鸭短喙矮小综合征病毒的致弱及免疫效果的评估

程晓霞; 陈仕龙; 王劭; 肖世峰; 江丹丹; 朱小丽; 陈少莺; 《中国预防兽医学报 》 2024 北大核心 CSCD

摘要：为培育出鸭短喙矮小综合征病毒（SBDSV）弱毒株并评价其免疫效果，本研究将强毒SBDSV M15株在番鸭胚成纤维细胞（MDEF）中连续传95代（C95），每代均观察细胞病变（CPE）。结果显示，C1～C4代病毒接种的细胞均无CPE，从C5代开始出现CPE；自C50代以后，每代细胞出现CPE达80%的时间由接种后7 d逐渐缩短为5 d。采用《中国兽药典》附录中方法检测每隔10代病毒的纯净性；将每隔10代的病毒感染MDEF，通过间接免疫荧光试验（IFA）鉴定各代次病毒及测定各代次的病毒滴度(TCID₅₀)；将各代次病毒分别以不同剂量接种2日龄易感半番鸭，在21 d观察期内观察并记录各组半番鸭的临床症状、计算发病率及死亡率，于观察期结束后，对各组半番鸭称重并测量其喙长、喙宽，计算其喙长宽比等生长发育指标，评估各代次病毒对半番鸭的致病性。纯净性检测结果显示：检测的各代次病毒均无细菌、霉菌、支原体和外源病毒污染；IFA结果显示，感染不同代次SBDSV的MDEF均能被鹅细小病毒单克隆抗体（GPV MAb）识别，出现亮绿色特异性荧光，而阴性对照和其他相关病毒MAb作为一抗的MDEF中均无绿色荧光；病毒滴度测定及致病性试验结果显示，随着传代次数的增加，SBDSV的滴度逐渐升高(10^2.5TCID₅₀/0.1 mL～10^5.5TCID₅₀/0.1 mL)且趋于稳定的10^5.5TCID₅₀/0.1 mL;C10、C30和C50代病毒对雏鸭的致病性均较强，雏鸭均出现了一定的临床症状，生长发育受到影响，且雏鸭的发病率分别为87.5%（7/8）、37.5%（3/8）和25%（2/8），但均无死亡；C70代病毒组仅一只鸭出现体重略轻的症状，至C80代已失去对雏鸭的致病性，将致弱病毒命名为SBDSV MA株，将C80代致弱病毒命名为MA0株。将不同代次的致弱病毒MA0～MA15株均以5×10^5.5TCID₅₀分别接种2日龄半番鸭和樱桃谷鸭，观察21 d，评估致弱病毒的安全性。将上述不同代次的致弱病毒均以4×10～3TCID₅₀接种2日龄半番鸭，7 d后采血测定各组鸭血清中的中和抗体效价；同时各免疫组以5×10～4TCID₅₀的强毒SBDSV M15株攻毒，观察14 d，评估致弱病毒的免疫保护效果。将MA5代病毒在雏半番鸭体内连续盲传5代，评估该病毒的遗传稳定性。结果显示，不同代次致弱病毒（MA0、MA5、MA10、MA15）接种的两种雏鸭均无临床症状且生长发育均良好；各代次致弱病毒接种后7 d全部鸭血清均出现中和抗体，平均抗体效价在3.0Log2以上；攻毒后14 d，各免疫组鸭均无任何临床症状且生长发育良好，与阴性对照组鸭基本一致，且致弱病毒对雏鸭的免疫保护率均达100%;MA5代致弱病毒在雏鸭体内连续盲传5代，每代雏鸭均无任何临床症状，生长发育均正常，且各组实验鸭各器官均未出现剖检病变。上述结果表明，不同代次的SBDSV致弱株均纯净、安全性好、免疫原性和遗传稳定性较强，可作为SBDS弱毒疫苗的候选株，本研究为SBDS活疫苗的研制奠定了良好实验基础。

