科研产出
6个绵羊群体MC4R基因CRS-PCR多态性及其与湖羊、东湖杂交羊生长性状的关联分析
《南京农业大学学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：为了探讨黑素皮质素受体4(melanoeortin receptor-4,MC4R)基因在绵羊中的多态性以及多态位点对绵羊生长性状的影响,对湖羊MC4R基因进行扩增,测序后发现9个碱基置换,选择MC4R基因548位点处C/T的单碱基突变,建立CRSPCR-RFLP分析方法,并对6个绵羊群体(湖羊、东弗里生羊×湖羊(东湖杂交羊)、中国美利奴、Romney、中国美利奴×Romney和阿勒泰)共518个个体进行检测分析。结果表明:在阿勒泰、Romney、中国美利奴×Romney群体中仅检测到CC 1种基因型,在东湖杂交羊和中国美利奴的群体中检测到CC和CT 2种基因型,而在湖羊群体中检测到CC(0.865)、CT(0.126)和TT(0.009)3种基因型。湖羊群体CT基因型2月龄体质量显著高于TT基因型(P<0.05),4月龄体长显著高于CC型(P<0.05)和TT型(P<0.01);东湖杂交羊群体中CT基因型的4月龄体高显著高于CC基因型(P<0.05)。本研究初步表明6个绵羊群体中MC4R基因的CT基因型具有生长优势。
关键词： 黑素皮质素受体4 CRS-PCR-RFLP 绵羊 生长性状
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油菜菌核病鉴定方法的比较研究
《上海农业学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：采用人工接种鉴定和田间自然鉴定的方法,鉴定了30个油菜品种对菌核病的抗性,比较了不同鉴定方法之间的差异。结果表明:苗期叶片菌丝块接种法、离体叶片菌丝块接种法、草酸浸根法和苗期叶柄接种法等4种苗期鉴定方法均能显著区分材料的抗感性,但不同方法间相关性不显著;花期菌丝块叶腋接种法和牙签茎秆接种法也能显著区分材料的抗感性,且2种方法间呈极显著正相关;苗期叶片菌丝块接种法和叶柄接种法与花期的2种鉴定方法之间相关显著;根据抗性鉴定方法比较结果,结合油菜菌核病发生规律,认为花期的2种鉴定方法能有效反映抗感品种的差异,且牙签茎秆接种法更为可靠。
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多杀霉素及其混配制剂对蜜蜂和赤眼蜂的安全性评价
《环境昆虫学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：为明确生物杀虫剂多杀霉素及其3种混剂对蜜蜂和赤眼蜂Trichogrammatid spp.的毒性,采用摄入法、接触法和药膜法分别测定4种制剂对意大利工蜂Apis mellifera L.成蜂和玉米螟赤眼蜂Trichogramma ostriniae成峰的毒性。结果表明:摄入法测定,25 g/L多杀霉素悬浮剂、4%阿维菌素·多杀霉素水乳剂、3%甲阿维·多杀霉素悬浮剂、6%甲阿维·多杀霉素水分散粒剂,对蜜蜂半致死浓度LC50(48 h)分别为5.93、1.45×10-1、3.04×10-1、4.66×10-1a.i.mg/L。25 g/L多杀霉素悬浮剂对蜜蜂摄入毒性为高毒,其余为剧毒;接触法测定,4种制剂半致死剂量LD50(48 h)分别为0.0887、0.289、0.0046、0.0053 a.i.μg/蜂,对蜜蜂的接触毒性均为高毒;药膜法测定,4种制剂对玉米螟赤眼蜂成蜂的半致死浓度LC50(24 h)分别为0.12、0.097、0.22、0.33 a.i.mg/L,安全性评价结果表明,4种制剂对玉米螟赤眼蜂成蜂均为极高风险性。
关键词： 多杀霉素 摄入法 接触法 药膜法 急性毒性 安全性评价
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水稻P450基因Oscyp71Z2增强稻瘟病抗性的机制
