科研产出
绿盲蝽磷脂酶C(AlPLC)的表达、纯化及酶学性质
《昆虫学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：【目的】本文在前期获得绿盲蝽Apolygus lucorum磷脂酶C基因(Al PLC)的基础上,明晰Al PLC基因在绿盲蝽不同日龄若虫中的表达特征,阐明Al PLC重组蛋白的酶学性质。【方法】qRTPCR法分析1-13日龄绿盲蝽若虫Al PLC的表达量;构建含有Al PLC基因的原核表达载体p Czn1-Al PLC;进一步将该表达载体经IPTG诱导表达和蛋白纯化,获得具有磷脂酶活性的重组蛋白;以pNPPC(P-硝基苯基磷酸胆碱)为底物测定不同温度和不同p H下的重组Al PLC蛋白酶活性,最终确定了其酶活性的最佳p H和最适温度。【结果】Al PLC mRNA在绿盲蝽测定的若虫期持续表达,在4,8,12以及13日龄若虫中表达量相对较高。重组蛋白Al PLC可在大肠杆菌Escherichia coli中表达一个约79 k D的蛋白,12%SDS-PAGE显示该蛋白主要以包涵体形式存在;经过变性,复性获得具有磷脂酶活性的纯化蛋白。在蛋白浓度为0.25 mg/m L条件下,该酶最适温度为57℃(179.54±3.96 nmol/μg·min),最适p H为8.5(374.99±2.84 nmol/μg·min)。【结论】结果表明Al PLC在绿盲蝽若虫中表达具有特异的发育历期特性,获得的重组蛋白在较高温度和碱性环境下有较高磷脂酶活性。本研究结果为后续在蛋白水平上解析Al PLC的功能奠定基础。
关键词： 绿盲蝽 磷脂酶C 原核表达 蛋白纯化 酶学特性 酶活性
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凤梨草莓与绿色草莓种间杂种一代的形态学观察及SSR分析
《果树学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：【目的】利用形态学特征与分子标记分析相结合的方法,有效地对绿色草莓与凤梨草莓杂交后代进行种间杂种真实性鉴定和遗传多样性分析。【方法】以八倍体栽培草莓品种‘宁玉’为母本、二倍体野生绿色草莓为父本进行种间杂交,获得了30个F1代株系,从40对SSR标记引物中筛选出父母本有差异条带的引物进行后代杂种真实性鉴定。采用UPGAM聚类法进行亲本与子代的聚类分析,结合形态学特征比较,评价子代遗传特征。【结果】对父母本、F1代主要形态学特征的调查分析结果表明,F1代所有植株的长势强于父本,偏母本;对数量性状中亲优势值的数据统计结果表明,后代具有一定的杂种优势。用筛选出的20对引物鉴别父母本,二者有差异,利用其进行后代分析,其中12对引物鉴定出30个后代均具有父本扩增片段,结果表明,30个杂交后代均为绿色草莓与栽培草莓的真杂种。同时,从杂种扩增的谱带来看,某些后代出现了变异,主要表现为新谱带的出现或某些谱带的消失。进一步对亲本与子代之间遗传关系进行分析,结合形态学特征与UPGMA聚类分析结果,可将子代分为3个大类。【结论】通过形态学与SSR标记技术鉴定出所有杂交后代均为种间真杂种,聚类分析表明了后代具有遗传多样性,筛选出的12对SSR引物为二倍体野生绿色草莓资源杂交后代鉴定与遗传多样性分析提供了丰富的筛选标记。
关键词： 绿色草莓 凤梨草莓 SSR标记 形态性状 杂种鉴定
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改进CERES-Rice模型模拟覆膜旱作水稻生长
《农业工程学报 》 2017 EI 北大核心 CSCD
摘要：覆膜旱作是节水稻作生产体系的重要措施之一,采用CERES-Rice模型模拟覆膜旱作水稻生长需另外考虑覆膜的增温效应和根系层土壤水分布差异及由此所带来的影响。该文借鉴部分旱地作物的相关研究成果,对原CERES-Rice模型中的积温和土壤温度、蒸发和土壤水分胁迫等模拟计算过程进行了改进,并进一步通过2个水稻生长季的田间试验予以验证。试验于2013、2014年在湖北房县进行,共涉及淹水(对照)、覆膜湿润栽培和覆膜旱作共3个水分处理,采用原模型和改进模型分别对2个生长季、2个覆膜处理的生育期、叶面积指数与地上部干物质质量的变化过程及产量进行模拟。结果表明:原CERES-Rice模型难以准确刻画覆膜旱作水稻的生长发育过程,经改进后,模拟效果大大改善,可有效反映环境变化(水分、温度)对覆膜水稻生育进程的影响和产量形成,维持生育期与产量模拟的相对误差在15%以内;覆膜水稻叶面积指数的动态模拟基本满足要求,其均方根差≤1.54 m~2/m~2、相对均方根差≤27%、建模效率≥0.85;对覆膜水稻地上部干物质质量变化过程的模拟也呈现出较好的效果,均方根差和相对均方根差分别小于1 490 kg/hm~2、16%,建模效率则高于0.95。总体而言,经改进后的CERES-Rice模型基本可满足要求,较好地用于模拟覆膜旱作水稻的生长发育规律。