关键词： 鸭短喙矮小综合征病毒 弱毒株 免疫效力

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连续配施有机肥对茶园土壤细菌群落结构及功能类群的影响

颜明娟; 陈玉真; 林诚; 吴一群; 郑向丽; 王峰; 《农业环境科学学报 》 2024 北大核心 CSCD

摘要：为评估有机肥配施化肥对茶园土壤细菌群落的影响，于田间试验条件下选取了连续6年不施肥（CK）、单施化肥（CF）、单施化肥+清园处理（CFC）、有机肥配施化肥（OF）和有机肥配施化肥+种植绿肥（OFM）5个处理，采用Illumina MiSeq高通量测序技术，分析了不同施肥措施对酸性茶园土壤细菌群落多样性、群落结构、功能类群及共现性网络结构的影响。结果表明：与CK处理相比，CF处理降低了土壤pH，但显著增加了土壤碱解氮和全磷含量，而OF和OFM处理在提高土壤pH的同时增加了土壤速效养分和有机质含量。CF和CFC处理降低土壤细菌群落Alpha多样性指数，OFM处理显著增加了土壤细菌Sobs、Ace、Chao1和Shannon指数（P<0.05）。非度量多维尺度分析（NMDS分析）及相似性分析结果显示，不同施肥措施显著改变了茶园土壤细菌群落结构（R2=0.442 1,P=0.001）,OF处理富集了有益于土壤碳氮循环和抑制病原菌的物种。FAPROTAX细菌功能预测表明，茶园土壤细菌生态功能类群以化能异养、有氧化能异养、固氮作用、纤维素分解和硝酸盐还原作用功能类群为主，OF处理提高了捕食性或外寄生作用、光异养作用、光养作用、光合自养硫氧化、光能自养功能及氮循环功能细菌种群丰度。施肥措施均增加了细菌共现性网络边数、平均连通度和平均路径长度，细菌网络的规模增大，细菌群落间互相作用更复杂。细菌网络均以正相关为主（比例为58.03%～77.78%），施肥后物种间竞争作用进一步加强。施肥处理下细菌分子网络平均路径距离较长，平均聚类系数降低、细菌群落作用的响应速度变慢、群落结构稳定性提高，其中有机肥配施化肥处理细菌群落结构稳定性要优于CF处理。冗余分析和Mantel test分析结果表明，速效磷和pH是影响土壤细菌群落丰度和多样性的主要影响因子。总体而言，有机肥配施化肥改变了茶园土壤细菌群落结构，促进了土壤细菌碳氮循环功能，提高了细菌网络规模和群落互作，有机肥替代使细菌群落网络结构更加稳定，有利于构建一个健康稳定的土壤细菌群落。

关键词： 茶园土壤 有机肥配施化肥 细菌多样性 细菌群落结构 细菌功能类群

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茶树新品系'福黄1号'白茶的特征香气成分及其在加工过程中的动态变化

张磊; 俞滢; 梁子钧; 赵翊暄; 杨如兴; 《食品科学 》 2024 EI 北大核心 CSCD

摘要：为了研究高氨基酸白化突变新品系‘福黄1号’白茶的特征香气成分及其在加工过程中的动态变化，以‘福黄1号’为材料，变异来源‘福安大白茶’为对照，采用顶空固相微萃取-气相色谱-质谱联用技术对萎凋0、12、24、36、48 h和成品茶样品的香气成分及其相对含量进行鉴定与分析。结果表明：实验样品共鉴定出560种挥发性代谢物，其中萜类、杂环化合物、酯类、烃类等是以‘福黄1号’和‘福安大白茶’为鲜叶原料制成白茶的主要呈香物质。萎凋过程中，两个品种白茶的挥发性代谢物总含量逐渐上升，在萎凋48 h的时候达到最大值。相对气味活度值分析结果表明，萜品油烯、柠檬醛、1-辛烯-3-酮、大马士酮是‘福黄1号’和‘福安大白茶’的关键香气成分，水杨酸甲酯和苯甲醛是‘福黄1号’白茶的关键香气成分。1-辛烯-3-酮和柠檬醛在萎凋前期大量累积而后减少，萜品油烯、苯甲醛、水杨酸甲酯和大马士酮在萎凋过程中持续累积。萜品油烯、柠檬醛、1-辛烯-3-酮、大马士酮对‘福黄1号’和‘福安大白茶’形成花果香和甜香具有重要作用。1-辛烯-3-酮、水杨酸甲酯和苯甲醛是‘福黄1号’白茶清鲜香气形成的关键原因。本研究有助于全面了解新品系‘福黄1号’制成白茶的香气特征，为以白化茶树品种为原料制成的特色白茶产品研发提供科学依据。

