科研产出
禽流感病毒M2e基因与鸡IgG Fc基因在巴斯德毕赤酵母中的融合表达
《西北农林科技大学学报(自然科学版) 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：【目的】得到融合蛋白M2e-Fc,并检测其免疫学特性,为研制禽流感通用疫苗奠定基础。【方法】根据禽流感病毒H5N1的M2e蛋白氨基酸序列设计2条长互补引物,通过重叠区互补扩增基因法扩增出目的基因M2e,然后与鸡IgGFc片段基因一起克隆入毕赤酵母表达质粒中,构建酵母表达载体。将阳性质粒线性化后电转化入感受态毕赤酵母X-33中,再经甲醇诱导后,通过Tricine-SDS-PAGE电泳及Western-blotting鉴定融合蛋白。之后用其免疫非免疫鸡,检验其免疫原性。【结果】成功构建了表达M2e和Fc融合蛋白的酵母表达载体pPICZαA-M2-Fc,并通过Zeocin筛选及PCR鉴定出了阳性重组子;阳性重组子经甲醇诱导后得到融合蛋白,Tricine-SDS-PAGE电泳及Western-blotting鉴定证实,融合蛋白得到正确表达,并且可以与M2e阳性血清反应。动物免疫试验证实,该融合蛋白可以诱导鸡产生抗M2e抗体,具有良好的免疫原性。【结论】融合蛋白M2e-Fc在巴斯德毕赤酵母表达系统中得到了成功表达,该融合蛋白具有较好的免疫原性,为后期进行其他免疫试验奠定了基础。
关键词： 禽流感病毒 M2e基因 鸡IgGFc基因 巴斯德毕赤酵母
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苏云金芽孢杆菌kurstaki亚种几丁质内切酶基因的生物信息学分析
《江苏农业学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：以苏云金芽孢杆菌库斯塔克亚种(Bacillus thuringiensissubspkurstaki)基因组DNA为模板,利用1对特异性引物通过Touchdown PCR方法扩增了长为2 576 bp的几丁质酶kchi基因序列(GenBank登录号:AY189740)。生物信息学分析发现:该序列包含1个完整的开放阅读框,编码688个氨基酸,推测是分子量约为75 820。等电点pI=5.89的几丁质酶前体。序列和结构比较分析结果表明:Kchi属于几丁质内切酶,包括几丁质酶催化区、粘蛋白Ⅲ型同源区和几丁质结合区3个结构域,在N端还有1个分泌信号肽。除与Bt巴基斯坦亚种几丁质酶同源性较低(相似性为61.3%)外,与Bt其他亚种的同源性都较高(≥92.0%)。
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一株新的类猪圆环病毒因子的核苷酸全序列和体外感染性
《中国科学(C辑:生命科学) 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：在中国猪血清中分离到一新因子,命名为P2.P2为闭合环状基因组,全长993个核苷酸.序列分析表明其与猪圆环病毒密切相关.随后对构建的P2因子分子克隆的体外感染性进行了研究.结果表明,在转染PK-15细胞后,只有P2因子的双拷贝串联分子克隆具有感染性,表现为可在细胞的胞浆和胞核中形成包涵体,胞浆包涵体为圆形或不规则形,直径0.1~0.4μm;胞核包涵体有两种类型,一种为小而圆、直径约0.1μm的包涵体,另一种为大而呈六角性的包涵体,直径约为0.5~1.4μm胞浆包涵体和胞核包涵体都没有外膜,相比较而言,后者有更高的电子密度.将转染后的细胞连续传代,对第5代细胞培养物抽提DNA,进行PCR,结果也只有在转染P2因子双拷贝串联分子克隆的细胞培养物中检测到P2的DNA.而转染空载体、P2因子单分子克隆和未转染的PK-15细胞微观结构未见变化,在第5代细胞培养物中也未能检测到P2的DNA.同样,只有在转染P2因子双拷贝串联分子克隆的细胞和随后传代的细胞中能检测到P2抗原.这是首次报道如此小基因组的类猪圆环病毒P2的全序列和其在体外具有感染性.