关键词： 土壤 模型 数值方法 覆膜旱作水稻 CERES-Rice模型 水稻生长发育
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响应面试验优化红花籽油水酶法提取工艺
《食品科学 》 2017 EI 北大核心 CSCD
摘要：通过二水平因子分析设计和响应面试验,优化水酶法提取红花籽油工艺。以红花籽油提取率为指标,对酶的种类及添加比例、料液比、总加酶量、酶解时间、酶解温度、酶解p H值进行研究。结果表明:在木聚糖酶UTC-X50、果胶酶NCB3/ZG-040和碱性蛋白酶NCB3/ZG-002比例1∶2∶3(酶活比),总加酶量197.36 U/g,料液比1∶4(g/mL)条件下,先用细胞壁多糖酶(木聚糖酶、果胶酶)在p H 4.2、50℃酶解131 min,再用碱性蛋白酶在p H 9.8、40℃酶解60 min,此工艺条件下红花籽油提取率最高,为84.68%;采用气相色谱法分析脂肪酸组分,发现红花籽油中不饱和脂肪酸相对含量高达91.18%,其中亚油酸相对含量为78.27%,油酸相对含量为12.61%,亚麻酸相对含量为0.10%。
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日粮添加地衣芽孢杆菌对仔猪发酵床垫料理化性质及微生物群落的影响
《农业环境科学学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：试验旨在研究发酵床饲养模式下,猪日粮中添加地衣芽孢杆菌对发酵床的理化性质和微生物群落的影响。分别饲喂基础饲粮(对照组)、基础饲粮+杆菌肽锌+硫酸黏杆菌素(抗生素组)和基础日粮+地衣芽孢杆菌(益生菌组)的试验日粮。结果表明:饲粮中添加地衣芽孢杆菌能显著提高发酵床垫料蛋白酶活性(P<0.05),对垫料脲酶活性和铵态氮含量无显著影响(P>0.05);试验第15 d时,抗生素组的垫料放线菌数量显著低于对照组(P<0.05);第35 d时,益生菌组的芽孢杆菌数量显著高于其他组(P<0.05);第49 d时,益生菌组的芽孢杆菌数量显著高于抗生素组(P<0.05),抗生素组的葡萄球菌数量比对照组显著降低(P<0.05);益生菌组、抗生素组的大肠杆菌低于对照组,抗生素组的细菌总数、芽孢杆菌数量低于对照组,但差异均不显著(P>0.05),饲粮抗生素一定程度上减少了垫料益生菌,但能有效减少垫料病原菌;各处理组间,垫料微生物DGGE的香农-威纳指数、均匀度均无显著差异(P>0.05)。饲用地衣芽孢杆菌显著增加垫料中芽孢杆菌分布数量,提高垫料中垫料蛋白酶活,没有显著影响垫料细菌多样性指数,一定程度上提高粪便原位降解效率。
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乡村旅游发展的演化机理与案例研究
《江苏农业学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：本研究通过理论和实践构建了乡村旅游概念体系,探讨其演化机理,对南京市六合区竹镇镇进行案例实证研究。认为乡村旅游概念体系由观光农业、休闲农业、创意农业3个由低到高的概念组成,其演化机理是以经济发展为基础,市场需求为导向,创意为核心,产业融合为特征,驱动乡村旅游发展逐步升级、演化。结合中国乡村旅游的演化历程、发展模式和层次间关系及南京市六合区竹镇镇乡村旅游发展,认为目前乡村旅游发展存在着不平衡性,各地在构建乡村旅游模式时,应按照其内在发展规律,根据当地的经济发展水平和市场需求,因地制宜,利用当地特色,融合传统文化、科技等创意元素,建设乡村旅游项目。同时建议该镇在发展乡村旅游的过程中,加强创意人才的引进和培训,利用创意,统一策划和包装乡村旅游项目,凝炼各项目点主题,通过创意,增加项目的吸引力,驱动乡村旅游的持续发展。
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离子液体中碘催化下2-氨基苯甲酰肼和4-氧代庚二酸的反应研究
《有机化学 》 2017 SCI 北大核心 CSCD
摘要：研究了以2-氨基苯甲酰肼和4-氧代庚二酸为原料,以离子液体为绿色溶剂,在碘催化下进行的反应.结果显示,当酰肼中与酰胺基相连上的N原子没有取代基时,会顺利构建三个新环生成哒嗪并[6,1-b]吡咯并[1,2-a]喹唑啉-1,6,9(7H)-酮衍生物,并通过X单晶衍射分析验证了产物2,3,4,5-四氢化-1H,9H-哒嗪并[6,1-b]吡咯并[1,2-a]喹唑啉1,6,9(7H)-三酮(3a)的结构.而当其取代基是芳基时,由于位阻效应,哒嗪环并没有如期关环,生成四氢吡咯并[1,2-a]喹唑啉-3a(1H)-丙酸衍生物.该方法具有合成路线简洁、溶剂绿色环保、操作简便且收率较高等优点.
