科研产出
基于PRLR-JAK-STAT5信号传导通路测定鹅催乳素的新方法
《畜牧兽医学报 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：旨在建立鹅催乳素(Goose prolactin,gPRL)的高灵敏度的测定方法。本研究设计出基于PRLR-JAKSTAT5信号通路的荧光素酶报告基因系统。首先克隆鹅PRLR基因CDS区序列,合成信号转导和转录激活因子5(Signal transducer and activator of transcription 5,STAT5)信号应答序列,并分别插入真核表达载体pCMV6-Entry和荧光素酶报告载体pGL3-Enhancer中,构建成为信号接收载体和信号应答载体。然后将两载体同筛选基因载体pEZX-MR03及内参载体pRL-TK共转染到HEK293T细胞中,经嘌呤霉素筛选后获得稳定转染的转基因细胞株。分别用终浓度为0、30、60、90ng·mL~(-1)的PRL刺激转基因细胞,通过qRT-PCR和双荧光素酶检测系统测定在不同PRL浓度下转基因细胞株中荧光素酶(Luciferase,Luc)基因的相对表达量和相对活性的变化。筛选出10株成功整合有全部4个转基因载体的转基因细胞株,经过不同浓度PRL刺激后,筛选出一株细胞,其荧光素酶基因表达量和酶活性均表现出随PRL浓度升高而上调的趋势。结果表明,建立的基于PRLR-JAK-STAT5信号传导系统检测鹅PRL生物活性的新方法是可行的,为准确测定家禽PRL奠定基础。
关键词： 鹅催乳素受体 信号转导 STAT5 荧光素酶报告基因 催乳素活性
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大肠杆菌O157∶H7独有基因z3276的表达及初步鉴定
《中国兽医学报 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：经BLAST分析表明,开放阅读框z3276是大肠杆菌O157∶H7独有的遗传标志性基因,编码氨基酸与大肠杆菌Ⅰ型菌毛有较高的同源性,但z3276基因编码蛋白的生物学特性尚不明确。为了明确z3276基因编码蛋白的抗原性,进一步研究其在大肠杆菌O157∶H7致病过程中的作用。采用PCR方法扩增z3276基因,去除其信号肽序列,克隆到原核表达载体pColdⅠ,转化感受态细胞BL21获得阳性重组菌,IPTG诱导表达重组蛋白,以大肠杆菌O157∶H7全菌抗血清为一抗,Western blot方法检测重组z3276蛋白抗原性。结果显示,成功构建重组菌BL21(pColdⅠ-z3276),并获得高效表达;相对分子质量33 000,占菌体总蛋白30%以上,主要以包涵体形式存在于菌体沉淀中;且与兔源全菌多克隆抗血清发生特异性反应,条带明显。
关键词： 大肠杆菌O157∶H7 标签基因 z3276基因 原核表达
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~(60)Co-γ射线辐照对蕨类植物绿色球状体成苗的影响
《核农学报 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：为开创蕨类植物新的育种方法,以鸟巢蕨、扇蕨和凤尾蕨等3种蕨类植物的绿色球状体为材料,在附加0.2mg·L~(-1)IBA的改良1/2MS培养基上,研究不同剂量的~(60)Co-γ射线辐照对绿色球状体成苗的影响。结果显示,~(60)Co-γ射线辐照剂量在60Gy时,辐照处理的鸟巢蕨绿色球状体成苗率从0Gy(CK)的98%降至33%;剂量在80Gy时,辐照处理的扇蕨和凤尾蕨绿色球状体成苗率分别从CK的100%降至38%和26%,因此60~80 Gy的~(60)Co-γ射线为辐照处理蕨类植物绿色球状体的适宜剂量。SSR分子标记测定结果表明,鸟巢蕨绿色球状体经Gy 60和80 Gy的~(60)Co-γ射线辐照诱变获得的植株与对照植株在DNA水平上存在显著差异,其中SSR-23和SSR-76可作为筛选鸟巢蕨突变体的适宜引物。本研究建立的蕨类植物绿色球状体~(60)Co-γ射线辐照诱变技术,为在离体器官水平上开展蕨类植物辐照诱变育种提供了条件。
关键词： 蕨类植物 绿色球状体 成苗 60Co-γ射线辐照 SSR分子标记
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秸秆快腐菌(Streptomyces rochei)对还田麦秸化感物质的响应
