科研产出
中国小麦花叶病毒富含半胱氨酸蛋白多克隆抗体的制备与应用
《浙江大学学报(农业与生命科学版) 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：中国小麦花叶病毒（Chinese wheat mosaic virus, CWMV）是小麦花叶病的重要病原体之一，长期威胁小麦的产量和品质；CWMV富含半胱氨酸蛋白（cysteine-rich protein, CRP）在病毒侵染过程中具有重要而复杂的功能。为了深入研究CRP的功能和CWMV侵染机制，本研究采用反转录聚合酶链反应（reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR）从CWMV侵染的小麦叶片中获得CRP基因编码区，将其克隆至原核表达载体pET-32a上，并将重组质粒pET-CRP转化至大肠埃希菌BL21（DE3）感受态细胞中进行诱导表达；通过镍柱亲和层析法纯化CRP重组蛋白，并用作抗原免疫新西兰白兔，制备多克隆抗体。蛋白质印迹法、间接酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）和斑点ELISA分析结果显示：纯化的CRP抗体不仅具有高度的特异性，而且效价高达1∶4 096 000，是未纯化抗体效价的4倍；该抗体能识别0.5 ng抗原，显示出较高的灵敏度；在1∶120 000稀释条件下，该抗体能特异且灵敏地识别天然CRP。综上所述，本研究所制备的CRP抗体不但可用于田间CWMV病株样品的精准诊断，还可用于植物体内瞬时表达CRP的检测分析，为后续CRP检测、定量分析及其亚细胞定位等研究提供了依据。
关键词： 中国小麦花叶病毒 富含半胱氨酸蛋白 原核表达 蛋白质纯化 多克隆抗体
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基于磁固相萃取-便携式离子阱质谱的蔬菜中3种农药残留的快速检测
《农药学学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：针对当前我国典型的高风险蔬菜芹菜、韭菜和豇豆中易超标农药啶虫脒、吡虫啉及禁限用农药克百威的残留问题,基于磁固相萃取和便携式离子阱质谱构建了多农药残留现场、快速检测技术.系统优化了磁固相萃取方法的关键影响因素,最佳优化条件为:2 g蔬菜样品经20 mL水萃取后,采用 30 mg磁固相吸附剂,超声辅助吸附水溶液中目标农药 15 min,再用4mL体积分数为 0.1%的甲酸乙腈超声解吸附 3 min后进行便携式质谱分析.方法验证结果表明:啶虫脒、吡虫啉及克百威 3 种农药在芹菜、韭菜和豇豆样品基质溶液中的线性范围为0.01~0.25 mg/L(除吡虫啉在韭菜中的线性范围为 0.05~0.5 mg/L外);检出限均为 0.001~0.035 mg/L,定量限均为 0.02~0.05 mg/kg;在 0.02、0.05 和 0.2 mg/kg 3 个添加水平下时,3 种农药的回收率在 50%~71%之间,相对标准偏差在 4.2%~22%之间.该方法具有较好正确度、精密度和操作便捷等优势,在蔬菜中多种农药残留的快速定性/半定量筛查方面具有广阔的应用前景.
关键词： 磁固相萃取 便携式离子阱质谱 蔬菜 农药多残留 快速检测
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重组酶介导的油菜茎基溃疡病菌荧光核酸扩增检测体系的建立
《浙江农业科学 》 2023
摘要：本文通过重组酶介导的核酸扩增技术(recombinase aided amplification,RAA)建立一种快速检测油菜茎基溃疡病菌的方法.根据油菜茎基溃疡病菌的特异基因LMR1-D保守序列设计引物和探针,分析建立的RAA方法的灵敏度和特异性.该方法在39℃下,反应时间段(<20 min),检测下限可达10拷贝·mL-1,与油菜黑胫病菌等近似种无交叉反应,具有良好的特异性.本研究建立的RAA方法反应速度快、特异性强、灵敏度高,适用于油菜茎基溃疡病菌的快速检测.