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基于Web与模拟模型的水稻栽培数字化设计
《农业工程学报 》 2008 EI 北大核心 CSCD
摘要：为了集成作物生长模型、决策支持系统与Web技术,以实现作物栽培数字决策技术的网络化。以武运粳7号、扬稻6号、粤优948及南粳41为供试材料,2005年在江苏省农科院试验区进行了不同基肥田间试验,采集和更新了品种参数;采用SQLServer2000建立水稻品种、土壤及气象资料数据库;采用VS.Net进行了水稻生长模拟、决策支持系统与Web的集成和页面设计,包括登录、系统主界面、品种参数管理、地点气象数据管理、参数调整以及水稻栽培决策等功能。基于Web与模拟模型的水稻栽培数字化设计符合TCP/IP协议,可在服务器上(IIS5.0)安装、运行和在任何Internet浏览器上调用,它继承了水稻栽培模拟优化决策系统的机理性、普适性和实用性,将水稻生长模型与Web技术相结合,形成了水稻模拟优化决策的网络平台,使水稻主产区农业技术人员通过Internet因地、因种、因时制定具有动态、目标和数字化特征、可下载的播前优化方案,提供当年调控建议,对作物生长模型的网络化具有重要意义。
关键词： Web 模拟模型 水稻栽培 数字化设计 决策支持系统
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番茄晚疫病菌同工酶基因型鉴定与分析
《江苏农业学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：以91个番茄晚疫病菌菌株为材料,利用醋酸纤维素薄膜电泳技术,对其6-磷酸葡萄糖异构酶(Gpi)和肽酶(Pep)进行基因型鉴定与分析。结果共发现4种Gpi类型:100/100/111、86/100/111、86/100和100/100;两种Pep类型:100/100和92/100。其中100/100/111和100/100分别为病样采集区主流的Gpi与Pep类型,在所有病样采集区均有发现,各占全部鉴定菌株数量的85.7%和94.5%。醋酸纤维素薄膜电泳技术可以快速、准确应用于晚疫病菌同工酶基因型鉴定。
关键词： 番茄 晚疫病菌 6-磷酸葡萄糖异构酶 肽酶 基因型 鉴定 分析
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槜李等15个李品种S基因型鉴定及其多态性分析
《果树学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：利用李属S-RNase基因特异性引物,对15个供试李品种进行PCR扩增,共获得30个目的条带。对这些目的条带进行测序鉴定出15个李品种的S基因型。通过与NCBI中利用BLASTn与GenBank+EMBL+DDBJ+PDB等数据库中的序列比对,结果表明,其中9个为新S-RNases基因,对9个新S-RNases核苷酸序列进行分析发现,位于高变区内的内含子大小为141～1758bp,其同源性为33.9%(S-18～S-19)～81.6%(S-20～S-21),表现出丰富的长度和序列多态性;编码区的核苷酸序列比对结果,其同源性为73.3%(S-16～S-19)～91.7%(S-17～S-22);其推导氨基酸序列相似性为67.3%(S-16～S-19)～89.1%(S-17～S-22);包含李属S-RNase一级结构所共有的C2、C3保守区和高变区(RHV)。系统进化分析表明,9个新S-RNases与李属其它树种S-RNases聚类在一起,归属为李亚科(Prunoideae)。
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噬菌体展示技术在农药等小分子检测中的应用
《江苏农业学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：噬菌体展示技术是将外源蛋白基因与噬菌体表面特定蛋白基因在其表面融合表达,用于筛选和改造功能性多肽的生物技术,具有库容量大,结合特异性强等特点,现已被广泛应用于生命科学的许多领域。本文在系统介绍了噬菌体展示技术及其载体系统发展的基础上,对该技术在农药等小分子化合物免疫检测中的应用进行了综述。
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应用气相色谱仪分析油菜脂肪酸含量
《江苏农业学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：运用Agilent 6890N GC对具有不同脂肪酸组分的油菜样品,采用半粒、单粒和混合样3种测试方法进行分析,建立适合于油菜籽各脂肪酸组分含量的定量测试程序。结果表明:在本研究设定的分析条件下,二阶程序升温条件下对油菜7种主要脂肪酸的检测效果好于恒温条件,而测试效率则恒温条件高于二阶程序升温条件下。重复性和再现性试验结果显示:在二阶程序升温和恒温条件下半粒种子、单粒种子和混合样3种方法测试的脂肪酸含量大于5%的组分和小于5%的组分重复间绝对误差、相对误差均小于国家标准,表明这3种方法重复性、再现性好,能满足不同品质材料、不同检测要求的全脂肪酸组分的定量分析需要。
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作物染色体片段置换系研究进展
《江苏农业学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：染色体片段置换系除含有供体基因组中的1个或几个片段外,其余背景与受体亲本完全相同,是用于QTL鉴定、精细定位、图位克隆、互作分析和品种改良等的理想材料。本文概述了作物染色体片段置换系的构建、特点、类型及在作物遗传育种中的应用价值。
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不同量秸秆机械化还田对稻麦产量及土壤碳活性的影响
《江苏农业学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：通过在江苏省环太湖地区开展的机械化稻麦秸秆还田试验,对秸秆还田后水稻、小麦的产量与土壤碳库质量的动态变化进行了研究。结果表明,连续秸秆还田3年,小麦苗期的平均株高、地上部和根系生物量、总生物量分别比对照高5%、16%、13%、16%。水稻、小麦产量比对照分别增产180~810 kg/hm2、150~480 kg/hm2,增产幅度分别为2.1%~8.6%、5.1%~13.0%。秸秆还田改善了土壤有机质状况,且有机质各组分对秸秆归还的响应有差异,以秸秆全量还田处理的活性有机质增加最多,为初始土壤的2.5倍,总有机质增加最少,增幅为初始土壤的26%。与初始土壤相比,半量、全量秸秆还田处理的土壤碳库管理指数(CPMI)分别增加了1.52~1.94、1.22~1.99。与对照土壤相比,半量、全量秸秆还田后耕层土壤的碳库管理指数(CPMI)分别提高了67.7%、72.0%。说明秸秆全量还田对于提高耕层土壤碳库管理指数(CPMI)更有效。水稻季的耕层土壤碳库管理指数(CPMI)显著低于小麦季的耕层土壤碳库管理指数(CPMI)。稻麦产量与土壤有机质各组分的相关性分析结果表明,作物产量与活性有机质及碳库管理指数(CPMI)的相关性要好于有机质,因此,从土壤生产力的角度出发,短期内活性有机质与土壤碳库管理指数(CPMI)比总有机质有更好的指示与评价作用。
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