科研产出
甘蔗花叶病毒VPg蛋白的原核表达及其在玉米中的免疫定位
《植物病理学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：利用RT-PCR方法从感染甘蔗花叶病毒北京分离株(SCMV-BJ)的玉米叶片中扩增得到VPg基因,将VPg基因连接到原核表达载体pET-28a上。获得的重组子转化大肠杆菌BL21(DE3)后,用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE分析表明,VPg在大肠杆菌中获得了高效表达,产生的融合蛋白分子量为30 kD。将融合蛋白纯化后免疫兔子获得了特异性较高的抗血清。ACP-ELISA测定抗血清的效价为1/4 096。利用该抗血清对健康玉米和病毒侵染的玉米茎、叶脉和叶片进行免疫金标记,结果表明在茎和叶脉的韧皮部筛管的细胞壁处有金颗粒。
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鸡传染性法氏囊病病毒VP3蛋白的原核表达及其B细胞抗原表位鉴定
《中国预防兽医学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：为鉴定鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP3蛋白中的B细胞抗原表位,本研究将IBDV的VP3基因亚克隆于pET-28a中,构建了表达重组质粒pETVP3,经IPTG诱导在E. coli BL21(DE3)中表达了重组蛋白(rVP3)。Western blot鉴定表明,rVP3能被IBDV抗血清特异性识别。同时,根据IBDVVP3的氨基酸序列,合成覆盖VP3全序列的重叠多肽,并与载体蛋白BSA藕联制备多肽人工结合抗原。Peptide-ELISA和Dot-ELISA检测结果表明VP3中有2个线性表位可以被已制备的单克隆抗体(MAb)识别,即728PRDWDRLPYLNL739和982PKPKPKPNAPTQ993;Dot-ELISA结果显示,在VP3中还存在另外4个线性多克隆抗体识别位点:818LANAPQAGSKSQRA831,851QREKD TRISKKMETMGIYFATP872,876ALNGHRGPSPGQLKYWQNTREI897和961QMKDLLLTAMEMK973。这些抗原表位的鉴定为开发IBD表位疫苗奠定了基础。
关键词： 鸡传染性法氏囊病病毒 VP3蛋白 原核表达 重叠多肽 B细胞抗原表位
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抗莱克多巴胺单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其免疫学特性鉴定
《食品科学 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：莱克多巴胺(RAC)经化学修饰引入功能基团羧基,合成半抗原RAC-戊二酸酐半醛化合物(RAC-SA),用混合酸酐法(MA)将RAC-SA偶联于牛血清白蛋白(BSA),合成人工抗原BSA-RAC,用红外(IR)、紫外(UV)和凝胶电泳(SDS-PAGE)对其进行鉴定;用BSA-RAC免疫Balb/C小鼠,细胞融合技术建立抗RAC的单克隆抗体(RAC mAb)杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备RAC mAb,并鉴定其免疫学特性。结果表明,BSA-RAC偶联成功,偶联率为24.5:1;筛选出3F10、3H12、4D8共3株杂交瘤细胞,其中最好的4D8株间接ELISA效价细胞培养上清为1:1.28×103,腹水为1:6.4×105,同种型为IgG1/κ,亲和常数(Ka)为1.65×1010L/mol,对RAC的半数抑制浓度(IC50)为5.7ng/ml,与多巴酚丁胺的交叉反应率(CR)为22.3%,与其他化合物无CR。
关键词： 莱克多巴胺 半抗原 人工抗原 单克隆抗体 免疫学特性
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春灌模式对晚播冬小麦水分利用及产量形成的影响
《生态学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：为了明确华北严重缺水区晚播冬小麦耗水规律及高产高效灌溉制度,在大田条件下设置不灌水(W0)、1水(W1,拔节水)、2水(W2,拔节水+开花水)、3水(W3,起身水+孕穗水+开花水)和4水(W4,起身水+孕穗水+开花水+灌浆水)等五种春季灌溉模式,研究了不同灌溉模式下晚播冬小麦水分利用特征及产量形成特点。结果表明,在晚播且免浇冬水条件下,春季每增加750m3/hm2的灌溉水量则减少土壤水消耗量约440m3/hm2,增加小麦总耗水量约230m3/hm2;从播种到拔节,小麦阶段耗水强度低,此生育阶段控制灌溉可显著降低总耗水量;春季第一水推迟至拔节期可提高土壤水消耗量占总耗水量比例至50%,土壤水利用率增加;开花前仅灌一次拔节水可基本满足拔节-开花期耗水需要,其群体库容量与开花前灌起身水+孕穗水模式无显著差异,且由于相对降低了开花期群体叶面积,显著增加了群体粒叶比;晚播密植条件下,单位面积穗数是群体库容形成的主要贡献因素,在保证大库容建成条件下,灌浆期灌水会降低开花前贮藏物质向籽粒再转运比例,而后期控水可显著提高开花前贮藏物质再转运比例和对库容填充的贡献率,且较高的群体库源比增强了库对源的反馈促进作用,使花后单位叶面积的物质生产能力提高,这可补偿后期水分亏缺对叶片光合生产的不利影响。连续两年试验结果显示,晚播密植条件下,春季灌拔节水和开花水可以实现高产与水分高效利用的统一。
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不同有机肥对烟田土壤微生物以及烟叶品质和产量的影响
《中国烟草学报 》 2009 CSCD