《中国农业科学 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：【目的】分析水稻细胞色素P450基因Oscyp71Z2在稻瘟病抗性中的作用,并解析其介导的水稻抗稻瘟病机制。【方法】根据高抗稻瘟病转hrf1水稻NJH12表达谱结果,筛选到一个表达量高达114.6倍的细胞色素P450基因Oscyp71Z2(NCBI登录号:Os07g0217600)。根据Oscyp71Z2全长编码区序列设计引物,以水稻模式粳稻品种日本晴的cDNA为模板,通过PCR扩增Oscyp71Z2全长编码区序列。将所得的cDNA序列经测序后,与双元表达载体pVec8连接,构建超量表达载体pVec8::Oscyp71Z2。采用冻融法将构建的超量表达载体pVec8::Oscyp71Z2质粒转入农杆菌菌株EHA105,并利用农杆菌转化法获得Oscyp71Z2超表达水稻。常规PCR技术检测T4代Oscyp71Z2超量表达水稻中选择标记基因潮霉素磷酸转移酶编码基因(hygromycin phosphotransferase gene,hph),并通过qRT-PCR检测超量表达水稻中目的基因Oscyp71Z2的表达量。进一步对阳性超量表达水稻(T4、T5和T6)进行稻瘟病表型鉴定,并检测植保素含量变化(T4)。【结果】RT-PCR和qRT-PCR结果显示,水稻细胞色素P450基因Oscyp71Z2在高抗稻瘟病的转hrf1水稻中有较高的表达,与表达谱数据一致。通过生物信息学分析Oscyp71Z2全长1 554 bp,含有2个细胞色素P450保守结构域,是CYP71Z2亚家族成员。将Oscyp71Z2成功连接到双元载体pVec8,利用农杆菌介导法获得Oscyp71Z2超量表达水稻。超量表达水稻株系在各生育期、株高等性状,与非转基因水稻日本晴基本一致。超量表达株系中Oscyp71Z2的表达量较野生型有显著升高。超量表达水稻的穗颈瘟抗性等级维持在1—2级,表现为抗病或者中抗,而野生型水稻的穗颈瘟等级为3—4级,表现为感病,Oscyp71Z2在水稻中超量表达显著增强了对穗颈瘟的抗性。Oscyp71Z2超量表达株系每克新鲜叶片中植保素MA和PB含量平均是328和124 ng,相对于野生型的85和42 ng·g-1新鲜叶片有显著升高。Oscyp71Z2超量表达株系中涉及到植保素MA和PB合成通路的4个关键基因的表达量较野生型有显著地升高。【结论】水稻细胞色素P450基因Oscyp71Z2通过调控植保素生物合成通路,赋予水稻稻瘟病抗性。
关键词： 水稻 P450基因Oscyp71Z2 植保素 抗病性 稻瘟病
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鹅生长激素基因的克隆、原核表达及其重组蛋白质的离子交换纯化
《江苏农业学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：为了克隆鹅生长激素基因并表达其重组蛋白质,采集生长期鹅垂体组织,并利用TRIzol快速提取的总RNA为模板,反转录为c DNA。根据鹅生长激素基因编码的成熟肽序列(Gen Bank号:AY149895.2)设计1对引物,分别在上、下游引物的5'端引入Nhe I和Hind III酶切位点。经反转录扩增获得鹅生长激素基因的编码的成熟肽全序列。通过双酶切和连接将鹅生长激素编码区插入原核表达载体pRSET-A的Nhe I和Hind III位点之间,构建重组表达质粒pRSET-g GH并转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)。转化的菌株经IPTG诱导后表达重组鹅生长激素蛋白质,分子量约为2.93×104。经过DEAE-650M弱阴离子交换树脂纯化获得较高纯度的重组鹅生长激素蛋白质。
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‘徐薯25’与‘徐22-5’杂交F_1薯块品质性状遗传倾向
《西南农业学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：以‘徐薯25’与‘徐22-5’及其正反交F1为材料,研究甘薯薯块品质性状的遗传倾向。结果表明:‘徐薯25’与‘徐22-5’F1薯块品质性状大多为多基因控制的数量性状。F1鲜薯块类胡萝卜素含量有变小的趋势,正反交遗传传递力仅分别为39.72%和62.61%,变异系数却高达119.24%和87.18%;鲜薯淀粉含量呈趋中遗传,平均遗传传递力为96.66%;F1还原糖含量介于双亲间的比例较低,超高亲与低于低亲的比例较高,出现向两级分化遗传的趋势;可溶性糖含量趋中变小变异,平均遗传传递力和变异系数分别为82.25%和21.93%;粗蛋白含量呈超中趋高遗传变异,正反交后代超高亲率分别为15.53%和16.28%。
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基于高通量测序的海滨雀稗转录组学研究