关键词： 2-氨基苯甲酰肼 4-氧代庚二酸 哒嗪并[6,1-b]吡咯并[1,2-a]喹唑啉-1,6,9(7H)-酮 四氢化吡咯并[1,2-a]喹唑啉-3a(1H)-丙酸 离子液体 空间位阻
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南方农区小麦秸秆与非常规饲料的组合利用
《江苏农业学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：本研究采用体外产气法,研究南方农区小麦秸秆(WS)与非常规饲料喷浆玉米皮(SCB)、大豆皮(SH)、橘子皮(OP)、苹果渣(AP)分别按0∶100、25∶75、50∶50、75∶25、100∶0比例两两组合后的体外产气特性。将采集的山羊瘤胃液与人工唾液混合并加入饲料样品,在产气瓶中恒温厌氧发酵以模拟瘤胃发酵过程。结果表明,小麦秸秆与4种非常规饲料组合后,理论最大产气量(HM)显著增加,产气速率(B)加快,产气延滞时间(Lag)缩短。WS与SCB组合的乙酸丙酸摩尔比显著低于WS的(P<0.05)。小麦秸秆与4种非常规饲料组合后,实现了饲料间营养素的互补,可有效改善小麦秸秆的发酵能力,WS∶SCB为75∶25、WS∶OP为50∶50、WS∶AP为75∶25、WS∶SH为75∶25时正组合效应最佳。小麦秸秆与喷浆玉米皮组合中随着SCB所占比例的增加丙酸摩尔浓度增加,由于丙酸转化为能量的效率高于乙酸,因此丙酸摩尔浓度增加更有利于提高饲料的转化效率,更适合家畜育肥。
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基于熵权理论的灰色关联度法在棉花耐盐性评价中的应用
《核农学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：为了综合评价棉花品种的耐盐性,于2014年在江苏南京设置砂培试验,采用150 mmol·L-1的Na Cl水溶液模拟盐胁迫,并以各指标盐害系数为依据,采用基于熵权理论的灰色关联度法进行品种筛选和指标评价。结果表明,萌发期各指标盐害系数的熵值和权重以发芽势、活力指数、下胚轴长和鲜重较高,发芽率和发芽指数次之,根长最小;苗期各指标盐害系数的熵值和权重以叶片质膜透性、根系活力和净光合速率较高,叶片伸展速率和株高次之,地上部干重和根系干重最小。棉花的耐盐性在生育期和品种间表现不同,在萌发期和苗期均表现稳定且耐盐的品种为中棉所44和中棉所75,表现稳定且中等耐盐品种有中棉所17、苏棉22号、苏棉15号和德夏棉1号,表现稳定但耐盐性较差的品种有苏棉12和泗棉3号。综上,该方法的评价结果客观准确,可以用于棉花品种耐盐性的综合评价,这为棉花耐盐品种的选育奠定了基础。
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湖羊Sp1基因CDS区克隆及其对颗粒细胞增殖和凋亡的影响
《畜牧兽医学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：旨在探讨湖羊Sp1基因序列特征及其对颗粒细胞增殖及凋亡的影响。采用克隆、测序获得湖羊Sp1基因CDS区并用生物信息学方法分析其序列特征;NJ方法构建基于Sp1氨基酸序列的系统进化树;RT-PCR方法检测Sp1基因湖羊组织表达谱;克隆方法构建湖羊Sp1过表达载体;试剂盒检测Caspase-3活性和CCK-8值;利用流式细胞术检测人卵巢颗粒细胞(KGN)凋亡率。结果表明,湖羊Sp1CDS区长2 340bp,编码779个氨基酸残基,与人的核苷酸序列和氨基酸序列的同源性分别为94.28%和95.75%;湖羊与牛的亲缘关系最近;Sp1基因在湖羊卵巢、卵泡等组织中广泛表达。本研究成功构建了湖羊Sp1过表达载体并转染人卵巢颗粒细胞(KGN);试验组Caspase-3活性显著高于对照组(P<0.05),CCK-8值检测结果相反。表明过表达Sp1基因抑制KGN-细胞增殖(P<0.05)、促进KGN-细胞凋亡(P<0.05)。Sp1基因在哺乳动物中高度保守,湖羊Sp1基因可抑制人卵巢颗粒细胞(KGN)增殖、诱导其凋亡。
关键词： Sp1基因 过表达载体构建 KGN-细胞 细胞增殖 细胞凋亡
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