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刺激隐核虫对大黄鱼致病力及中草药抑制其世代繁殖的研究

水产学报 2019 北大核心 CSCD

摘要:由刺激隐核虫寄生感染而引起的"白点病"成为大黄鱼养殖生产中危害最为严重的病害之一.为研究刺激隐核虫对大黄鱼的致病力及复方中草药HD-2对刺激隐核虫世代繁殖的抑制和阻断其感染的效果,本研究在测定了患病大黄鱼产生刺激隐核虫包囊数量、大小、孵化率和幼虫产率的基础上,测定了幼虫体外存活时间和感染力.同时,研究了HD-2中草药液对刺激隐核虫幼虫、滋养体和包囊的杀除效果以及口服复方中草药HD-2对患病大黄鱼的治疗效果.结果显示,自然患病大黄鱼体型规格与产生包囊总数呈正相关,包囊直径为(340.8±64.9)μm,平均孵化率为76.4%,每个包囊可产生280±42.5个幼虫;幼虫体外最长存活时间超过24 h,幼虫孵化20 h后便丧失感染力.幼虫感染大黄鱼7 d的LD90为9 712个幼虫/尾,LD50为4 366个幼虫/尾.HD-2中草药液可有效杀灭刺激隐核虫幼虫,分别口服含复方中草药5、10和15 g/kg饲料30 d的实验组大黄鱼在LD50攻毒剂量下其相对感染强度较对照组分别下降32.0%、44.5%和51.8%,包囊体积较对照组分别减少35.4%、36.1%和37.3%,孵化率分别下降16.3%、23.3%和27.9%;在LD90攻毒剂量下3个实验组大黄鱼的存活率分别达到40.0%、55.0%和58.3%,显著高于对照组(8.3%),且鳃丝、胸鳍上滋养体数量较对照组显著下降.口服复方中草药HD-2对自然患病大黄鱼的治疗效果表明,采集口服15 d的3组大黄鱼的包囊数量分别较对照组下降73.1%、87.7%和93.8%,鱼体死亡率分别为58.3%、36.7%和21.7%,较对照组83.3%的死亡率明显降低,且用药组大黄鱼的生理状态明显优于对照组.由此可见,口服复方中草药HD-2能有效阻断刺激隐核虫的二次感染,抑制包囊的形成和发育,降低包囊孵化率和幼虫孵化数量,从而有效抑制了虫体的世代繁殖.

关键词: 大黄鱼 刺激隐核虫 复方中草药HD-2 阻断感染 世代繁殖 致病力

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膨化饲料中蛋白水平对大规格鳙生长、消化酶活性和抗氧化能力的影响

南京农业大学学报 2019 北大核心 CSCD

摘要:[目的]本文旨在探讨饲料蛋白水平对大规格鳙(Aristichthys nobilis)生长、血液生化指标和抗氧化酶活性的影响.[方法]以鱼粉、豆粕为主要蛋白源,制备蛋白水平质量分数分别为20%、24%、28%、32%、36%和40%的6种膨化饲料饲养鳙8周.[结果]鳙的生长性能(增重率、特定生长率、饲料效率)均在饲料蛋白水平32%时达最佳值;当饲料蛋白水平在28%时,蛋白质效率和蛋白质保留率表现最好;饲料蛋白水平对鳙的肥满度具有显著影响(P<0.05),而对肝体指数和脏体指数均无显著影响(P>0.05).饲料蛋白水平对鳙前、中肠淀粉酶活性均无显著影响(P>0.05),当蛋白水平为28%时,后肠淀粉酶活性显著高于其他试验组(P<0.05);饲料蛋白水平对鳙前、中、后肠脂肪酶活性均无显著影响(P>0.05);中后肠蛋白酶活性随饲料蛋白水平的提高呈先升后降的趋势,均在蛋白水平为28%时达最高,且显著高于其他组(P<0.05),而前肠蛋白酶活性无明显变化(P>0.05).36%和40%蛋白组血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性显著高于其他组(P<0.05);32%蛋白组葡萄糖和补体C3含量显著高于其他组(P<0.05),而饲料蛋白水平对鳙血清中总甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)和溶菌酶(LZM)均无显著影响.丙二醛含量及超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性都在28%蛋白组达最佳值,但与32%蛋白组无显著差异(P<0.05).[结论]以特定生长率和蛋白质效率为指标,采用二次曲线模型分析表明鳙膨化饲料中蛋白质的适宜需求水平为29.28%~32.44%.

