科研产出
一株具有插入和缺失突变特征鸭腺病毒B2毒株的分离鉴定
《福建农业学报 》 2024 CSCD
摘要：【目的】对一份疑似鸭腺病毒B2（Duck adenovirus B2, DAdV B2）感染的番鸭白肝病的病例进行确诊，并对分离株进行测序，为福建省DAdV B2流行病学研究提供参考。【方法】开展病料PCR检测，并进行病毒的分离鉴定、全基因二代测序，利用MegAlign和SnapGene软件对测序结果进行同源性及遗传进化分析，再进行动物回归试验，确定对雏番鸭的致病性。【结果】病料样本检测为DAdV B2阳性，并成功分离到一株DAdV B2毒株，命名为DAdV B2/BG48。该分离株感染鸡肝癌细胞（LMH）后细胞变大变圆、最后死亡崩解，形成特征性细胞病变；感染MDEF后细胞由长梭形变为圆形并聚集，细胞间出现空隙。测序结果表明，BG48基因组在pX基因区域中有3 bp的插入，在ORF19B基因区域有33 bp的插入，在ORF64和ORF67基因区域的交界处有42 bp的缺失，ORF67基因起始密码子往后第133位碱基为G，没有突变为终止密码子，其他编码基因与CH-GD-12-2014、实验室之前鉴定的BG27和BG18无特征性差异。动物回归试验显示，2日龄的番鸭对DAdV B2分离株BG48易感，致病率为50%，死亡率为0，发病鸭可见与自然感染病鸭相似的临床症状和病理变化。【结论】成功从番鸭白肝病病例中分离鉴定1株DAdV B2突变株BG48,BG48具有多位点插入和缺失特征，提示DAdV B2毒株容易突变，临床流行毒株复杂。本结果为DAdV B2的分子流行病学调查和遗传进化研究提供了参考。
关键词： 番鸭白肝病 鸭腺病毒B2 分离鉴定 插入和缺失 ORF67
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苦瓜品种SSR分子标记鉴定技术体系构建与应用
《中国农业科学 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：【目的】筛选出一套SSR核心引物，建立苦瓜品种分子鉴定体系和SSR指纹图谱库，为苦瓜品种鉴定、纯度鉴定和新品种权保护等提供技术支撑。【方法】选用表型差异大的8个苦瓜代表性品种，通过6%聚丙烯酰胺凝胶电泳对138对SSR引物进行初步筛选，将筛选出的引物5’端进行荧光标记。选取不同地理来源的95个苦瓜品种进行PCR扩增，经荧光毛细管电泳检测，计算各引物的区分率、PIC值、等位基因数等参数，复选一套区分率高、多态性良好的SSR引物组合。将复选得到的引物对另外113个苦瓜品种进行检测，筛选出SSR核心引物，构建苦瓜品种DNA指纹图谱库。【结果】使用聚丙烯酰胺凝胶电泳初步筛选出45对特异性强、多态性高、条带清晰的SSR引物。使用荧光毛细管电泳，从小群体至大群体最终筛选出20对SSR核心引物。核心引物分4组进行多重电泳，采集了208个苦瓜品种的DNA指纹数据。20对SSR核心引物共检测到65个等位变异，102种基因型。在此基础上，选取12个参照品种，可覆盖所有等位变异类型。经构建系统发育树分析，208个苦瓜品种被分为两类，20对SSR核心引物适用于苦瓜群体遗传多样性分析。核心引物可以将208个苦瓜品种中的202个区分开，区分率达到97.11%。使用11组亲本与杂交种材料进行亲缘关系鉴定，基本符合孟德尔遗传定律，其中2组各出现1个片段丢失的位点，可为苦瓜杂交种关系鉴定的判定阈值提供参考。【结论】本研究基于20对SSR核心引物构建的苦瓜品种分子鉴定体系鉴定效果好，应用性强，可用于苦瓜品种真实性鉴定、纯度鉴定、杂交种关系鉴定、辅助DUS测试筛选近似品种和新品种权保护等。
关键词： 苦瓜 SSR核心引物 DNA指纹图谱库 毛细管电泳
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基于滋味品质的万州区主栽茶树品种绿茶差异分析
《食品科学 》 2024 EI 北大核心 CSCD
