科研产出
实时定量PCR法预测禾谷丝核菌Rhizoctonia cerealis基因组大小
《微生物学通报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：【目的】准确测定基因组大小是进行禾谷丝核菌Rhizoctonia cerealis全基因组序列测定和拼接的基础,本研究旨在利用实时定量PCR方法预测禾谷丝核菌的基因组大小。【方法】首先克隆了禾谷丝核菌R0301菌株翻译延伸因子A基因(tef A)的部分序列,Southern杂交明确该基因在该病菌基因组中为单拷贝。以已测序立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)AG1-IA融合群菌株GD118为对照,采用实时定量PCR的方法进行了禾谷丝核菌基因组大小的预测。【结果】实时定量PCR的方法可以比较准确的测定立枯丝核菌基因组的大小,研究首次预测了禾谷丝核菌的基因组大小位于32.2–36.6 Mb之间。【结论】实时定量PCR法是一种快速和简便的预测丝核菌基因组大小的方法。
关键词： 禾谷丝核菌 基因组大小 翻译延伸因子A 单拷贝 实时定量PCR
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猪链球菌丝氨酸/苏氨酸激酶基因缺失株的构建及其致病性
《江苏农业学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：为了研究丝氨酸/苏氨酸磷激酶(STK)在猪链球菌致病过程中的作用,利用大肠杆菌-猪链球菌穿梭质粒p SET4s构建STK基因缺失株△stk。结果显示,stk基因缺失后,缺失株△stk易形成长链状结构;缺失株的半致死剂量(LD50)较亲本株高7倍,对CD1小鼠的致病能力降低;体内定植试验结果表明缺失株△stk在小鼠体内各器官的定植能力显著降低。这些数据表明STK与猪链球菌2型(SS2)的致病性相关。
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甘薯软腐病抗性鉴定方法研究及其对甘薯种质资源抗性评价
《华北农学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：通过对甘薯软腐病菌侵染甘薯的发病特征进行研究,首次建立了一种甘薯软腐病抗性鉴定的方法:每个品种取3块中等大小的薯块,经严格消毒晾干后,切薯块中部薯片,每薯块切3个薯片,每薯片厚度约为8 mm,置于放有灭菌湿润滤纸保湿的灭菌培养皿中,接种1块6 mm的甘薯软腐病菌菌碟于薯片中央,将接种好的薯片置于26℃生化培养箱中培养,期间加无菌水保湿1次。21 h后将鉴定材料取出,量取薯片发病直径,根据病斑直径进行分级,计算病情指数,进行抗感评价。该方法的建立为抗病品种的选育提供了理论依据。利用该方法对44份品种资源进行抗性评价,结果显示,鲁薯4号和广紫8号对甘薯软腐病的抗性级别为中抗;湛薯271、泰中11、渝紫1号、赣薯1号和PZJ商27E2-2对甘薯软腐病的抗性级别为感病;其余品种对甘薯软腐病的抗性级别均为高感。
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陆地棉抗黄萎病QTL的定位
《江苏农业学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：以棉花抗黄萎病品系苏抗045和感黄萎病品系苏研116为亲本构建了一个含有237个F2单株的作图群体。利用中等致病力黄萎病菌株BP2对P1、P2、F1、F2∶3家系群体进行纸钵撕底菌液醮根鉴定黄萎病抗性,计算各世代的相对病指。用2 400对SSR引物进行筛选,获得78个SSR多态性标记位点,进一步利用Join Map作图软件,构建了一张陆陆杂种遗传连锁图,包含41个标记、15个连锁群,总长为359.90 c M,覆盖棉花总基因组约7.2%。利用复合区间作图法分析,在NAU2970~MUSS138区间内检测到1个抗黄萎病QTL,可解释的表型变异为9.69%。
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基于GFP的锌指核酸酶真核细胞筛选体系的构建与验证