关键词: 蛋白质需求量 生长 消化酶 血清生化指标

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广东主要水产养殖地区气单胞菌耐药状况的调查分析

南方农业学报 2019 北大核心 CSCD

摘要:【目的】了解广东主要水产养殖地区气单胞菌的耐药状况,为评估水产养殖中的细菌耐药性风险提供科学依据。【方法】2014—2016年每年7—9月分别对广东佛山、肇庆、韶关和阳江等4市6区(县)16个养殖户共20个池塘(均为无发病史池塘)进行动物样品及环境样品采集,分离纯化气单胞菌,然后采用微量二倍稀释法测定分离菌株对14种抗菌药物的敏感性。【结果】从采集的590份样品中分离纯化获得1143株气单胞菌,鉴定为8个种,分别为维氏气单胞菌(Aeromonas veronii,占60.28%)、简达气单胞菌(A. jandaei,占18.11%)、温和气单胞菌(A. sobria,占7.96%)、嗜水气单胞菌(A. hydrophila,占7.09%)、豚鼠气单胞菌(A. caviae,占5.86%)、达卡气单胞菌(A. dhakensis,占0.35%)、A.simiae(占0.26%)和舒伯特气单胞菌(A. schubertii,占0.09%)。1143株分离菌株对14种抗菌药物的敏感性表现不一,其中,对氨苄西林的耐药率最高(97.81%),对磺胺间甲氧嘧啶和萘啶酸中度耐药(69.55%和46.72%),对其他11种抗菌药物相对敏感,耐药率均在20.00%以下。豚鼠气单胞菌的多重耐药率最高(25.37%),其次是嗜水气单胞菌(11.11%),温和气单胞菌、简达气单胞菌和维氏气单胞菌对各类抗菌药物相对敏感,多重耐药率分别为2.20%、1.93%和1.74%。畜禽粪便分离菌株的多重耐药率较高(10.53%),其次是鱼组织分离菌株(5.88%),而池塘水和底泥分离菌株相对敏感,多重耐药率分别为3.35%和1.95%。畜禽—鱼复合养殖模式和非复合养殖模式气单胞菌分离菌株均对新霉素完全敏感,但前者对其他13种药物的耐药率均高于后者;高密度养殖杂交鳢及复合养殖模式下团头鲂和麦鲮源分离菌株的耐药率较高,而一些经济价值相对较低的品种如罗非鱼和草鱼,其分离菌株多重耐药率较低。【结论】广东主要水产养殖地区气单胞菌耐药率总体水平不高,耐药程度与养殖水平、用药习惯及养殖模式等有关,磺胺类耐药性已成为水产养殖细菌病害防治过程中最突出的问题,因此,非常有必要开展水产养殖病原菌耐药性监测,了解其发展趋势及传播风险,为评估水产品质量安全及指导临床科学用药提供科学依据。

关键词: 气单胞菌 抗菌药物 耐药性 水产养殖地区 广东

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脊尾白虾肌球蛋白重链和肌球蛋白轻链基因的克隆与表达分析

中国海洋大学学报(自然科学版) 2019 北大核心 CSCD

摘要:肌球蛋白重链和肌球蛋白轻链是粗肌丝的重要组成单位,其表达量的高低影响肌纤维的组成和肌肉生长。为了解析肌球蛋白重链(Myosin heavy chain,MHC)和肌球蛋白轻链(Myosin light chain,MLC)基因在脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)生长发育中的作用,采用RACE技术,克隆了脊尾白虾EcMHC2、EcMLC1全长cDNA序列,采用实时荧光定量PCR方法分析了EcMHC2、EcMLC1在脊尾白虾不同组织、不同幼体发育时期及大小差异个体在不同生长时期的表达特征。研究显示,脊尾白虾EcMHC2基因(GenBank:MG545144)全长5 929bp,开放阅读框5 727bp,编码1 909个氨基酸;脊尾白虾EcMLC1基因(GenBank:MG545145)全长1 506bp,开放阅读框459bp,编码153个氨基酸。脊尾白虾肌球蛋白重链和肌球蛋白轻链在系统进化上与其它十足目甲壳动物的关系较近。脊尾白虾EcMHC2、EcMLC1在各组织中均有表达,但主要在肌肉组织内表达。在脊尾白虾幼体发育的不同时期,EcMHC2、EcMLC1在溞状幼体Ⅱ期的表达量显著高于溞状幼体的其它时期;仔虾第一天,EcMHC2、EcMLC1的表达量显著高于其它时期。在脊尾白虾生长的四个阶段中,大个体组EcMHC2的表达量均显著的高于小个体组;60、80和120日龄时期,大个体组的EcMLC1表达量显著的高于小个体组;在大个体和小个体组中,EcMHC2、EcMLC1在80日龄的表达量最高。脊尾白虾EcMHC2、EcMLC1在大个体组与小个体组的差异表达提示它们在脊尾白虾生长发育过程中发挥重要作用。