《草业学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：采用新一代高通量测序技术Illumina HiSeq 2000对海滨雀稗叶片转录组进行测序,结合生物信息学方法开展基因表达谱研究和功能基因预测。通过测序,获得了47520544个序列读取片段(reads),包含了4752054400个碱基序列(bp)信息。对reads进行序列组装,获得81220个单基因簇(unigene),平均长度1077bp,序列信息达到了87542503bp。另外从长度分布、GC含量、表达水平等方面对unigene进行评估,数据显示测序质量好,可信度高。数据库中的序列同源性比较表明,46169个unigene与其他生物的已知基因具有不同程度的同源性。海滨雀稗转录组中的unigene根据GO功能大致可分为细胞组分、分子功能和生物学过程三大类48个分支,其中有大量unigene与代谢进程、结合活性和细胞进程相关。将unigene与COG数据库进行比对,根据其功能大致可分为25类。KEGG数据库作为参考,依据代谢途径可将unigene定位到112个代谢途径分支,包括苯丙氨酸代谢通路、植物与病原物互作、植物激素生物合成和信号转导、黄酮类化合物合成、萜类骨架生物合成、脂类代谢、RNA降解等。SSR位点查找发现,从81220个unigene中共找到22721个SSR位点。SSR不同重复基序类型中,出现频率最高的为A/T,其次是CCG/CGG和AGC/CTG。本研究首次对海滨雀稗转录组进行了分析,为草坪草的分子生物学研究提供了宝贵的基因组数据来源。
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杜梨PbCBL10基因表达与启动子功能分析
《果树学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：【目的】类钙调磷酸酶B亚基蛋白(Calcineurin B-like proteins,CBLs)参与调控植物生长发育及在响应逆境胁迫过程发挥重要作用。深入探明杜梨CBLs家族成员PbCBL10在逆境下的表达模式并在转录水平上揭示表达差异,为揭示梨抗逆机制提供理论依据。【方法】以杜梨(Pyrus betulaefolia Bunge)幼苗为试材,运用实时荧光定量RT-PCR技术分析了PbCBL10在Na Cl、Ca Cl2、甘露醇(Mannitol)、聚乙二醇(PEG6000)、脱落酸(ABA)、6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)、萘乙酸(NAA)和温度诱导下的表达特性;通过基因组步移技术分离PbCBL10启动子序列,并利用生物信息学方法对其功能进行预测;构建启动子植物表达载体并通过农杆菌介导法转化烟草,研究多种胁迫及激素诱导下GUS蛋白瞬时表达情况。【结果】RT-qPCR分析表明:PbCBL10表达受Na Cl、Ca Cl2、甘露醇、PEG6000、ABA、6-BA、NAA和温度诱导;获得了长度为919bp的PbCBL10启动子序列,该序列含有典型调控元件与多个胁迫顺式元件;瞬时表达结果表明,多种胁迫与激素作用因子均可诱导PbCBL10启动子调控GUS基因的表达。【结论】PbCBL10参与多种激素和逆境胁迫过程的信号转导,在调控梨树生长发育及响应环境胁迫方面发挥重要作用。
关键词： 杜梨 胁迫响应 PbCBL10 RT-qPCR 启动子 GUS
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不同环境中秸秆/SPI改性脲醛树脂复合材料花盆降解行为
《复合材料学报 》 2014 EI 北大核心 CSCD
摘要：为研究不同环境中秸秆/大豆分离蛋白(SPI)改性脲醛树脂复合材料花盆的降解性能,采用土壤掩埋(SB)和户外曝露(OE)2种方式对试样进行降解处理,通过力学性能、质量损失和吸水性测试,热重-红外联用(TG-FTIR),SEM和EDS能谱对花盆的结构和性能进行了研究。结果显示:与对照组(US)相比,经SB和OE降解处理12个月后,花盆的抗拉强度分别下降了36.51%和19.92%,抗拉弹性模量分别下降了9.38%和3.92%,断裂伸长率分别减少了41.36%和36.61%,质量损失率分别为13.74%和4.69%,且试样吸水性均增强。TG-FTIR联用分析表明:降解处理后花盆的热解脱气条件变得温和,最大热解峰延后。SEM扫描观察发现:SB处理后花盆表面腐蚀度及形貌变化大于OE处理后的,两者表面C和N含量均显著下降,表明秸秆/SPI改性脲醛树脂复合材料花盆经SB和OE处理后均发生不同程度降解,SB处理后花盆的降解速率高于OE处理后的。
关键词： 秸秆 改性脲醛树脂 复合材料 生物降解 土壤掩埋 户外曝露
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