关键词： 白茶 ‘福黄1号’ 白化突变 挥发性代谢物 动态变化

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澳洲香水石斛花香成分及DeTPS6的克隆与表达

孔兰; 叶秀仙; 钟声远; 林榕燕; 林兵; 钟淮钦; 《核农学报 》 2024 北大核心 CSCD

摘要：花香是评价石斛商业价值的重要性状之一。为探究石斛花香物质的形成机理，本研究采用顶空固相微萃取-气相色谱-质谱联用法（HS-SPME-GC-MS）、转录组测序和PCR技术分析了不同花期澳洲香水石斛花香物质变化及其与萜类合成关键酶基因表达间的关系。结果表明，澳洲香水石斛中共检测到17种花香物质，其中1,4-二甲氧基苯、α-蒎烯和苯乙醇的含量相对较高，盛花期的花香释放量呈现明显的昼夜节律变化和组织特异性。基于转录组数据，筛选到77个与萜类合成相关的差异表达基因（DEGs），并成功克隆DeTPS6的全长，为1 749 bp。DeTPS6蛋白具有萜类合成酶家族的保守结构域，属于TPS-b亚家族。亚细胞定位分析结果显示，DeTPS6定位于胞质。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析结果显示，DeTPS6在澳洲香水石斛的盛花期中高表达，且呈现显著的昼升夜降的变化趋势，与花香物质的含量呈正相关。本研究为DeTPS6生物学功能的探讨提供了理论基础。

关键词： 石斛 花香 顶空固相微萃取-气相色谱-质谱联用法(HS-SPME-GC-MS) 萜类合成酶基因 表达分析

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野尻链霉菌9-13对大豆炭疽病病原菌的抑制活性及作用机制

石妞妞; 连金番; 邱德柱; 居骋; 张楠; 殷越; 李本金; 杜宜新; 《植物保护学报 》 2024 北大核心 CSCD

摘要：为明确野尻链霉菌Streptomyces nojiriensis 9-13对大豆炭疽病病原菌的抑制活性及作用机制，采用对峙培养法、菌丝生长速率法和孢子萌发法分别测定该菌株对引起大豆炭疽病的平头炭疽菌Colletotrichum truncatum、胶孢炭疽菌C. gloeosporioides和C. plurivorum，以及对苯醚甲环唑和啶氧菌酯的平头炭疽菌抗药性突变体的拮抗活性、抑菌活性和对分生孢子萌发的抑制活性；观察野尻链霉菌9-13发酵液对平头炭疽菌菌丝形态和细胞结构的影响。结果表明：野尻链霉菌9-13对引起大豆炭疽病的3种病原菌平头炭疽菌、胶孢炭疽菌和C. plurivorum均具有较强的拮抗作用。野尻链霉菌9-13的10%发酵液对3种大豆炭疽菌菌丝生长的抑制率为56.67%～87.04%，且抑制活性与发酵液的浓度呈正相关。此外，野尻链霉菌9-13对苯醚甲环唑和啶氧菌酯的平头炭疽菌抗药性突变体同样具有较强的拮抗作用。野尻链霉菌9-13的10%发酵液对苯醚甲环唑和啶氧菌酯的平头炭疽菌抗药性突变体的菌丝生长抑制率分别为74.79%～77.80%和46.53%～58.33%。野尻链霉菌9-13的10%发酵液对9种供试炭疽菌分生孢子萌发的抑制率均达100.00%。野尻链霉菌9-13发酵液可以破坏平头炭疽菌菌丝的细胞膜结构，使细胞发生质壁分离。发酵液处理后平头炭疽菌菌丝表现出膜相关的红色荧光斑点。表明野尻链霉菌9-13是一株具有开发前景的生防菌株。