关键词: 脊尾白虾 肌球蛋白 生长 基因克隆 表达分析

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半滑舌鳎两种leptin基因的体外重组表达和生物活性分析

水产学报 2019 北大核心 CSCD

摘要:根据半滑舌鳎lepa和lepb编码氨基酸序列合成开放阅读框ORF肽段.利用原核表达载体pEQ30成功构建了半滑舌鳎lepa/pQE30和lepb/pQE30重组质粒,分别转化至大肠杆菌M15后,经IPTG诱导获得了N端含6个组氨酸的半滑舌鳎LepA和LepB重组蛋白.获得的重组蛋白大小均为16 ku,37°C下用0.5 mmol/L的IPTG诱导4 h后目的蛋白表达量最高,主要以包涵体形式存在.检测半滑舌鳎LepA和LepB重组蛋白浓度分别为0.3和0.25 mg/mL.Western blot免疫印迹和质谱分析表明,获得的LepA和LepB重组蛋白均具有免疫活性且序列正确.Ni2+-NTA亲和层析柱纯化可获得高纯度的半滑舌鳎LepA和LepB重组蛋白.离体孵育实验表明,获得的半滑舌鳎LepA和LepB重组蛋白能显著抑制半滑舌鳎下丘脑lepa、lepb和gnrh3 mRNA的表达水平,表明获得的重组蛋白具有明显的生物活性.研究结果可为探究leptin在半滑舌鳎生长发育中的调控机制提供重要参考.

关键词: 半滑舌鳎 leptin 原核表达 生物活性

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聚乙二醇-4000对暗纹东方鲀肠上皮电生理的影响

生态学杂志 2019 北大核心 CSCD

摘要:以暗纹东方鲀(Takifugu obscurus)为研究对象,采用Ussing chamber技术研究了聚乙二醇-4000(PEG-4000)对肠上皮开路电压、短路电流(Isc)、短路电流变化("Isc)、电导(G)、跨膜电位(TEP)的影响.结果表明:PEG-4000在肠道中6 h残留浓度为1.83 g·L-1,显著高于其在水中浓度(P<0.05),残留率达184%; PEG处理组暗纹东方鲀离体肠上皮Isc为69.20μA·cm-2,显著低于对照组(P<0.05);ΔIsc显著低于对照组(P<0.05),仅为对照组的68.57%; PEG处理组暗纹东方鲀离体肠上皮电导为24.97 m S·cm-2,显著低于对照组(36.22 m S·cm-2)(P<0.05); PEG-4000在暗纹东方鲀肠道中极易残留、不易渗透,使得肠道上皮的转运蛋白或者离子通道受阻,从而显著影响肠上皮Isc、"Isc以及电导,降低了离子的主动流动量.本研究结果为鱼类肠道电生理平台的构建提供了技术参数,该平台不仅能用于评估PEG等污染物对鱼类肠道的影响,还能用于鱼类肠道上皮细胞离子转运机制的研究.

关键词: 聚乙二醇 暗纹东方鲀 肠道 电生理 Ussing chamber

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结合线粒体D-loop序列和SSR标记对宝石鲈养殖群体遗传多样性的分析

淡水渔业 2019 北大核心 CSCD

摘要:采用线粒体D-loop序列及SSR标记分析广东4个宝石鲈(Scortum barcoo)养殖群体的遗传多样性.D-loop序列分析显示,长度为598 bp的D-loop片段上有14个多态性位点,共定义8个单倍型.4个群体单倍型多样性指数、 核苷酸多样性指数分别为0.0000~0.5435、0.00000~0.00176,表明4个群体遗传多样性水平均较低.利用11个SSR位点分析显示,4个群体期望杂合度(He)=0.396~0.516、PIC=0.320~0.420,说明各群体遗传多样性处于中低水平.虽然二种方法获得的遗传分化指数FST上存在差异,分别为0.4035(D-loop)和0.0445(SSR),但二种分析结果均显示4个广东群体的遗传多样性较低、 亲缘关系较近,因此有必要引进原种以丰富国内养殖群体的遗传多样性.