摘要：滋味是茶叶的重要品质，为探明万州区主栽品种绿茶的滋味品质，采用感官审评和靶向检测方法评价不同品种绿茶茶汤的滋味，分析茶汤中儿茶素类、游离氨基酸类、嘌呤碱类、黄酮醇及其苷类和有机酸类5大类滋味成分含量。结果表明：4个品种茶树制备的绿茶滋味品质有明显区别，川中小叶群体种滋味浓强，‘安吉白茶’鲜爽、甘醇滋味特征明显，‘福鼎大白茶’兼具浓强、鲜爽、醇厚，‘中黄1号’滋味鲜爽但浓强不足；滋味成分分析结果表明，川中小叶群体种儿茶素类含量较高，游离氨基酸类含量较低；‘安吉白茶’游离氨基酸含量最高，‘福鼎大白茶’各类滋味成分含量均处于较高水平，‘中黄1号’滋味成分总量和水浸出物含量均较低；主成分分析结果表明，4个品种可以得到较好地区分，通过滋味贡献度分析发现，芦丁、咖啡碱等13种滋味成分具有较大贡献；差异分析结果表明，天冬氨酸、谷氨酸和茶氨酸是‘安吉白茶’和‘福鼎大白茶’鲜爽度的主要贡献物质，杨梅素-3-O-半乳糖苷和金丝桃苷是‘中黄1号’区别于其他3个品种茶类的主要滋味贡献物质，川中小叶群体种内部也有较大差异，其中C4和C5距离较近，含有较高含量的黄酮苷类物质，滋味表现出较强的收敛感。本研究对万州区主栽品种所制绿茶的品质特性进行了梳理，为万州区绿茶滋味品质改进研究提供参考。
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复合微生物菌剂对葡萄生长、品质及根际土壤环境的影响
《生物技术通报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：【目的】葡萄是我国栽培广泛的五大果树品种之一，长期过量施用化肥，破坏微生物生态，从而影响葡萄产量和品质。探究不同来源菌株的复合微生物菌剂对改善葡萄果实品质的作用。【方法】采用复合微生物菌剂[短短芽胞杆菌(Brevibacillus brevis)FJAT-0809-GLX、贝莱斯芽胞杆菌(Bacillus velezensis)FJAT-55034及短短芽胞杆菌(B.brevis)FJAT-10623]灌根，分析复合微生物菌剂对葡萄生长和果实品质及根际土壤酶活性、可培养芽胞杆菌多样性等的影响。【结果】复合微生物菌剂能够促进葡萄叶片生长，提高叶片的叶绿素a和类胡萝卜素含量及POD和PPO活性。处理组葡萄幼果的叶绿素b含量、SOD和PPO活性分别比对照组提高了100%、11.77%和66.67%。施用复合微生物菌剂能够促进葡萄提早成熟及果实转色，提升果实品质，其中，单果重比对照高出29.06%，可溶性固形物和可溶性蛋白分别比对照组提高了7.31%和94.74%，且处理组成熟果实的PPO酶活性显著高于对照组。此外，复合微生物菌剂能够显著提高土壤淀粉酶、过氧化氢酶、纤维素酶、蔗糖酶活性及芽胞杆菌的种类和数量。相关性分析表明，辣椒芽胞杆菌(Bacillus zanthoxyli)和假蕈状芽胞杆菌(Bacillus pseudomycoides)可促进葡萄叶片生长及果实品质提升。【结论】复合微生物菌剂具有改良土壤、促进葡萄生长和提升果实品质的作用。
关键词： 复合微生物 短短芽孢杆菌 贝莱斯芽孢杆菌 葡萄 品质 土壤
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澜沧江-湄公河流域干旱趋势及其对生态系统碳固定的影响
《地理学报 》 2024 EI 北大核心 CSCD CSSCI
摘要：全球变暖导致干旱事件频发,强度不断增大,对陆地生态系统碳收支产生了重大影响.本文评估了 2000-2019年澜沧江—湄公河(澜湄)流域的干旱趋势,并通过标准化异常指数(SAI)、标准化降水蒸散指数(SPEI)、潜在蒸散(PET)、饱和水汽压差(VPD)和土壤水分(Soilw)评价了干旱对该流域净生态系统生产力(NEP)的影响.结果表明:①2000-2019年澜湄流域向暖干化发展,主要受降水减少的影响,近1/4的区域遭受了中度以上干旱,其中2009-2016年间干旱事件频发,干旱热点地区位于澜沧江上游和湄公河中下游地区;②尽管澜湄流域碳汇整体上随着气候变暖而增加,但干旱年份植被光合作用降低,生态系统呼吸增加,导致2005年、2010年和2019年湄公河流域生态系统碳源汇发生转变,其中2010年干旱使得GPP减少5.68%,生态系统呼吸增加3.15%,NEP呈现重度异常;③干旱对流域NEP普遍具有滞后效应,整体滞后时间为1~4个月,面积占比为57.82%;④不同水文气候要素对NEP的影响表现出显著的空间差异,其中澜湄流域NEP与VPD整体呈负相关,云南省、缅甸西部、柬埔寨和越南南部的NEP与SPEI呈正相关,而青藏高原NEP主要受到土壤干旱的影响.干旱对澜湄流域生态系统碳固定的影响存在显著的空间异质性,量化干旱对碳固定的影响可以为气候变暖背景下澜湄流域不同地区的生态管理提供参考.
