196在黄淮海9个试点的产量与在SCN2病圃中产量相比较,差异不显著,说明该品种具有耐SCN病的特性;利用荧光定量PCR,进一步分析来自Rhg1/Rhg4位点的4个SCN-抗性基因(Glyma18g02580, Glyma18g02590, Glyma18g02610, SHMT)在郑196及其他不同抗性水平大豆中的表达,结果表明:在受到SCN2侵染的0～25 d,4个SCN-抗性基因在抗病材料中的表达量均持续提升;在受到SCN2侵染的10 d/15 d,这4个SCN-抗性基因在郑196及感病材料中表达量达到最高点,之后表达量下降,该结果表明,郑196的耐SCN病机理不同于SCN抗性基因在抗病材料中的抗病机理,其耐病性不是由SCN抗性基因单独调控的,有可能存在其特有的耐病通路或是由抗性基因与耐病基因共同调控其耐病机制。本研究可对抗SCN种质资源创新和抵御SCN策略提供参考依据。

关键词： 大豆 郑196 大豆胞囊线虫 耐病机理

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梨树省力密植栽培技术

王东升; 吴中营; 郭献平; 宋瑜慧; 吕珍珍; 《农村.农业.农民(B版) 》 2019

摘要：本文对梨树省力密植模式的品种选择、砧木选择、授粉树配置,以及栽植株行距与行向、苗木选择、土肥水管理、花果管理、整形修剪等栽培全过程中采取省力技术进行了系统的阐述。品种与砧木选择品种选择原则:顶端优势明显,直立性强,树势较

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一株猪源产超广谱 β-内酰胺酶大肠杆菌的 分离鉴定与耐药性分析

张青娴; 徐引弟; 王治方; 朱文豪; 许峰; 王克领; 《养猪 》 2019

摘要：2018年3月,经革兰氏染色、药物敏感性试验和分子生物学试验,从河南某猪场发生仔猪腹泻的病料中,分离培养得到一株ESBLs大肠杆菌.药敏试验结果显示,该菌株对氨基糖甙类药物阿米卡星敏感,对其他喹诺酮类、四环素类、磺胺类、氯霉素类、青霉素类、头孢菌素类均耐药.扩增其CTX-M、TEM、SHV、OXA等4种常见的ESBLs耐药基因,只有TEM基因阳性,应加强产酶耐药菌的监测,以有效防治该类疾病的发生.

关键词： 猪 大肠杆菌 分离鉴定 耐药

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428份玉米自交系籽粒脱水速率的比较分析

贾腾蛟; 李平芳; 王利锋; 张艳丽; 李晶晶; 曹言勇; 马娟; 李会勇; 《植物遗传资源学报 》 2019 北大核心 CSCD

摘要：玉米籽粒的脱水速率是决定收获期籽粒含水量的关键因素。本研究同时在新乡原阳、商丘虞城和周口郸城调查428份玉米自交系在授粉后35～55 d不同时期的籽粒脱水速率及相关农艺性状。结果表明:428份自交系的籽粒脱水速率在三地均表现出丰富的遗传多样性,与穗轴含水量、苞叶含水量呈显著相关,与籽粒含水量呈极显著相关,与穗位高、株高、雄穗分枝数、抽雄期、吐丝期无显著相关,但与苞叶数及生理成熟期的相关性并不明确;在428份玉米自交系中,授粉后35～55 d籽粒脱水速率仅与授粉后35～40 d籽粒脱水速率(生理成熟期前)存在极显著相关,与50～55 d的籽粒脱水速率(生理成熟期后)无显著相关。这表明生理成熟期前的籽粒脱水速率对授粉后35～55 d籽粒脱水速率的影响更为显著。依据生育期、授粉后35～55 d籽粒脱水速率及授粉后55 d的籽粒含水量,共筛选出生育期不同、籽粒含水量低(低于25%)、籽粒脱水速率快(大于1%)的玉米自交系共计42份。

关键词： 玉米 自交系 籽粒含水量 籽粒脱水速率 相关性

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猪miR-149靶基因预测及生物信息学分析

张家庆; 武松霞; 任巧玲; 王献伟; 陈俊峰; 王璟; 白献晓; 邢宝松; 《河南农业科学 》 2019 北大核心 CSCD

摘要：通过对猪miR-149进行靶基因预测及相关生物信息学分析,探索其影响猪颗粒细胞凋亡和卵泡闭锁的作用机制。首先利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测ssc-miR-149在氧化应激组和正常组表达量的变化,通过转染miR-149 mimic并利用MTT和qRT-PCR检测细胞活性和凋亡基因的表达情况,同时预测ssc-miR-149与细胞凋亡相关基因的靶向关系;然后利用JASPAR、PROMO、TargetScan、miRanda、RNAhybrid、DAVID等软件和NCBI、miRBase、Ensembl等数据库对ssc-miR-149进行转录因子结合位点预测、保守性分析、靶基因预测、GO富集分析和KEGG信号通路富集分析。结果表明,氧化应激组ssc-miR-149的表达量极显著下调;但过表达ssc-miR-149时,能极显著提高细胞活性,并抑制H_2O_2诱导的凋亡相关基因(Caspase-3、PUMA和FAS)的表达;ssc-miR-149启动子区域具有SP1、p53等多个转录因子结合位点,其靶基因显著富集于TNF信号通路、Rap1信号通路和NOD样受体信号通路等。由此推测,ssc-miR-149受到SP1等多种转录因子调控,它可能通过抑制TNF、Rap1和NOD信号通路中的靶基因PUMA、Caspase-9和FAF-1来调控猪颗粒细胞的凋亡,进而影响猪的卵泡发育。