关键词： 核酸扩增技术 油菜 茎基溃疡病菌 重组酶介导扩增 种传病害
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30份工业大麻种质资源的遗传多样性分析及指纹图谱构建
《分子植物育种 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：大麻是一种重要的经济作物,不仅可以用作纤维制品,还具有巨大的药用价值,但大麻的品种评价和鉴定工作还未系统开展.本研究通过对30个地方或栽培品种的全基因组进行重测,并开展系统发育、遗传变异、群体结构及指纹图谱构建等分析.结果显示,共获得38 963 175个SNP位点和3 629 262个Indel位点,其中SNP变异在全基因组上均匀分布.主成分分析中,栽培品种聚类PC1和PC2左下角,相比地方中品系散落在坐标系不同的位置,说明栽培品种的遗传基础相对接近.此外,栽培品种衰减速度更慢,栽培品系经历了强烈的人工选择.进一步发现,工业大麻的10条染色体上约有3.56%的位点存在受到人工选择的可能,并在5号染色体鉴定出一个显著分化的位点,此位点受到了强烈的人工选择.根据SNP标记的多样性、杂合度及连锁不平衡等指标,筛选出1 008个独立SNP,其等位基因频率在0.2~0.5之间,这些SNP标记在染色体上的分布相对均匀,且遗传频率适中,能够很好代表整个工业大麻基因组的变异,表明这些SNP适宜绘制了工业大麻品种特异指纹图谱.本研究结果对品种的高效鉴定和保护具有重要意义.
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内源胶稳定态红西柚紫薯复合饮料研制技术
《浙江柑橘 》 2023
摘要：紫薯(Ipomoea batatas L.Lam)是旋花科甘薯属缠绕草质藤本植物,其根茎营养丰富,主要成分为淀粉,同时富含不溶性膳食纤维及果胶质(有研究表明紫薯中果胶含量可高达15.23%~([1])),在提供能量的同时,对人体肠道功能尤其有明显的改善作用。薯肉呈紫色至深紫色。
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鲜食掌叶覆盆子种植技术
《林业科技通讯 》 2023
摘要：在生产实践的基础上总结了鲜食掌叶覆盆子（Rubus chingii Hu）种植的关键技术，以期为鲜食掌叶覆盆子种植供技术支撑。从生态适宜区选择、建园及定植、树体管理、主要病虫害与防治等方面总结其栽培技术，以供种植人员参考。
关键词： 掌叶覆盆子 Rubus chingii Hu 鲜食 种植技术
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基于主成分和聚类分析对切花百合品质的综合评价
《山东农业大学学报(自然科学版) 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：为探明切花百合品种间差异性和建立合理评价体系，本文以‘西伯利亚’‘索邦’‘木门’等10个切花百合品种为试验材料，测定和观察其植株形态指标和瓶插寿命，运用描述性统计、相关性、主成分和聚类分析法对10个品种进行综合评价。结果表明，不同切花百合品种间形态指标和瓶插寿命存在一定差异，且各指标变异程度不一致，其中花色泽参数a*和b*变异系数最大。通过相关性分析可知23个指标间存在不同程度的相关性。通过主成分分析，共提取了6个主成分，累计方差贡献率高达94.832%，可以反映原指标的大部分信息；10个品种综合品质排序从高到低依次为L9、L10、L7、L3、L4、L6、L5、L8、L2和L1。通过聚类分析可将10个切花百合品种分为3类，基本上与主成分分析结果相一致。该研究摸清了几个切花百合品种间的差异性，基于本试验条件下，红巴塞、巴卡迪综合品质表现优，运用主成分和聚类分析评价切花百合是可行的。这些对指导切花百合产业健康发展有一定的参考价值。
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小黄鱼中杀香鱼假单胞菌实时荧光定量PCR检测技术的建立
《浙江海洋大学学报(自然科学版) 》 2023
摘要：自2015年首次实现小黄鱼全人工育种以来，小黄鱼各项养殖技术获得了长足发展，但病害防治形势依然十分严峻，其中由杀香鱼假单胞菌引发的内脏白点病是小黄鱼养殖过程中的主要病害。为准确预判该病的爆发时间并争取有效预防，建立了一种能高效、定量检测杀香鱼假单胞菌的方法。通过在小黄鱼鱼体内分离鉴定获得杀香鱼假单胞菌菌株，将其DNA回旋酶B亚基基因（gyrB）中一特异片段与pClone007 Blunt Vector载体重组得到重组质粒，后者经过转染大肠杆菌感受态细胞、LB-氨苄西林（ampicillin,AMP）选择性培养和测序鉴定，获得能表达gyrB特异片段的阳性质粒的菌落，进一步将阳性菌落进行扩大培养、质粒提取及纯化得到质粒标准品。利用设计合成的特异引物及逐级稀释的质粒标准品建立杀香鱼假单胞菌实时荧光定量PCR检测标准曲线和反应体系。通过验证，运用该技术灵敏度达到10 copies·μL-1，并且组内和组间变异系数均小于0.82%。建立的方法实现了对小黄鱼中杀香鱼假单胞菌的快速定量检测，能够精确反映该菌在养殖水体及鱼体内的季节性变化并确立其流行规律，为小黄鱼内脏白点病的早期诊断提供了准确有效工具，同时为建立小黄鱼病害预警系统提供了良好的技术支撑。
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