关键词： 干旱 固碳速率 净生态系统生产力 澜湄流域 标准化降水蒸散指数 地理加权回归
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猕猴桃BBX基因家族成员鉴定与转录特征分析
《生物技术通报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：[目的]BBX(B-Box)作为锌指转录因子亚家族之一,广泛参与植物的生长发育过程.本研究旨在揭示猕猴桃BBX家族的基因特征和潜在功能.[方法]从全基因组水平对猕猴桃BBX基因家族进行鉴定,分析其蛋白质理化性质、亚细胞定位、系统发育特征、蛋白质保守结构域以及同源特性等,同时研究它们在不同组织部位和果实贮藏过程的表达模式.[结果]48 个AcBBX不均匀地分布于 22 条染色体上,编码的氨基酸长度 126-515 aa,蛋白分子量 14172.09-57905.84 Da,预测有 4 种亚细胞定位;家族成员有 0-4 个内含子;启动子含有光反应、植物激素调控、逆境胁迫调控、生长发育调控等多种顺式作用元件.结合进化树及保守结构域被聚为 5 个组,基因串联重复和片段复制是家族成员扩张的主要原因.AcBBXs在猕猴桃不同器官中的表达量有差异,7 个成员在成熟果中表达量较其他部位高,3 个成员在幼果中表达较高,7 个成员在叶中表达量较高,3 个成员在花中表达量较高;果实采后贮藏过程中,3 个成员受果实外源激素调控影响表达上调且高于其他处理组,6 个成员在果实室温贮藏一周后表达上调且高于其他处理组.在果实4℃低温贮藏过程中,10个成员的表达随时间增加而上调,5个成员的表达随时间增加而下调.[结论]揭示了BBX家族不同成员在猕猴桃生长发育和果实采后贮藏期间的转录特征,为后续猕猴桃BBX基因功能验证奠定基础.
关键词： 猕猴桃 BBX转录因子 全基因组鉴定 不同组织部位 果实贮藏 转录分析
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鳗鲡疱疹病毒实时荧光重组酶辅助扩增(RAA)检测方法的建立及应用
《大连海洋大学学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：为建立鳗鲡疱疹病毒（Anguillid herpesvirus, AngHV）的实时荧光重组酶辅助扩增（recombinase-aided amplification, RAA）检测方法，根据AngHV的ORF95基因序列设计引物和探针，优化反应温度，确定反应时间，并应用该方法对采集的临床样品进行检测。结果表明：本研究中建立的实时荧光RAA检测方法的最佳反应温度为39℃,反应时间为20 min;实时荧光RAA检测方法的灵敏度、特异性及重复性评价显示，RAA检测AngHV的最低检测量为1×10~2 copies/μL,可特异性地检测AngHV,与美洲鳗鲡腺瘤病毒（American eel adomavirus, AEAdoV）、蛙虹彩病毒（Rana grylio virus, RGV）、鲤疱疹病毒（Koi herpesvirus, KHV）和对虾白斑综合征病毒（White spot syndrome virus, WSSV）均无交叉反应；实时荧光RAA检测方法的组内和组间变异系数均小于5%,表明实时荧光RAA检测方法灵敏度高、特异性强和重复性好；应用该方法对采集的25份临床样品进行检测显示，实时荧光RAA检测方法与qPCR方法的检出率一致，均为92%,高于普通PCR的检出率（76%）。研究表明，本研究中所建立的鳗鲡疱疹病毒实时荧光重组酶辅助扩增RAA检测方法快速、灵敏、可靠、准确，可用于AngHV的临床快速检测和流行病学调查。
关键词： 鳗鲡疱疹病毒（AngHV） 实时荧光RAA 快速检测
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印度梨形孢对香蕉抗旱性的影响