关键词： 大豆炭疽病 野尻链霉菌 抑菌机理 生物防治 抗性治理

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山羊IL15RA基因突变位点鉴定及其与生长性状的关联性

王本治; 王翱; 吴贤锋; 徐倩; 李文杨; 甘乾福; 肖天放; 刘远; 《福建农业学报 》 2024 CSCD

摘要：【目的】检测福清山羊和努比亚山羊群体细胞介素15受体亚基α(IL15RA–interleukin 15 receptor subunit alpha, IL15RA)基因的表达谱以及突变位点多态性，分析不同位点与山羊生长性状的相关性，进一步分析IL15RA基因对山羊生长性状的影响。【方法】随机挑选福清山羊和努比亚山羊12月龄羯羊各3只，分别采集心、肝、脾、肺、肾、头颈半棘肌、背最长肌、股四头肌和臀股二头肌共9种组织，采用qRT-PCR方法构建该基因在两个品种不同组织中的表达谱，Sanger测序检测福清山羊（n=108）和努比亚山羊（n=286）群体中IL15RA基因的SNP位点，并分析其与生长性状的相关性。【结果】（1）IL15RA基因在肌肉组织中的表达水平显著低于内脏组织（P<0.05），福清山羊背最长肌表达水平显著低于努比亚山羊（P<0.05），肺部组织表达量显著高于努比亚山羊（P<0.05）。（2）福清山羊和努比亚山羊IL15RA基因内含子3存在1个InDel位点，为g.22224＿22 225 Del A,Del22224。内含子6存在1个SNP位点，为g.33428A> G。（3）SNP-g.33428位点显著影响（P<0.05）福清山羊的体重、胸围、胸宽、胸深、尻宽等指标。（4）在福清山羊中，单倍型组合DD/AA、ID/GG为优势单倍型组合；在努比亚山羊中，单倍型组合ID/AA、II/GG为优势单倍型组合。【结论】IL15RA基因多态性与福清山羊和努比亚山羊生长性状显著相关，IL15RA基因可作为福清山羊和努比亚山羊生长性状选育的候选基因。

关键词： 山羊 IL15RA基因 单核苷酸多态性 生长发育 关联分析

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5个汉麻品种花和叶的香气成分研究

练冬梅; 姚运法; 李洲; 吴松海; 洪建基; 《安徽农业大学学报 》 2024 北大核心 CSCD

摘要：为明确不同汉麻品种花和叶的香气成分，以同一栽培条件下的5个品种（‘brosom’、‘cherry’、‘hemp7’、‘寒麻’和‘中纤1号’）雌株盛花期为材料，利用顶空-气相色谱/质谱联用技术对花、叶香气成分进行检测。结果表明5个品种花香及叶香成分各具特色。5个品种在相对含量0.1%以上的花香物质共检测出43种，‘brosom’花香成分30种，‘cherry’ 7种，‘hemp7’ 28种，‘寒麻’ 25种，‘中纤1号’ 19种。单萜类物质为花的绝对优势成分，‘cherry’花单萜类相对含量最高（98.15%），‘brosom’花倍半萜含量最高（27.51%），其中α-蒎烯是‘cherry’、‘寒麻’和‘中纤1号’绝对优势成分。5个品种共检测出51种叶香物质，‘brosom’叶香成分33种，‘cherry’ 19种，‘hemp7’31种，‘寒麻’ 26种，‘中纤1号’ 31种，‘brosom’叶中倍半萜含量（59.24%）和醇类含量（11.03%）显著高于其余4个品种，‘cherry’叶中单萜类含量（84.91%）和酯类含量（8.64%）显著高于其他品种。通过相似性和聚类分析，‘寒麻’花香与‘中纤1号’花香相似率最高（0.995），‘brosom’香气成分组成最为独特，单独一类。α-蒎烯、β-蒎烯、D-柠檬烯、石竹烯和β-金合欢烯在5个品种花、叶中的差异表达，丰富了汉麻花和叶在香气成分方面的基础知识。