《江苏农业学报 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：为了明确秸秆快腐菌对还田秸秆化感物质的响应,提高秸秆快腐菌剂田间应用效果,以娄彻氏链霉菌(Streptomyces rochei)为快腐菌,以4种酚酸混合物为化感物质,室内模拟研究了还田麦秸腐解过程中总酚酸消长情况,进一步考察了不同浓度酚酸对Streptomyces rochei生长及纤维素酶活性的影响。结果表明:模拟麦秸还田腐解7d时,对照组(不经娄彻氏链霉菌处理)和处理组(经娄彻氏链霉菌处理)总酚酸积累达到最大值,分别为9.3μg/ml、7.0μg/ml,处理组的总酚酸积累量显著低于对照组(P<0.05),此时快腐菌数量和发芽指数(Germination index,GI)为最小值;当酚酸浓度为100 mg/L时,Streptomyces rochei的生长量和菌落直径达到最大值,低浓度酚酸能促进快腐菌生长繁殖;总酚酸浓度大于200 mg/L时,随浓度升高,酚酸对快腐菌抑制作用越明显;同样,快腐菌纤维素酶活性受酚酸影响,处理前期有一定的促进作用,后期作用不明显,此规律与对其生物数量的影响(低浓度促进生长高浓度抑制生长)不同;娄彻氏链霉菌对酚酸有一定的代谢能力,其降解能力高低受酚酸浓度与酚酸种类影响。快腐菌在对还田秸秆降解的同时,会受到其化感物质影响,因此,在筛选与使用秸秆快腐菌时,应充分考虑还田秸秆可能产生的化感效应。
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温和湿热预处理对稻秸理化特性及生物产沼气的影响
《中国环境科学 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：为考察温和湿热预处理提高秸秆产气速率的可行性,以水稻秸秆为原料,在湿热预处理温度80℃、物料含水率60%条件下,通过分析湿热处理前后稻秸理化特性及厌氧生物产气特性的变化,研究不同湿热预处理时间对秸秆预处理及产沼气效果的影响.结果表明,温和湿热预处理促进了稻秸有机物的溶出,预处理后稻秸水浸提液p H值有较大幅度下降,而COD、TVFA和乙酸含量均大幅度增加,与对照组相比,T1、T2和T3处理秸秆水浸提液COD浓度分别增加了47.19%、55.18%和60.62%,TVFA浓度分别增加了22.34%、33.98%和50.12%,乙酸浓度分别增加了19.52%、34.02%和49.37%,并且乙酸占TVFA百分比均超过85%以上,差异显著性分析表明,处理T1水浸提液各理化特性指标与对照组相比呈极显著差异,而不同温和湿热预处理之间无显著差异;对稻秸纤维素组分破坏效果明显,但不同预处理时间对秸秆木质纤维组分破坏效果影响不大;厌氧发酵产气的结果表明,温和湿热预处理可明显提高稻秸厌氧生物产沼气,发酵20d平均容积产气率可提高12.53%以上,累积TS产气率可提高36.17%以上.可见,温和湿热预处理提高秸秆厌氧生物产沼气效果是可行的,考虑到工程应用中预处理能耗成本因素,湿热预处理时间以T1处理(即6h)为宜.
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金针菇菌渣对山羊饲粮养分表观消化率及氮平衡的影响
《动物营养学报 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：本试验旨在研究不同金针菇菌渣添加比例对山羊饲粮养分表观消化率及氮平衡的影响。选用4只体重为(22.5±0.6)kg的波尔山羊×徐淮山羊(波杂山羊),采用4×4拉丁方设计,金针菇菌渣在饲粮中的添加比例分别为0(对照)、15%、25%和40%,用于替代稻草,4组饲粮营养水平接近;试验分为4期,每期15 d,其中预试期10 d,正试期5 d。结果表明:1)与对照组比较,饲粮金针菇菌渣添加比例为15%、25%和40%时对山羊的钙、磷表观消化率无显著影响(P>0.05),但能够显著提高干物质、有机物、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维以及总能表观消化率(P<0.05),且这些指标随金针菇菌渣比例的升高逐渐降低。2)与对照组比较,饲粮金针菇菌渣添加比例为15%、25%和40%时显著提高了山羊氮沉积率以及氮生物学价值(P<0.05),且这2个指标随金针菇菌渣比例的升高逐渐降低。结果提示,在饲粮中添加金针菇菌渣可以提高山羊对营养物质消化率;在本试验条件下,金针菇菌渣在山羊饲粮中的最适宜添加比例为15%~25%。
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棉花基因组数据库中CPS&KS基因的查找与分析