摘要：通过大田对比试验,分析了不同类型有机肥对烟田烟株根际与非根际微生物以及烟叶产质量的影响。结果表明:施用有机肥可以明显增加烟田土壤根际细菌和放线菌的数量,其中施用饼肥+腐殖酸的烟田,根际与非根际土壤中细菌数量较多,烟株生长中、后期的根际放线菌数量较高;施用氨基酸肥的烟田,烟株生长前期根际放线菌数量较高;施用有机肥没有增加土壤中真菌的数量。不同有机肥均可显著提高烟叶产量、产值和上中等烟比例,每公顷增加产量87.45～299.95kg,增加产值912.13～2717.88元,上中等烟比例提高1.0～3.9个百分点,其中又以饼肥+腐殖酸和氨基酸处理最优。有机肥明显改善了中部初烤烟叶的化学成分,总糖含量增加1.91～3.83个百分点、还原糖含量增加2.43～4.79个百分点、钾含量增加0.17～0.41个百分点,降低上部初烤烟叶的烟碱含量0.12～0.34个百分点、氯含量0.1～0.37个百分点,协调了糖碱比、氮碱比,提高了钾氯比值。
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玉米亲本间蛋白水解酶差异表达分析初探
《玉米科学 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：采用复性电泳技术,研究了杂交玉米洛玉23与亲本间蛋白水解酶在pH4.5、7.0、8.5条件下的表达差异。结果表明:①杂交F1代和双亲在蛋白水解酶的种类和酶活上差异显著,比双亲多检测到15、16、18、19、26、31、54、73、113kD9条新酶带。②45kD酶带在玉米的叶片和叶鞘中均检测到,40kD酶带仅在叶片中检测到,可能是跟叶片的发育调控和叶片中众多功能的调控有关。40kD和45kD酶带在酸性、中性、碱性条件下均检测到,以pH8.5时表达最强。③杂交F1代叶片中的蛋白水解酶在不同pH下酶带表达存在差异,pH7.0比pH4.5多检测到16、18、19、31、73kD5条新酶带;pH8.5比pH7.0多检测到15、54、218kD3条酶带,pH8.5新出现的3条酶带很可能是位于叶绿体或细胞质内的碱性蛋白水解酶,可能参与Rubisco酶的调控。
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暗间断对光周期敏感玉米CML288生长发育的影响
《西北农林科技大学学报(自然科学版) 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：【目的】研究不同光质暗间断后对玉米生长发育的影响。【方法】选用对光周期敏感的热带玉米自交系CML288为材料,保证每天9 h的自然光照。在植株发育的不同时期,于15 h暗期分别用白光、红光和远红光进行30 min曝光(NB),处理不同时间(d)后统计玉米的抽雄期、吐丝期和株高。【结果】在玉米不同发育时期开始暗间断(NB)处理,与对照相比,抽雄期和吐丝期均有不同程度滞后,株高均有所降低,且5叶期时开始处理,抽雄期和吐丝期滞后最多,两者平均较对照晚11 d;株高也最低,较对照降低了38.1 cm。红光对抽雄期和吐丝期推迟的作用最大,其次是白光,远红光的效应最小,且远红光能够部分抵消红光的效应。【结论】暗间断对CML288的最大效应发生在5叶期,CML288是实际上的短日植物;光敏素可能是暗间断影响玉米生长发育过程的光受体。
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ATP与氨基酸弱相互作用的质谱与理论计算研究
《分析测试学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：利用电喷雾质谱、荧光、核磁和理论计算研究了ATP与19种氨基酸的弱相互作用。在质谱中发现除甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)、缬氨酸(Val)外,其它氨基酸均可观测到与ATP因弱相互作用形成的复合物离子。利用不同质谱锥孔电压下复合物稳定性的不同,分析了侧链基团对ATP与19种氨基酸弱相互作用的影响。并利用荧光光谱和核磁共振波谱法研究了芳香性氨基酸与ATP的弱相互作用。结果表明,氨基酸与ATP的弱相互作用强弱顺序为:色氨酸(Trp)>苯丙氨酸(Phe)>具有R‖C—NH2的氨基酸>具有—RCOOH、—R—NH2的氨基酸>具有—RSH、—ROH的氨基酸>R为长链的氨基酸>R为短链的氨基酸。不同官能团的氨基酸与ATP的弱相互作用的模拟计算也证实了此结论,并发现氨基酸的主侧链基团与ATP分子基团间的多个分子间因氢键作用使复合物能稳定存在。这一结果将为预测蛋白与ATP结合位点及研究ATP的识别机理提供依据。
关键词： 三磷酸腺苷(ATP) 氨基酸 弱相互作用 电喷雾质谱 理论计算
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抗猪瘟病毒单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定
《华北农学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：为对猪瘟病毒(CSFV)建立更加有效的临床检测方法。用纯化的猪瘟兔化弱毒免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合。经ELISA方法筛选和3次亚克隆,最终获得了5株能稳定传代并分泌抗猪瘟病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为:C7,C9,G9,G10和4E8,其分泌的单克隆抗体(McAb)为IgG1(G9,4E8)和IgG2a(C7,C9,G10)亚类。经鉴定,5株单抗细胞培养上清效价为1∶1 600~1∶3 200,腹水效价为1∶51 200~1∶102 400。交叉试验及特异性抗原阻断试验表明,所制备的McAb与其他抗原无交叉反应性,均完全针对猪瘟病毒(CSFV)抗原决定簇,具有高度特异性。稳定性试验表明,制备的杂交瘤细胞株经连续传代25代和经3次冻存复苏后,仍能稳定分泌特异性抗体。抗CSFV McAb的成功制备,为进一步研究CSFV的生物学特性及其快速诊断方法的建立奠定了基础。
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