关键词： 汉麻 花 叶片 香气成分 顶空-气相色谱/质谱联用

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齐整小核菌引起巴戟天白绢病的首次报道

苏海兰; 牛雨晴; 林凤芳; 朱育菁; 肖荣凤; 《植物病理学报 》 2024 北大核心 CSCD

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猪伪狂犬病毒荧光重组酶介导核酸扩增快速检测方法的建立与应用

谢明杰; 康龙滨; 陈秋勇; 吴学敏; 王隆柏; 周伦江; 刘玉涛; 《福建农业学报 》 2024 CSCD

摘要：【目的】基于荧光重组酶介导核酸扩增（Recombinase-aided amplification, RAA）技术，建立一种猪伪狂犬病毒（Porcine pseudorabies virus, PRV）快速检测方法。【方法】根据PRV gE基因序列，设计特异性引物及探针，优化扩增体系，建立PRV荧光重组酶介导核酸扩增检测方法，检验其特异性、敏感性和重复性，应用该方法对临床样品进行检测。【结果】该方法在43℃恒温反应23 min即可完成PRV核酸扩增，最低检出限为111 copies·μL-1；与猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV）、猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemicdiarrheavirus,PEDV）、猪轮状病毒（Porcinerotavirus,PoRV）、猪传染性胃肠炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus, TGEV）、猪圆环病毒2型（Porcine circovirus 2, PCV2）、猪圆环病毒3型（Porcine circovirus 3,PCV3）均无交叉反应。重复性试验显示，组内和组间变异系数均小于5%;40份临床样品检测结果显示PRV阳性率为15%(6/40)，检测结果与常规聚合酶链式反应（PCR）一致。【结论】成功建立了简便快速、高效准确的PRV实时荧光RAA检测方法，为PRV的快速检测和流行病学调查提供了新的检测手段。

关键词： 猪伪狂犬病毒 荧光重组酶介导核酸扩增 检测方法

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酒糟源酶解产物对黄嘌呤氧化酶的抑制作用及酶解工艺优化

王瑛; 林晓婕; 张甜甜; 贾淑宁; 梁璋成; 林河通; 何志刚; 《福建农业学报 》 2024 CSCD

摘要：【目的】探究不同酒糟源蛋白的酶解产物对黄嘌呤氧化酶（xanthine oxidase, XOD）活性抑制的影响，为酒糟源XOD抑制肽的研发提供理论基础和技术支持。【方法】以红曲糟（HDG）和酱香型白酒糟（BDG）为研究对象，碱性蛋白酶为水解酶，比较两者的蛋白质酶解率、酶解产物对XOD的抑制活性，以及体外模拟胃肠道消化耐受性，并选择较好的酒糟源进行酶解工艺优化。【结果】（1）HDG及BDG经碱性蛋白酶酶解后，其酶解产物均具有XOD抑制活性。其中以BDG原料的蛋白质酶解率更高，为（56.28±0.01）%，酶解产物对XOD抑制活性更强，对XOD的半抑制浓度(IC₅₀)为（7.73±0.26）mg·mL（-1），与HDG比较差异均达极显著水平（P<0.01）。（2）经胃肠消化后，2种酒糟源蛋白酶解产物的XOD抑制活性保持率均在31%以上，两者间差异不显著（P>0.05）。（3）以BDG为原料进行酶解，其优化工艺为碱性蛋白酶添加量6 000 U·g（-1）、温度50℃、pH 9.5、时间5 h，在此条件下蛋白酶解率为58.00%，酶解产物对XOD的半抑制浓度IC₅₀为5.54 mg·mL（-1）。【结论】酱香型白酒糟（BDG）酶解产物具有较好的XOD抑制活性。BDG是制备XOD抑制肽的良好蛋白来源。

关键词： 酒糟 酶解产物 酶解率 黄嘌呤氧化酶 半抑制浓度 工艺优化

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