《江苏农业学报 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：为了探究赤霉素合成关键酶CPS&KS类基因在棉花中的分布情况,分析了已发表的拟南芥CPS&KS基因编码的蛋白质氨基酸序列,发现该类基因存在2个保守结构域,Terpene_synth和Terpene_synth_C,其在Pfam数据库中的种子文件分别为PF01397和PF03936。利用软件HMMER中的Hmmsearch程序在雷蒙德氏棉蛋白质数据库中调取72条序列,通过与拟南芥中的CPS&KS基因序列进行比对,最终在雷蒙德氏棉基因组中筛选到5个CPS&KS候选基因,这5个基因与四倍体棉花TM-1基因组At和Dt亚组的10个基因具有同源关系。通过对赤霉素敏感的棉花超矮杆突变体赤霉素处理前后转录组数据库分析比对,最终确定2个KS候选基因在转录组中表现为上调作用。
关键词： 棉花 赤霉素合成酶 柯巴基焦磷酸合酶(CPS) 内根-贝壳杉烯合酶(KS)
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去乙酰化酶SIRT1过表达对猪卵巢颗粒细胞中AMPK活性的影响
《湖南农业大学学报(自然科学版) 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：构建猪SIRT1基因全长编码区(coding region sequence,CDS)的真核表达载体,转染猪原代卵巢颗粒细胞,探讨SIRT1基因过表达对猪卵巢颗粒细胞中AMPK基因的转录及其蛋白活性的影响。测序结果表明,猪SIRT1基因的CDS区全长大小为2 229 bp,与NCBI发布的猪SIRT1基因m RNA序列(EU030283.2)一致;转染p EGFP–C1–SIRT1载体的颗粒细胞中SIRT1的m RNA表达水平和蛋白表达水平极显著高于空载体对照组(P<0.01);p EGFP–C1–SIRT1转染组细胞中,AMPK–α1和AMPK–α2基因的m RNA表达量显著高于空载体对照组,且细胞中AMPKαThr172位点的磷酸化水平显著升高(P<0.05)。结果表明,体外培养的原代猪卵巢颗粒细胞中的SIRT1基因过表达使AMPK的表达显著增加,影响AMPK的活性,推测SIRT1可能通过AMPK在猪卵巢颗粒细胞凋亡过程中发挥重要的调控作用。
关键词： 猪 卵巢颗粒细胞 沉默信息调节因子1(SIRT1) 腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)
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不同影响因子诱导葫芦花药愈伤组织
《江苏农业学报 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：为研究葫芦花药愈伤组织诱导的影响因素,筛选出最适宜诱导葫芦花药愈伤组织的培养条件,以3个葫芦品种为试验材料,观察不同低温预处理、热激处理以及激素和活性炭处理对花药愈伤组织诱导率及生长的影响。结果表明,不同基因型愈伤组织诱导率差异显著;最佳预处理方法是4℃低温预处理2 d,33℃高温热激暗培养1 d;MS培养基添加2,4-D和6-BA能诱导出愈伤组织,愈伤组织按外观和质地分为6种类型,随着激素浓度增加愈伤组织诱导率递增,添加1.5 mg/L 2,4-D+2.0 mg/L 6-BA和2.0 mg/L 2,4-D+2.0 mg/L 6-BA的培养基最有利于诱导愈伤组织;MS基本培养基不能诱导愈伤组织,活性炭抑制花药诱导愈伤组织。说明,在添加了适量浓度的2,4-D和6-BA的MS培养基上能成功诱导出葫芦花药愈伤组织。
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栽培措施对软红冬小麦加工品质的效应
《麦类作物学报 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：为了解长江中下游麦区大田栽培措施对软红冬小麦品质的影响,以宁麦9号和宁麦14为试材,于2010-2012年度研究了播期、密度和氮肥管理对小麦蛋白质含量、吹泡仪参数和糖酥饼干直径的效应。结果表明,气象条件对小麦品质性状影响较大;播期、密度和氮肥管理在不同年度对宁麦9号和宁麦14品质性状的影响不同,播期、密度和氮肥管理间的互作效应较小。2010-2011年度,播期、密度和氮肥管理等栽培措施对两个小麦品种的多数品质性状的效应不显著,仅晚播处理显著提高了宁麦9号的蛋白质含量,降低了宁麦9号和宁麦14的面团延展性。2011-2012年度,高密度和氮肥后移处理未显著影响宁麦9号的饼干直径,但显著提高了面团弹性;晚播、高密度和氮肥后移处理显著提高了宁麦14的面团弹性,降低了其饼干直径。长江中下游麦区现有的常规栽培措施不利于优质弱筋小麦的生产,应加强大面积推广品种的调优栽培技术研究。
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