关键词： ssc-miR-149 靶基因 生物信息学 颗粒细胞凋亡 卵泡闭锁

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甲基-CpG结合结构域蛋白2抑制PRRSV复制的研究

赵慧君; 赵旭阳; 史西保; 陈静; 范小敏; 王丽; 李青梅; 常晓博; 邓瑞广; 张改平; 《河南农业大学学报 》 2019 北大核心 CSCD

摘要：为了研究甲基-CpG结合结构域蛋白2 (MBD2)在体外对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的复制是否有抑制作用。首先,构建MBD2的3’-UTR报告质粒,通过双荧光素酶报告结果表明MBD2是miR-373靶基因。然后用MOI=1的PRRSV感染MARC-145细胞,在24、36、48 h后分别取样,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blots试验进行检测。结果表明,PRRSV感染下调MBD2的mRNA和蛋白的表达水平。用真核表达载体pc DNA 3.1-Flag构建了MBD2的真核表达质粒pc DNA3. 1-Flag-MBD2,用pc DNA3. 1-Flag-MBD2转染MARC-145细胞,24 h后感染PRRSV,48 h后收获细胞。TCID50的试验结果表明,过表达MBD2能降低PRRSV滴度,而qRTPCR和Western blots的结果则表明MBD2能降低PRRSV的载量;相反,MBD2的siRNA试验表明,下调表达有利于PRRSV在MARC-145细胞复制。通过基因缺失试验,构建MBD2部分结构域缺失的表达质粒,最终发现MBD2的GR与MBD结构域可能在MBD2抑制PRRSV复制起关键的作用。研究结果表明,MBD2是拮抗PRRSV的宿主内源性蛋白,并发现MBD2的GR与MBD结构域可能在MBD2抑制PRRSV复制中起关键的作用,而PRRSV可能利用miR-373来下调MBD2的表达,从而逃逸宿主对病毒的清除。

关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒 甲基-CpG结合结构域蛋白2 miR-373

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日粮中添加牛至对仔兔免疫水平和血液生化指标的影响

李万利; 李胜利; 李文清; 王明发; 牛选民; 易宝弟; 陈直; 《中国养兔 》 2019

摘要：60只断奶仔兔随机分为5组,每组12只,并分为3个重复,每个重复4只仔兔。仔兔饲喂添加不同牛至含量的日粮,预试验7 d,为期21 d的正式试验后,对试验动物进行称重、采血和屠宰,并测量免疫器官的绝对值和计算器官指数。结果表明牛至能极显著降低免疫球蛋白含量(P<0.01),牛至的不同添加量对仔兔的大多数血液生化指标无显著性影响,这表明饲养兔群可能处于健康水平。

关键词： 仔兔 免疫 血液生化指标

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不同增氧水平对夏玉米生长及氮素利用的影响

杜君; 臧明; 雷宏军; 王志勇; 和爱玲; 《核农学报 》 2019 北大核心 CSCD

摘要：为探究有利于夏玉米生长和氮素利用的适宜灌溉水溶解氧浓度,本试验以夏玉米为供试作物,采用地下滴灌供水方式,以地下水灌溉为对照,设置10(OA10)、20(OA20)和40(OA40)mg·L~(-1)灌溉水溶解氧浓度3个增氧水平,研究不同增氧水平对盆栽夏玉米生长、产量和氮素利用的影响。结果表明,增氧地下滴灌显著提高了土壤溶解氧浓度,与对照相比,OA40、OA20和OA10处理土壤溶解氧浓度平均提高14.83%、9.71%和8.00%,表现为作物生长增强,作物产量和氮素利用效率均显著提高(P<0.05)。与对照相比,OA10处理的株高、叶鲜质量和叶干质量分别增加7.39%、16.30%和12.02%;OA40处理叶干质量和茎鲜质量分别增加15.82%和12.43%;OA10、OA20和OA40根系鲜质量分别增加60.00%、17.66%和52.98%,根系体积分别增加34.03%、14.56%和51.32%;OA10和OA20处理根系活力分别增加272.77%和64.44%;OA10和OA40处理产量分别增加24.46%和21.83%,水分利用效率分别提高19.10%和21.61%,百粒重分别增加17.53%和15.14%。OA10和OA40处理籽粒氮素吸收量较对照分别增加63.90%和35.27%,OA10处理籽粒氮素分配比例和氮素吸收效率分别增加21.57%和33.33%。上述差异均具有统计学意义(P<0.05)。综上,增氧地下滴灌可显著提高作物根区溶解氧浓度,促进作物生长,提高产量及氮素吸收利用,以OA10处理效果最为显著。本研究结果为增氧灌溉技术在实际生产中的合理利用提供了理论依据。

关键词： 增氧地下滴灌 增氧水平 作物生长 氮素利用

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