《畜牧兽医学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：旨在构建基于GFP报告基因的ZFN真核细胞筛选体系,为ZFN的筛选提供一种直观、准确、灵敏的方法。以pEGFP-N1为基础,去除EGFP基因的起始密码子后在多克隆位点上游插入ATG,构建筛选体系的通用载体pEGFP-ATG。将ZFN的靶序列插入到通用载体EGFP基因上游,且使起始密码子和EGFP基因处于不同ORF中,构建筛选载体pEGFP-728。将pEGFP-728转入Hela细胞中,G418筛选Hela-728细胞系,转染ZFN到Hela-728,48h内通过观察荧光判断ZFN是否有效,挑取荧光细胞进行PCR、测序验证靶序列的敲除。测序分析表明,通用载体pEGFP-ATG和含靶序列的筛选载体pEGFP-728序列完全正确;pEGFP-728转入Hela细胞中观察不到绿色荧光,说明靶序列插入后使EGFP发生移框;转染靶序列对应的ZFN到Hela-728中,48h观察到荧光的表达,说明ZFN有效;挑取6个荧光细胞单克隆,PCR、测序表明4个克隆靶序列发生缺失突变。锌指核酸酶真核细胞筛选体系构建成功。相对于其他方法本筛选体系更加准确、直观、灵敏,更适用于动植物等真核细胞的ZFN筛选,同时还可应用于TALEN和CAS9的筛选。
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高等真菌臭红菇化学成分的研究
《中草药 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：目的研究臭红菇Russula foetens子实体的化学成分。方法通过硅胶、Sephadex LH-20柱色谱分离其子实体中的化合物,运用氢谱、碳谱、二维核磁共振(1H-1H COSY、HMQC、HMBC、NOESY)、高分辨质谱、红外等波谱学方法鉴定化合物结构。结果共分离得到11个化合物,分别鉴定为6个倍半萜(1~6):8β,13-二羟基-小皮伞烷-5β-甲氧基γ-乙缩醛(1)、13-羟基-小皮伞烷-7(8)-烯-5-甲氧基γ-乙缩醛(2)、8β,13-二羟基-小皮伞烷-5-羰基γ-内酯(3)、8β,13,14-三羟基-小皮伞烷-5-羰基γ-内酯(4)、7,8,13-三羟基-小皮伞烷-5-羰基γ-内酯(5)、lactapiperanol A(6),3个甾醇(7~9):(22E,24R)-麦角甾-7,22-二烯-3,5,6-三醇(7)、麦角甾-5,7,22-三烯-3-醇(8)、3-羟基-5,8-过氧麦角甾-6,22-二烯(9),尿嘧啶核苷(10)、D-阿洛糖醇(11)。结论化合物1~4是从臭红菇中分离得到的新化合物,分别命名为红菇醛萜、红菇醛萜烯、红菇酮萜、红菇酮萜醇。化合物7、8、10、11为首次从臭红菇中分离得到。
关键词： 臭红菇 红菇醛萜 红菇醛萜烯 红菇酮萜 红菇酮萜醇 (22E,24R)-麦角甾-7,22-二烯-3,5,6-三醇
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不同贮藏温度条件下菜用大豆蔗糖代谢与相关酶活性变化
《食品科学 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：以‘新大粒1号’菜用大豆为试材,研究不同贮藏温度(1、5、10、20℃)条件下菜用大豆蔗糖代谢及相关酶活性的变化情况。结果表明,贮藏期间菜用大豆蔗糖、果糖及葡萄糖含量均呈整体下降趋势,1℃有效控制了蔗糖降解;酸性转化酶(AI)活性在第1天达到峰值后逐渐下降,不受贮藏温度影响;20℃条件下中性转化酶(NI)活性持续增加,至第4天达到最大值,其他温度组变化差异不显著(P>0.05);蔗糖合成酶(SS)活性略有降低后快速升高,至第4天达到峰值后逐渐下降;蔗糖磷酸合成酶(SPS)活性呈整体下降趋势,与蔗糖含量呈极显著正相关(P<0.01),与果糖含量呈显著正相关(P<0.05),其他酶活性与糖含量之间均无显著相关性(P>0.05)。这表明SPS可能与‘新大粒1号’菜用大豆中蔗糖降解密切相关。
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人工海水胁迫下小麦种质资源的耐盐性筛选与鉴定
《植物遗传资源学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：利用人工配制的海水筛选耐盐性较好的小麦品种,为沿海滩涂地区的小麦耐盐育种提供重要信息。本研究利用人工海水处理的方法,对363份小麦种质资源进行了芽期耐盐性初步鉴定,筛选出芽期耐盐性为1级的小麦种质28份。进一步对芽期耐盐性较好的48份小麦种质进行了苗期耐盐性鉴定,并对其耐盐指标进行隶属值模糊评价分析,从中鉴定出了2个苗期耐盐性较强的小麦种质,分别为淮麦31和红壳洋麦。依据来源的不同,发现小麦种质资源的芽期耐盐性大小依次为地方品种>育成品种>国外引进品种。小麦芽期与苗期的耐盐性相关分析表明,二者相关性极低(r=-0.0051)。
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