关键词: 宝石鲈(Scortum barcoo) D-loop 微卫星 遗传多样性 遗传距离

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粤东柘林湾海洋牧场渔业资源增殖效果评估

南方水产科学 2019 北大核心 CSCD

摘要:为评价粤东柘林湾海洋牧场的建设效果,以环境卫星遥感和现场调查相结合的方法,对柘林湾海洋牧场建设前(2011年8月)和建设后(2013年8月)海表温度(sea surface temperature,SST)、叶绿素a质量浓度(chlorophyll a concentration,Chl a)、总渔获物的单位捕捞努力量渔获量(catch per unit effort,CPUE)、生物多样性、底栖动物的生物量及栖息密度等进行了对比分析。结果表明,柘林湾海洋牧场建设后,海域氮磷比(N/P)接近16,Chl a质量浓度由海洋牧场建设前的7.5~12.3 mg·m~(-3)提高到建设后的10.4~16.2 mg·m~(-3)。总渔获物CPUE从2.1~5.5 kg·h~(-1)提高到5.8~14.5 kg·h~(-1)。鱼类、甲壳类、头足类和贝类的种类数分别增加了25种、3种、2种和3种,鱼类、甲壳类、头足类和贝类群落的Shannon-Wiener多样性指数(H′)分别提高了0.5、0.4、0.1和1.0,底栖动物的生物量及栖息密度均有所增加。柘林湾海洋牧场的建设在一定程度上改善了渔业生境,对渔业资源的养护和增殖具有积极作用。

关键词: 海洋牧场 资源增殖 遥感 柘林湾

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鲫鱼自然感染对虾偷死野田村病毒(CMNV)的初步研究

渔业科学进展 2019 北大核心 CSCD

摘要:对虾病毒性偷死病(Viral covert mortality disease,VCMD)是由偷死野田村病毒(Covert mortality nodavirus,CMNV)引起的一种新发疫病,近年来使中国对虾养殖业遭受了严重的经济损失。为筛查对虾池塘养殖系统中CMNV的自然宿主种类,本研究在山东潍坊一个发生VCMD的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)养殖场排水渠中采集了野生鲫鱼(Carassius auratus)样品,对其携带和感染CMNV的情况进行了系统分析。逆转录套式PCR检测结果显示,鲫鱼样品的总RNA能扩增出与预期大小一致的CMNVRNA依赖的RNA聚合酶目标基因片段。组织病理和原位杂交分析显示,鲫鱼脑部神经组织空泡化严重,脑皮层锥体细胞和二叠体颗粒细胞核固缩明显,心肌呈现典型的溶解样坏死病理变化,脑和心肌组织的病变部位均可见淡紫色CMNV探针杂交信号。透射电子显微镜观测显示,鲫鱼脑中可见神经组织空泡化,心肌组织坏死严重,CMNV样病毒颗粒占据了心肌细胞内大部分区域。本研究表明,CMNV在自然条件下能够跨越物种障碍、感染对虾养殖池塘排水渠中的野生鲫鱼,并导致靶组织明显的病理损伤,同时也提示,CMNV感染其他鱼类尤其是淡水鱼类的风险值得高度关注。

关键词: 病毒性偷死病(VCMD) 偷死野田村病毒(CMNV) 自然感染 宿主跳跃 鲫鱼

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黄浦江上游支流-圆泄泾鱼类组成及多样性季节变化

西南农业学报 2019 北大核心 CSCD

摘要:【目的】为了解经济发达地区河道鱼类组成和多样性季节变化特征。【方法】于2017年5-12月对黄浦江上游支流圆泄泾水域设置3个样点,分春、夏、秋、冬四季使用定置地笼网采集鱼类。捕获鱼类3902尾,隶属4目9科25种鱼类,主要优势种有鲫(Carassius auratus)、麦穗鱼(Pseudorasbora parva)、■(Hemiculter leucisculu)、棒花鱼(Abbottina rivulariss)和彩石鳑鲏(Rhodeus light)。利用相对多度(RD)、Shannon-Weiner多样性指数(H′)、Simpson优势度指数(D)、Margalef丰富度指数(d)和相对稀有种数(R) 5项指标分析鱼类多样性指数季节变化规律。【结果】Shannon-Weiner多样性指数(H′)变化范围为1.15~1.83;Simpson优势度指数(D)变化范围为0.54~0.79;Margalef丰富度指数(d)范围为1.37~2.06;相对稀有种数(R)变化范围为41.60%~65.27%。Shannon-Weiner多样性指数(H′)、Simpson优势度指数(D)均为秋季显著低于(P<0.05)其他3个季节;Margalef丰富度指数(d)和相对稀有种数(R)四季差异不明显(P>0.05)。【结论】结果表明该水域鱼类种群结构以麦穗鱼、棒花鱼、彩石鳑鲏等小型鱼类为主,且鱼类多样性水平显著降低。

关键词: 黄浦江 鱼类多样性 多样性指数

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