《应用与环境生物学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：为了解印度梨形孢（Serendipita indica）对香蕉干旱胁迫下生长的影响以及提高香蕉抗旱性的生理生化机制，对正常浇水和干旱胁迫下的幼苗进行不加S. indica和加S. indica处理，比较香蕉苗表型、各项生长指标及相关生理生化指标的差异.结果显示，当土壤含水量适宜香蕉幼苗生长时，接种S. indica的香蕉苗仅叶片数和茎粗显著高于CK组，其他各项生长指标与CK组无显著差异；干旱胁迫时，接种S. indica的各项生长指标均优于未接种S. indica组，其中接种S.indica的根数量显著多于未接种S.indica，约为2.19倍（P ＜0.01），接种S.indica的干旱症状比未接种的香蕉苗轻，出现干旱症状的时间滞缓，接种S. indica的根中过氧化氢酶（CAT）活性为未接种S. indica组的1.58倍，叶片中过氧化物酶（POD）活性、丙二醛（MDA）含量、脯氨酸（Pro）含量、可溶性糖（SS）含量、脱落酸（ABA）、叶绿素含量分别为未接种S. indica的1.78倍、50.23%、1.61倍、1.83倍、1.39倍和1.15倍，均达到极显著水平（P ＜0.01）.本研究表明干旱胁迫时，印度梨形孢主要通过提高香蕉叶片中POD活性和根系中CAT活性来降解、清除干旱胁迫产生的有害物质，减少香蕉叶片和根系中MDA的积累，促进香蕉叶片中Pro、SS合成及积累，减缓叶绿素的分解，加速ABA的合成与积累，进而提高香蕉抗旱性.（图7参34）
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鸭短喙矮小综合征灭活疫苗的研制及免疫效力评价
《中国兽医学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：鸭短喙矮小综合征（short beak and dwarfism syndrome, SBDS）是近年来在我国鸭群中流行的一种新传染病，为研制SBDS灭活疫苗，本研究将SBDSV M15株在番鸭胚增殖，收获病毒尿囊液经灭活后制备了3批灭活疫苗，并对疫苗的安全性、免疫原性及免疫效力进行检验。结果显示，3日龄樱桃谷鸭超剂量接种1.0 mL/羽，未见不良反应，表明疫苗的安全性好；3批灭活疫苗免疫20日龄雏半番鸭，免疫后28 d血清的胶乳凝集抑制试验（LPAI）抗体效价均值为4.3 log2;130日龄樱桃谷鸭种鸭免疫1次灭活疫苗后60 d血清LPAI抗体平均效价为6.9 log2;种鸭免疫后60 d所产种蛋卵黄抗体的LPAI效价均值为6.5 log2;对种鸭免疫后的3日龄子代雏鸭进行攻毒获得100%免疫保护。结果表明，本研究研制的SBDS灭活疫苗具有良好的免疫原性，种鸭1次免疫后可提供子代雏鸭保护性母源抗体，保护雏鸭度过最易感的危险窗口期，为SBDS的防控提供了有效手段。
关键词： 鸭短喙矮小综合征 灭活疫苗 抗体效价 母源抗体 免疫效力
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表面增强拉曼光谱法快速检测水产品中恩诺沙星和环丙沙星残留
《福建农业学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：【目的】建立基于表面增强拉曼光谱（surface-enhanced Raman scattering,SERS）检测水产品中恩诺沙星（enrofloxacin,ENR）和环丙沙星（ciprofloxacin,CIP）残留的方法。【方法】以水产品为研究对象，采用粒径（50±5） nm的银纳米溶胶作为SERS增强试剂，200 g·L-1 NaCl溶液作为萃取试剂，3min内判读结果，并建立了峰强度与浓度的线性回归方程，考察线性关系和检出限，对该方法进行评价。【结果】ENR和CIP的拉曼光谱特征峰为532、552、651、737、785 cm-1，其中532 cm-1归属于C-N的弯曲振动；552 cm-1归属于C-N面外弯曲振动；651 cm-1归属于C-N、C-C-F面外弯曲振动和C-C=O面内弯曲振动；737 cm-1归属于苯环上C-H的伸缩振动、C-C=O的面外弯曲振动、C-C-N弯曲振动；785cm-1归属于C-H、C-N的面外弯曲振动。通过对ENR和CIP的特征峰(737 cm-1)进行定量分析发现拉曼特征峰强度与溶液浓度在10～200 ng·mL-1内有良好的线性关系，R~2＞0.96，加标回收率为78.4%～106.7%,RSD值为2.1%～6.7%，方法检出限为10μg·kg-1。【结论】该方法准确、快速、稳定，可实现ENR和CIP在水产品中的现场快速筛查检测。
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